玫瑰树碱盐酸盐在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了玫瑰树碱盐酸盐在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用，属于微生物传染病及医药领域。本发明专利技术发现了玫瑰树碱盐酸盐能够中和猪链球菌溶血素的毒性，并对猪链球菌感染的小鼠有保护效果。玫瑰树碱或其药学上可接受的盐具有制备抗猪链球菌溶血素药物和预防或治疗猪链球菌感染药物的应用。本发明专利技术发现了玫瑰树碱盐酸盐新的药用价值，为猪链球菌感染提供了新的防治药物；玫瑰树碱盐酸盐可以中和猪链球菌的主要毒力因子

【技术实现步骤摘要】
玫瑰树碱盐酸盐在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物传染病及医药领域，具体涉及玫瑰树碱盐酸盐在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用。

技术介绍

[0002]猪链球菌是最重要的人畜共患病病原体之一，严重威胁人类健康和养猪业的发展，在世界范围内造成重大经济损失。据不完全统计，自丹麦1968年第一例猪链球菌感染病例以来，已报道人类感染猪链球菌1600余例。猪链球菌感染可导致多种疾病，包括败血症、脑膜炎、心内膜炎、关节炎，其中死亡率最高的是猪链球菌导致的中毒休克样综合征(STSLS)。STSLS的特征是细菌负荷、炎性细胞因子风暴、多系统器官衰竭，最终导致宿主急性死亡。常用的抗生素虽然可以杀死猪链球菌，但是无法缓解猪链球菌STSLS对机体的影响。现有的研究已经证实猪链球菌溶血素(sly)是导致STSLS的主要原因，因此寻找一种能拮抗猪链球菌溶血素的药物是治疗猪链球菌感染的关键。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供兽用驱虫药玫瑰树碱盐酸盐新的应用，即提供玫瑰树碱盐酸盐在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用。
[0004]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0005]本专利技术发现玫瑰树碱盐酸盐能够中和猪链球菌溶血素的毒性，并对猪链球菌感染的小鼠有保护效果。基于此，本专利技术提供如下应用：
[0006]玫瑰树碱或其药学上可接受的盐在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用。
[0007]玫瑰树碱或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗猪链球菌感染的药物中的应用。
[0008]上述玫瑰树碱药学上可接受的盐优选为玫瑰树碱盐酸盐。
[0009]玫瑰树碱或其药学上可接受的盐在制备抗细菌溶血素的药物中的应用。
[0010]玫瑰树碱或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗产溶血素细菌感染的药物中的应用。
[0011]本专利技术具有如下优点和有益效果：
[0012](1)本专利技术发现了玫瑰树碱盐酸盐新的药用价值，为猪链球菌感染提供了新的防治药物。
[0013](2)玫瑰树碱盐酸盐可以中和猪链球菌的主要毒力因子-溶血素，减轻STSLS对机体的损伤。
[0014](3)玫瑰树碱盐酸盐通过中和细菌毒力因子发挥作用，降低了细菌的变异率。
附图说明
[0015]图1是玫瑰树碱盐酸盐对红细胞的溶血毒性结果统计图。
[0016]图2是猪链球菌SC19培养上清对红细胞的裂解结果统计图。
[0017]图3是玫瑰树碱盐酸盐对猪链球菌SC19培养上清溶血活性抑制的结果统计图。
[0018]图4是玫瑰树碱盐酸盐对猪链球菌SC19溶血素蛋白抑制的结果统计图。
[0019]图5是玫瑰树碱盐酸盐对金黄色葡萄球菌溶血素蛋白抑制的结果统计图。
[0020]图6是溶血素蛋白与玫瑰树碱盐酸盐的分子对接模式图，A：溶血素蛋白的活性口袋分析；B玫瑰树碱盐酸盐通过两个氢键(虚线)结合在溶血素蛋白的活性域中。
[0021]图7是玫瑰树碱盐酸盐与溶血素蛋白的热量摩尔比曲线图。
[0022]图8是玫瑰树碱盐酸盐与溶血素蛋白的动力学反应曲线图。
[0023]图9是猪链球菌SC19感染小鼠的存活曲线图。
[0024]图10是小鼠肺部切片图，图中显示EH治疗组相对于未治疗组，组织的充血和间质增生明显减少。
