本发明专利技术公开了一种同时测定赖氨酸和甘氨酸含量的高效液相色谱检测方法，以含庚烷磺酸钠溶液和乙腈的混合溶液作为流动相，能够准确检测注射用赖氨匹林中赖氨酸和甘氨酸的含量。本发明专利技术的方法不仅专属性强，准确度高，重复性、中间精密度、线性和范围、耐用性良好，而且操作简便、快速，节省了检测时间，降低了检测成本，能够更好地应用于注射用赖氨匹林的商业化生产中。产中。
【技术实现步骤摘要】
一种同时测定赖氨酸和甘氨酸含量的方法
[0001]本专利技术属于化学分析
，具体涉及一种采用高效液相色谱法同时测定药品中赖氨酸和甘氨酸含量的方法及其应用。
技术介绍
[0002]赖氨匹林是赖氨酸和阿司匹林组成的复盐，临床上主要用于发热及轻至中度疼痛的治疗，也用于急性冠状动脉综合征和心肌梗死的治疗。目前，赖氨匹林上市剂型以粉针剂、散剂为主，上市国家主要有欧盟和中国。赖氨匹林对湿、热高度敏感，长期存放易降解产生游离水杨酸，严重危害患者健康，因此在做成制剂过程中通常会加入适量的甘氨酸作为稳定剂，抑制水杨酸的生成，同时起到减轻注射刺激的作用。据药品说明书和文献报道，Sanofi Aventis France生产的注射用赖氨匹林(商品名)以及Bayer Vital GmbH生产的注射用赖氨匹林(商品名i.v.)中均添加了约10％的甘氨酸。
[0003]氨基酸的检测方法主要有液相柱前衍生化法、氨基酸分析仪法、电位滴定法、凯氏定氮法等。上述几种方法常用于药品中单个氨基酸含量的检测，操作相对复杂，成本相对较高，而对于药品中含有两种或两种以上氨基酸不适用，容易产生干扰，影响检测的准确度。注射用赖氨匹林中同时含有赖氨酸和甘氨酸两种氨基酸，采用现有检测方法无法实现准确定量。
[0004]因此，开发一种操作简便且能同时准确定量注射用赖氨匹林中赖氨酸和甘氨酸含量的方法，具有非常重要的意义。
技术实现思路
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种同时测定赖氨酸和甘氨酸含量的方法。
[0006]本专利技术提供一种同时测定赖氨酸和甘氨酸的方法，采用以含庚烷磺酸钠溶液和乙腈的混合溶液作为流动相的高效液相色谱法测定。
[0007]本专利技术所述庚烷磺酸钠溶液是指庚烷磺酸钠的水溶液。
[0008]在一些实施方案中，与乙腈混合前，所述庚烷磺酸钠溶液的浓度为0.5-0.7g/L，优选的浓度为0.6g/L。
[0009]在一些实施方案中，与乙腈混合前，所述庚烷磺酸钠溶液的pH为2.5-3.0，优选的pH为2.8；进一步优选地，使用磷酸调节所述庚烷磺酸钠溶液的pH。
[0010]在一些实施方案中，所述庚烷磺酸钠溶液与乙腈以体积比(75-85):(15-25)混合；优选地，所述庚烷磺酸钠溶液与乙腈以体积比80:20混合。
[0011]在一些实施方案中，所述流动相的洗脱方式为等度洗脱。
[0012]在一些实施方案中，所述高效液相色谱的色谱条件中，色谱柱以氨基十六烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
[0013]在一些实施方案中，所述高效液相色谱的色谱条件中，检测波长为205nm-215nm，
优选地，所述高效液相色谱的检测波长为212nm。
[0014]在一些实施方案中，所述高效液相色谱的色谱条件中，色谱柱的柱温为30℃-40℃，优选地，所述色谱柱的柱温为35℃。
[0015]在一些实施方案中，所述高效液相色谱的色谱条件中，流速为1.0-1.5ml/min，优选的流速为1.2ml/min。
[0016]在一些实施方案中，所述高效液相色谱的色谱条件中，样品的进样体积为10-20μl。
[0017]在一些实施方案中，所述测定包括以下步骤：
[0018]取含有赖氨酸和甘氨酸的供试品，精密称定，加乙腈溶解并稀释，摇匀，作为供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图；另分别取盐酸赖氨酸、甘氨酸对照品，同法测定；按外标法以峰面积分别计算赖氨酸和甘氨酸的含量，即得。
[0019]在一些实施方案中，所述供试品或者同时含有赖氨酸和甘氨酸的样品为注射用赖氨匹林。
[0020]作为优选的技术方案，本专利技术提供一种采用高效液相色谱法同时测定注射用赖氨匹林中赖氨酸和甘氨酸含量的方法，色谱条件为：以氨基十六烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含庚烷磺酸钠溶液和乙腈(体积比为(75-85):(15-25))的混合溶液为流动相，检测波长为205nm-215nm，柱温为30℃-40℃。
[0021]作为进一步优选的技术方案，本专利技术所述的测定方法包括以下步骤：
