一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及免疫检测领域，具体涉及一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，试剂盒包括检测卡和样品裂解液，检测卡的内部设有试纸条，试纸条包括样品垫、金标垫和异嗜性抗体阻断剂结合物垫，金标垫上设有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫检测领域，具体涉及一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒。

技术介绍

[0002]疟疾是一种严重威害人类健康的感染性寄生虫病。疟原虫是引起疟疾的病原体，主要包括4 种：恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫。
[0003]疟疾尚无有效疫苗，若发生症状24 h 内不采取对症治疗，疟疾会严重威胁生命造成死亡。
[0004]目前主要检测方式有镜检法、血液棕黄层定量分析、 DNA探针技术、聚合酶链式反应技术、凝聚法、酶联免疫吸附法（ELISA），虽然上述方法都可以用于检测疟原虫，但是都存在相应的缺点：镜检法存在费工费时，对客观依赖性太强的缺点；血液棕黄层定量分析存在的主要问题是：成本较高，需要荧光显微镜，所使用的QBC管价格昂贵（1.0美元/支），且不能重复使用；DNA探针技术：操作繁琐，成本较高，还需要使用放射标记，限制了其现场应用。聚合酶链式反应技术对实验条件和技术水平要求较高，投入成本较大；凝聚法存在的问题是灵敏度和特异度较差；酶联免疫吸附法（ELISA）存在的问题是必须由专业人员操作，而操作又极繁琐，需逐一有序地加入全血、标记单抗、底物、终止液等试剂，中间还有多次清洗操作，耗时较久，一次试验要2h以上。因此针对上述问题，有必要开发一种操作简单，使用方便，灵敏度高和特异性高的试剂盒产品。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一个目的在于：针对现有技术存在的不足，提供一种具有灵敏度高、特异性强、操作简单以及使用方便的用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒。
[0006]为了实现上述专利技术的目的，本专利技术的技术方案是：一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，所述试剂盒包括检测卡和样品裂解液，所述检测卡的内部设有试纸条，所述试纸条包括样品垫、金标垫和异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述金标垫上设有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP
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单克隆抗体1；所述检测卡的上板块上设有加样口和样品裂解液口，所述加样口的位置与金标垫的位置相对应，所述样品裂解液口与所述样品垫的位置相对应。
[0007]作为一种改进的技术方案，金标垫的制备方法包括胶体金的制备和胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP
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单克隆抗体1；其中制备得到的胶体金溶液pH 为8.2～8.5；胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP
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单克隆抗体1时将pLDH单克隆抗体1和HRP
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单克隆抗体1同时加入金标液中搅拌，再加入牛血清白蛋白搅匀，最后加入6～10wt%NaCl溶液混匀、离心、弃沉淀后上清液继续离心，吸去上清液，将沉淀物用 PBS缓冲液溶解得到复溶后胶体金标物；取玻璃纤维放入不锈钢盘，按体积浓度20%稀释后，量取胶体金标物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥即可。
[0008]作为一种改进的技术方案，异嗜性抗体阻断剂结合物垫的制备方法：取玻璃纤维放入不锈钢盘，取30～40mL且浓度为0.2～0.5mg/mL异嗜性抗体阻断剂溶液,倒入不锈钢盘，使液体完全均匀吸收、干燥，得阻断剂结合物垫。
[0009]作为一种改进的技术方案，所述试纸条还包括吸水纸、硝酸纤维素膜和底板，其中所述底板的中间位置粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端搭接吸水纸，所述硝酸纤维素膜的另一端搭接异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述异嗜性抗体阻断剂结合物垫的另一端搭接金标垫，所述金标垫的一端搭接样品垫。
[0010]作为一种改进的技术方案，所述硝酸纤维素膜上设有检测线1、检测线2和质控线，其中所述检测线1上包被有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体2，所述检测线2上包被有抗恶性疟原虫HRP
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单克隆抗体2，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；且包被时抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体2的浓度为1.5～2.0mg/mL；所述抗恶性疟原虫HRP
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单克隆抗体2的浓度为0.5～1.0mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体的浓度为1.0～2.0mg/mL。
[0011]作为一种改进的技术方案，所述样品裂解液包括pH为7.0～8.0的缓冲液、表面活性剂和细胞裂解剂，所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；所述表面活性剂为吐温20、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；所述细胞裂解剂为脱氧胆酸钠，每100mL裂解液中表面活性剂的添加量为0.05～0.5g，细胞裂解剂的添加量为0.03～0.05g。