[0025]图11是小鼠血清中IL-6和TNF-α检测结果图。
[0026]图12是小鼠血液生化水平检测结果图。
[0027]图13是小鼠肺、脾、肾和肝的组织载菌量检测结果图。
具体实施方式
[0028]以下实施例用于进一步说明本专利技术，但不应理解为对本专利技术的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0029]下述实施例中所用到的猪链球菌SC19菌株为2005年中国四川省疫情爆发时从死猪脑中分离的毒力株；实施例结果统计分析采用双尾非配对t检验，*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001，****：P<0.0001。
[0030]实施例1
[0031](1)在96孔板中，将50μL悬浮在PBS中的2％绵羊红细胞添加到50μL在PBS中连续稀释的玫瑰树碱盐酸盐(EH)中，于37℃下孵育1小时，其中，EH浓度分别为1、2、4、8、16、32、64、128μg/mL，2.5％TritonX-100作为阳性对照。然后将板以500g离心5分钟，并将来自测定板每个孔的50μL上清液转移至新鲜的96孔板中。通过目视观察和测量543nm处的吸光度来确认溶血。
[0032]结果见图1，玫瑰树碱盐酸盐自身并不能引起红细胞溶血。
[0033](2)将猪链球菌SC19菌株37℃培养12h，4℃、10000rpm离心10min，收集上清。将不同体积的培养上清加到含2％脱纤维绵羊血磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH 7.4)中(总体积1mL)，37℃孵育30分钟。最后，在4℃条件下1000rpm离心5min。随后，收集上清200μL样本，在543nm处用生物pectrometer(Eppendorf)测定其光密度。同时将含2％脱纤维绵羊血磷酸盐缓冲(PBS，pH 7.4)溶液用2.5％TritonX-100处理设置为100％阳性对照。SC19培养上清溶血活性通过各样品的OD543数值与阳性对照的比值来评估。结果见图2，SC19培养上清为125μL时可以裂解95％以上的红细胞。
[0034](3)将猪链球菌SC19菌株37℃培养12h，4℃、10000rpm离心10min，收集上清。将125μL含不同浓度EH(0、2、4、8、16、32μg/mL)的上清在37℃下孵育30min。然后加入875μL含2％脱纤维绵阳羊磷酸盐缓冲(PBS，pH 7.4)溶液，37℃孵育30分钟。最后，在4℃条件下，1000rpm离心5min，收集上清200μL样本，在543nm处用生物pectrometer(Eppendorf)测定其
光密度。同时将含2％脱纤维绵羊血磷酸盐缓冲(PBS，pH 7.4)溶液用2.5％TritonX-100处理设置为100％阳性对照。EH对SC19培养上清溶血活性的影响通过各样品的OD543数值与阳性对照的比值来评估。
[0035]结果见图3，玫瑰树碱盐酸盐明显抑制SC19培养上清的溶血活性，并呈现浓度依赖性。
[0036](4)将纯化的猪链球菌SC19溶血素蛋白(100ng/mL)与不同浓度(0、2、4、8、16和32μg/mL)的EH共孵育，并按照(3)中的方法评估EH的抗溶血素蛋白作用效果。
[0037]结果见图4，与(3)中结果一致，玫瑰树碱盐酸盐抑制猪链球菌溶血素蛋白的溶血活性。
[0038](5)将纯化的金黄色葡萄球菌α溶血素蛋白(100ng/mL)与不同浓度(0、2、4、8、16和32μg/mL)的EH共孵育，并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.玫瑰树碱在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用。2.玫瑰树碱药学上可接受的盐在制备抗猪链球菌溶血素的药物中的应用。3.玫瑰树碱在制备预防或治疗猪链球菌感染的药物中的应用。4.玫瑰树碱药学上可接受的盐在制备预防或治疗猪链球菌感染的药物中的应用。5.玫瑰树碱在制备抗细菌溶血素的药物中的应用。6.玫瑰树碱...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭臣，鲁浩，刘曼莉，王晨晨，鲁文嘉，李晓丹，王湘如，陈焕春，
申请(专利权)人：湖北省生物农药工程研究中心，
类型：发明
国别省市：