[0022]色谱条件与系统适用性试验：以氨基十六烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.6g/L庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH至2.8):乙腈(80:20)为流动相，检测波长为212nm，柱温为35℃，流速为1.2ml/min。理论塔板数分别按赖氨酸和甘氨酸计算，均不低于3000。
[0023]测定法：取注射用赖氨匹林供试品，精密称定，加65％乙腈溶解并稀释制成每1ml中约含赖氨酸2mg、甘氨酸0.4mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另分别取盐酸赖氨酸、甘氨酸对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积分别计算赖氨酸和甘氨酸的含量，即得。
[0024]本专利技术的有益效果如下：
[0025]本专利技术提供了一种能够同时准确测定注射用赖氨匹林中赖氨酸、甘氨酸含量的高效液相色谱方法，不仅专属性强，准确度高，重复性、中间精密度、线性和范围、耐用性良好，能同时检测两种氨基酸，且不会产生干扰；而且操作简便、快速，节省了检测时间和成本，对药品注射用赖氨匹林生产过程中的质量控制和成品检验具有非常重要的意义。
附图说明
[0026]图1：实施例2中赖氨酸含量测定线性图。
[0027]图2：实施例2中甘氨酸含量测定线性图。
[0028]图3：实施例7中盐酸赖氨酸对照品溶液色谱图。
[0029]图4：实施例7中甘氨酸对照品溶液色谱图。
[0030]图5：实施例7中191205批供试品溶液色谱图。
[0031]图6：实施例7中GY302批供试品溶液色谱图。
具体实施方式
[0032]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0033]1.色谱条件
[0034]以氨基十六烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.6g/L庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH至2.8):乙腈(80:20)为流动相，检测波长为212nm，柱温为35℃，流速为1.2ml/min。
[0035]2.供试品
[0036]注射用赖氨匹林：规格0.9g(以赖氨匹林计)，批号：191205、191206、191207，蚌埠丰原涂山制药有限公司生产。
[0037]注射用赖氨匹林：规格0.5g(以阿司匹林计)，批号：GY302，Sanofi Aventis France生产。
[0038]3.对照品
[0039]盐酸赖氨酸：批号140673-201509，含量99.8％，来自中国食品药品检定研究院。
[0040]甘氨酸：批号140689-201605，含量100.0％，来自中国食品药品检定研究院。
[0041]实施例1：系统适用性试验
[0042]分别取盐酸赖氨酸、甘氨酸对照品适量，精密称定，加65％乙腈溶解并稀释制成每1ml中约含赖氨酸2mg、甘氨酸0.4mg的溶液，摇匀，作为系统本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同时测定赖氨酸和甘氨酸的方法，其特征在于，采用以含庚烷磺酸钠溶液和乙腈的混合溶液作为流动相的高效液相色谱法测定。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，与乙腈混合前，所述庚烷磺酸钠溶液的浓度为0.5-0.7g/L，优选的浓度为0.6g/L。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，与乙腈混合前，所述庚烷磺酸钠溶液的pH为2.5-3.0，优选为2.8；优选地，所述庚烷磺酸钠溶液的pH采用磷酸调节。4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，所述庚烷磺酸钠溶液与乙腈以体积比(75-85):(15-25)混合，优选以体积比80:20混合。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述流动相的洗脱方式为等度洗脱。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱条件中，色谱柱以氨基十六烷基硅烷键合硅胶为填充剂。7.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨廷，徐正秀，杨科，王军，孟庆前，
申请(专利权)人：蚌埠丰原医药科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。