【技术实现步骤摘要】
一种检测副溶血性弧菌的特异性靶点、引物、检测方法及应用
[0001]本专利技术属于食品安全检测
,具体涉及一种检测副溶血性弧菌的特异性靶点、基于特异性靶点VPA1585和传统靶点tlh的引物及应用、和利用VPA1585与tlh相结合,构建双重实时荧光PCR体系,对副溶血性弧菌进行检测的方法。
技术介绍
[0002]副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种人类病原体,广泛分布在海洋环境中,经常从各种生海鲜中分离出来,食用被副溶血性弧菌污染的为加工或未煮熟的海鲜产品可能会导致食物中毒,并导致急性肠胃炎的发展,尽管由副溶血性弧菌引发的肠胃炎通常是自限性的,但对于患有基础疾病如肝病或免疫疾病的人来说,可能危及生命。
[0003]目前针对副溶血性弧菌较为普遍且易行的检测方法为基于PCR的分子生物学方法,如实时荧光PCR、多重PCR、环介导等温扩增等,此类方法的精准度和特异性主要依赖于检测靶点的选择。目前常用的副溶血性弧菌检测靶点如tdh、trh、tlh、groEL及toxR基因,但上述基因在实际应用的检测过程中被发现具有一定的局限性或误检率,使得检测效率及准确度降低,且不能将PCR方法的优势完全发挥。挖掘副溶血性弧菌快速检测靶点基因可以提高检测效率、准确性以及可靠性,具有十分重要的意义。
技术实现思路
[0004]针对现有技术的不足,本专利技术的第一个目的是提供如下1)-8)中任一种物质作为特异性靶点在非疾病诊断目的的检测副溶血性弧菌中的应用:1)VP0091;2)VP ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.如下1)-8)中任一种物质作为特异性靶点在非疾病诊断目的的检测副溶血性弧菌中的应用:1)VP0091;2)VP0289 ;3)VP04884);4)VP0811;5)VP1742;6)VPA0249;7)VPA1407;8)VPA1585,其中,所述VP0091碱基序列如SEQ ID NO.1所示;所述VP0289碱基序列如SEQ ID NO.2所示;所述VP0488碱基序列如SEQ ID NO.3所示;所述VP0811碱基序列如SEQ ID NO.4所示;所述VP1742碱基序列如SEQ ID NO.5所示;所述VPA0249碱基序列如SEQ ID NO.6所示;所述VPA1407碱基序列如SEQ ID NO.7所示;所述VPA1585碱基序列如SEQ ID NO.8所示。2.如下1)-8)中任一种物质作为特异性靶点在制备副溶血性弧菌检测试剂中的应用:1)VP0091;2)VP0289 ;3)VP04884);4)VP0811;5)VP1742;6)VPA0249;7)VPA1407;8)VPA1585;其中,所述VP0091碱基序列如SEQ ID NO.1所示;所述VP0289碱基序列如SEQ ID NO.2所示;所述VP0488碱基序列如SEQ ID NO.3所示;所述VP0811碱基序列如SEQ ID NO.4所示;所述VP1742碱基序列如SEQ ID NO.5所示;所述VPA0249碱基序列如SEQ ID NO.6所示;所述VPA1407碱基序列如SEQ ID NO.7所示;所述VPA1585碱基序列如SEQ ID NO.8所示。3.检测如下1)-8)中任一种物质的制品在制备副溶血性弧菌检测试剂中的应用:1)VP0091;2)VP0289 ;3)VP04884);4)VP0811;5)VP1742;6)VPA0249;7)VPA1407;8)VPA1585,其中,所述VP0091碱基序列如SEQ ID NO.1所示;所述VP0289碱基序列如SEQ ID NO.2所示;所述VP0488碱基序列如SEQ ID NO.3所示;所述VP0811碱基序列如SEQ ID NO.4所示;所述VP1742碱基序列如SEQ ID NO.5所示;所述VPA0249碱基序列如SEQ ID NO.6所示;所述VPA1407碱基序列如SEQ ID NO.7所示;所述VPA1585碱基序列如SEQ ID NO.8所示。4.一种用于检测副溶血性弧菌的双重实时荧光PCR引物,其特征在于,针对特异性靶点VPA1585设计特异性引物对:VPA1585-F及VPA-1585-R,针对传统靶点tlh选择已发表引物对:tlh-F及tlh-R;其中,VPA1585-F:5
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,如SEQ ID NO.9所示;VPA1585-R:5
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GAAACCGTCACTTTGGTCGC
–3’
,如SEQ ID NO.10所示;t...
【专利技术属性】
技术研发人员:别小妹,胡安妥,陆兆新,孔梁宇,
申请(专利权)人:南京农业大学,
类型:发明
国别省市:
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