本发明专利技术提供了一种珠星三块鱼特异性DNA分子标记、DNA条形码及珠星三块鱼种质快速鉴定和提纯的方法。针对目前已经出现的珠星三块鱼种质混杂问题，本发明专利技术通过表型筛选、DNA条形码筛选及珠星三块鱼特异性DNA分子标记筛选鉴定，最终筛选出稳定的珠星三块鱼种质资源。本发明专利技术所述的珠星三块鱼种质快速提纯的方法操作简单、准确性高、周期短、稳定性好、且种质纯度高，为种质保护、合理利用及种质生物多样性提供了技术支持。提供了技术支持。提供了技术支持。
【技术实现步骤摘要】
一种珠星三块鱼特异性DNA分子标记及其应用
[0001]本专利技术涉及一种鱼类种质提纯方法，具体涉及一种珠星三块鱼特异性DNA分子标记及其品种鉴定和种质快速提纯的方法。
技术介绍
[0002]三块鱼(Tribolodon)是鲤形目、鲤科、雅罗鱼亚科三块鱼属几种土著经济种的统称，主要分布于太平洋西北部的日本海及一些内陆淡水河流，是唯一降海洄游的鲤科鱼类。在我国仅分布于绥芬河和图们江流域。三块鱼是传统的名贵珍稀鱼类，肉质细嫩、肉味鲜美，肉中蛋氨酸和赖氨酸等人体必需氨基酸含量比一般鱼类高，含有丰富的不饱和脂肪酸和维生素A、维生素D等。研究证明，三块鱼体内含有一种多糖黏蛋白质，有促进细胞发育、提高机体免疫力、降低胆固醇、防止动脉硬化和冠心病的功能，对代谢性疾病、身体虚弱等也有较好疗效。历史上，三块鱼与兴凯湖的大白鱼和乌苏里江的鲑鱼并称为“边塞三珍”。
[0003]近年来，由于水域环境遭到破坏，加之污染和酷捕滥捞等多种自然和人为因素，三块鱼资源濒临枯竭。为了增加三块鱼的野生种群数量，我国东宁县鲑鱼孵化放流站(绥芬河)从1989年开始每年通过捕捞洄游产卵群体，通过人工繁殖、放流，补充三块鱼野生资源。三块鱼每年4-6月份由日本海分批溯河到我国绥芬河产卵，当地渔民根据洄游群体的婚姻色和洄游时间将其分为“金滩头”、“银滩头”和“黑滩头”3种。但是解剖学、同工酶、线粒体DNA和核DNA分子标记等越来越多的证据证实溯河到我国绥芬河产卵的三块鱼只有2种，分别为俗称金滩头的珠星三块鱼(T.hakonensis)和俗称黑滩头的三块鱼(T.brandtii)。
[0004]珠星三块鱼和三块鱼两种鱼类形态相似，只有性成熟(4龄可达到性成熟)洄游产卵时其婚姻色，即体侧“红线”的分布和数量存在明显差异，因此可依据婚姻色进行分类判定。珠星三块鱼体侧表现为3条红线，而三块鱼在侧线下鳞靠近腹部有1条红线，还有很多个体的“红线”表型特征介于“二者”之间或不具备“红线”特征，不易判别。利用表型鉴定和分子标记检测发现，珠星三块鱼种质混杂严重，一些个体表型和基因组都出现了三块鱼特有的表型特征和基因痕迹。早期，日本学者Miura Masao和OkataAhihiro对珠星三块鱼和三块鱼两个物种早期发育进行了系统的形态学研究，利用载黑素细胞在体节不同位置区分这两个物种鱼苗(Masao and Ahihiro.1995.A study on morphological disrimation between Triobolodonbrandtii and T.hakonensis at the early development stages.45:103-109.)。但此方法在实践操作中不易掌握，需要对相同发育时间上的不同种幼鱼进行细致的观察比较，筛选周期也较长。专利CN107365872B提供了一种利用微卫星引物SSR-1和SSR-2鉴定绥芬河三块鱼不同洄游群体的方法，可区分珠星三块鱼、三块鱼或二者的杂交。专利CN109439762A则提供了一种更为简化的分子标记引物对A8和A11，用于鉴定珠星雅罗鱼(珠星三块鱼)和三块鱼。
[0005]DNA序列辅助分类作为一个理想的辅助形态学分类手段，迄今已有30多年历史。2003年，Herbert首次提出DNA条形码(DNA barcoding)定义，即通过使用短的、标准化的基因片段来进行物种鉴定，以提高真核生物识别的效率，同时使得DNA序列辅助分类方法得到
一定程度的统一，加快发展进程。目前，DNA条形码技术已经成为一个被广泛接受的物种鉴定工具，它重点强调了标准化和数据验证，亦被称为DNA分类学。目前，线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因是动物DNA条形码研究中使用最为广泛的标准基因，因为它具有：(1)适中的序列变异程度；(2)变异区域两端的序列高度保守；(3)序列长度适宜等特点。这一结论在许多鱼类、昆虫和鸟类等动物中均得到很好验证，但对于珠星三块鱼的研究尚未空白。