[0012]作为一种改进的技术方案，所述样品垫经过样品处理液涂布、干燥得到；其中所述样品处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂，每100mL的所述样品处理液中所述大分子聚合物的添加量为0.05～1g，所述表面活性剂的添加量为0.05～0.5g，所述封闭剂的添加量为0.05～2g。
[0013]作为一种改进的技术方案，所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；所述大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；所述表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；所述封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种。
[0014]本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：（1）本专利技术的试剂盒其试纸条包括异嗜性抗体阻断剂结合物垫和标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体和恶性疟原虫抗HRP
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单克隆抗体的金标垫，本专利技术的试剂盒中的检测卡其上板块的加样口对应金标垫，样品裂解液口对应样品垫，在实际应用中将待测样品从加样口加入（即采用金垫加样方式），使得样本与金标抗体充分结合，再加入样品裂解液，样品裂解液沿着样品垫迁移至金标垫后对红细胞膜进行裂解，使疟原虫暴漏出来，从而提高抗原检测灵敏度，加入异嗜性抗体阻断剂结合垫可有效阻断样本中异嗜性引起假阳，提高特异性；（2）本专利技术的样品垫经过样品处理液处理后，上述配方组分的样品处理液，其各组分通过彼此之间的配合最终形成亲水性且具有强大缓冲能力的复合体系，使用上述样品垫可减慢样品裂解液中水分子的流动，为示踪物的反应提供一个液体环境，使生物原料分布均匀；（3）本专利技术制备的试剂盒使用方便，操作简单，个人可检测，达到真正的POCT检测，增加检测和诊疗的实效性，对感染者快速分流，阻断传染源，有效防止疫情扩散。
具体实施方式
[0015]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本专利技术进行进一步详细
说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0016]实施例1一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，包括检测卡（购自厂家，其包括卡固连接的上板块和下板块，试纸条位于下板块的内壁上，上板块和下板块比较常见，因此未给出示意图；）和样品裂解液，检测卡的内部设有试纸条，试纸条包括样品垫、金标垫和异嗜性抗体阻断剂结合物垫，金标垫上设本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，所述试剂盒包括检测卡和样品裂解液，所述检测卡的内部设有试纸条，其特征在于：所述试纸条包括样品垫、金标垫和异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述金标垫上设有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP
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单克隆抗体1；所述检测卡的上板块上设有加样口和样品裂解液口，所述加样口的位置与金标垫的位置相对应，所述样品裂解液口与所述样品垫的位置相对应。2.根据权利要求1所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：金标垫的制备包括胶体金的制备和胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP
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单克隆抗体1；其中制备得到的胶体金溶液pH 为8.2～8.5；胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP
-Ⅱ
单克隆抗体1时将pLDH单克隆抗体1和HRP
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单克隆抗体1同时加入金标液中搅拌，再加入牛血清白蛋白搅匀，最后加入6～10wt%NaCl溶液混匀、离心、弃沉淀后上清液继续离心，吸去上清液，将沉淀物用 PBS 缓冲液溶解得到复溶后胶体金标物；取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标物40～50mL，体积浓度为20%，倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥即可。3.根据权利要求1所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：异嗜性抗体阻断剂结合物垫的制备为：取玻璃纤维放入不锈钢盘，取30～40mL且浓度为0.2～0.5mg/mL异嗜性抗体阻断剂溶液,倒入不锈钢盘，使液体完全均匀吸收、干燥，得阻断剂结合物垫。4.根据权利要求1所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：所述试纸条还包括吸水纸、硝酸纤维素膜和底板，其中底板的中间位置粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端搭接吸水纸，所述硝酸纤维素膜的另一端搭接异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述异嗜性抗体阻...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，高鸿，高洪元，姚立琼，赵倩，杨明霞，
申请(专利权)人：山东康华生物医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：