[0006]由于三块鱼属的鱼类在形态方面非常相近，难以辨别，极易发生杂交、种质混杂的现象，而传统的筛选及种质提纯的手段耗费周期长，且不易操作，因此，亟需对种质不纯的珠星三块鱼进行提纯，科学指导珠星三块鱼的增殖放流，确保珠星三块鱼种质的纯正及其天然野生资源的可持续利用。
技术实现思路
[0007]针对上述不足，本专利技术提供了一种珠星三块鱼特异性DNA分子标记、DNA条形码及珠星三块鱼种质快速提纯的方法，操作简单、准确性高、周期短、且种质纯度高，有利于解决种质混杂的问题，为种质保护、合理利用及种质生物多样性提供了技术支撑。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0009]一方面，本专利技术提供了一种与珠星三块鱼种质特异性紧密连锁的DNA分子标记，所述的DNA分子标记序列如SEQ ID NO:1所示。
[0010]另一方面，本专利技术提供了一种扩增所述珠星三块鱼DNA分子标记的引物对，所述的引物对包含引物Gene-F和引物Gene-R，所述的Gene-F序列如SEQ ID NO:2所示，所述的Gene-R序列如SEQ ID NO:3所示。
[0011]又一方面，本专利技术提供了一种珠星三块鱼DNA分子标记或扩增DNA分子标记的引物对在珠星三块鱼品种鉴定、种质纯化或品种改良中的应用。
[0012]又一方面，本专利技术提供了一种珠星三块鱼DNA分子标记或扩增DNA分子标记的引物对在制备用于珠星三块鱼品种鉴定、种质纯化或品种改良的工具中的应用。
[0013]具体地，所述的工具为独立试剂或试剂盒。
[0014]又一方面，本专利技术提供了一种用于珠星三块鱼的品种鉴定、种质纯化或品种改良的工具，所述的工具包含珠星三块鱼DNA分子标记或扩增DNA分子标记的引物对。
[0015]具体地，所述的工具为独立试剂、试剂盒、DNA指纹图谱卡或DNA扩增和比对装置。
[0016]进一步具体地，所述的工具还包含珠星三块鱼DNA条形码序列及其扩增引物对，所述的珠星三块鱼DNA条形码序列如SEQ ID NO:4所示；所述的珠星三块鱼DNA条形码序列的扩增引物对包含COI-F和COI-R，所述的COI-F序列如SEQ ID NO:5所示，所述的COI-R序列如SEQ ID NO:6所示。
[0017]又一方面，本专利技术提供了一种珠星三块鱼种质快速提纯的方法，所述的种质快速提纯方法包括以下步骤：
[0018](1)挑选珠星三块鱼体色特征个体，所述体色特征为珠星三块鱼体侧有三条红线；
[0019](2)将步骤(1)选出的个体提取基因组总DNA；
[0020](3)对步骤(2)提取的DNA进行鉴定，选主效单倍型为Hap3的个体；
[0021](4)对步骤(3)选出个体的DNA进行鉴定，选具有珠星三块鱼DNA分子标记的个体；
[0022](5)将步骤(4)选出的个体进行自交，选取后代F1中符合珠星三块鱼单倍型、DNA分
子标记和体色特征的个体。
[002本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种与珠星三块鱼种质特异性紧密连锁的DNA分子标记，其特征在于，所述的DNA分子标记为SEQ ID NO:1所示的序列。2.一种扩增权利要求1所述的DNA分子标记的引物对，其特征在于，所述的引物对包含引物Gene-F和引物Gene-R，所述的Gene-F序列如SEQ ID NO:2所示，所述的Gene-R序列如SEQ ID NO:3所示。3.权利要求1所述的DNA分子标记或权利要求2所述的引物对在珠星三块鱼品种鉴定、种质纯化或品种改良中的应用。4.权利要求1所述的DNA分子标记或权利要求2所述的引物对在制备用于珠星三块鱼品种鉴定、种质纯化或品种改良的工具中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的工具为独立试剂或试剂盒。6.一种用于珠星三块鱼的品种鉴定、种质纯化或品种改良的工具，其特征在于，所述的工具包含权利要求1所述的DNA分子标记或权利要求2所述的引物对。7.根据权利要求6所述的工具，其特征在于，所述工具为独立试剂、试剂盒、DNA指纹图谱卡或DNA扩增和比对装置。8.根据权利要求7所述的工具，其特征在于，所述工具还包含珠星三块鱼DNA条形码序列及其扩增引物对，所述的珠星三块鱼DNA条形码序列如S...
【专利技术属性】
技术研发人员：常玉梅，梁利群，赵雪飞，孙博，张立民，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，
类型：发明
国别省市：
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