一种检测冠状病毒的反义RNA探针及其制备方法、检测冠状病毒的试剂盒与方法技术

本发明专利技术公开了一种检测冠状病毒的反义RNA探针及其制备方法、检测冠状病毒的试剂盒与方法，属于核酸杂交技术领域。本发明专利技术为了提高冠状病毒检测的准确性和特异性，本发明专利技术提供的检测冠状病毒的方法是将待测样本与蛋白酶K混合经过漂洗，加入预杂交液孵育，加入地高辛修饰的反义RNA探针孵育后与阻断溶液混合，加入地高辛修饰的抗体，然后与含有羔羊血清的MABT溶液混合，加入AP底物染色缓冲液进行室温避光孵育，用显微镜观察和照相得到检测冠状病毒的结果。该方法检测样本量少无需提取细胞中的RNA，可以有效避免荧光定量PCR检测中RNA损失而导致假阴性结果的问题，灵敏度高，提高了检测结果的准确性。果的准确性。果的准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测冠状病毒的反义RNA探针及其制备方法、检测冠状病毒的试剂盒与方法


[0001]本专利技术属于核酸杂交
，具体涉及一种检测冠状病毒的反义RNA探针及其制备方法、检测冠状病毒的试剂盒与方法。

技术介绍

[0002]2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，其潜伏期长、侵染力强，主要攻击动物体的肺部，引起肺部感染。
[0003]目前鉴定新型冠状病毒有荧光定量PCR法和抗体检测方法，其中核酸检测方法为检验病毒方法的金标准，但是现有方法中仍存在诸多问题，诸如：
[0004](1)荧光定量PCR能够鉴定疑似患者体内的核酸，该方法需要提取细胞中的RNA，随后进行反转录，然后进行PCR鉴定，在这些实验操作中RNA的损失比较多，如果疑似患者处于感染早期或者体内本身含有病毒量比较少，很容易导致RNA在提取过程中丢失，导致假阴性结果出现。
[0005](2)由于新型冠状病毒是RNA病毒，RNA病毒变异速度快，并且该变异能够不断进行累积，荧光定量PCR实验对核酸序列要求比较高，尤其是在PCR引物覆盖的区域要求比较苛刻，如果该区本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测冠状病毒的反义RNA探针，其特征在于，所述反义RNA探针的序列如SEQ ID NO.4所示。2.如权利要求1所述的RNA探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体步骤如下：(1)设计引物：COVID-19-F1序列为5'-GATCAAAACAACGTCGGCCC-3'；COVID-19-R1序列为5'-GCGTAATACGACTCACTATAGGGTTCTGTCTCTGCGGTAAGGC-3'；(2)构建重组载体：将冠状病毒SARS-CoV-2待测区域碱基序列如SEQ ID NO.1所示插入到质粒pcDNA3.1-myc-HisA中BamHI和XbaI之间，得到重组载体pcDNA3.1-myc-HisA-COVID-19；(3)PCR扩增冠状病毒SARS-CoV-2待测区DNA序列：以步骤(2)得到的重组载体为模板，以步骤(1)的引物，利用PCR技术扩增序列，得到冠状病毒SARS-CoV-2待测区DNA序列；(4)体外转录得到反义RNA探针：以步骤(3)得到的冠状病毒SARS-CoV-2待测区DNA片段为模板进行体外转录，得到反义RNA探针。3.一种检测冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括地高辛修饰的权利要求1所述的反义RNA探针。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：预杂交液、阻断溶液、AP底物染色缓冲液、MABT溶液、50％甲酰胺/2
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SSCT缓冲液、2
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SSCT缓冲液、0.2
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SSCT缓冲液、检测缓冲液、冠状病毒SARS-CoV-2阴性对照和冠状病毒SARS-CoV-2阳性对照。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述地高辛修饰的反义RNA探针的浓度为2ng/μL。6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述预杂交液包括体积比50％甲酰胺、5
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SSCT、50μg/mL肝素、5mM EDTA、0.05mg/mL核糖体RNA、1M柠檬酸和0.1％Tween；所述阻断溶液包括1％羊血清、2％阻断剂、100mM顺丁烯二酸和150mMNaCl；所述AP底物染色缓冲液包括氯化硝基四氮唑蓝、5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐和左旋咪唑；所述MABT溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢东阳，
申请(专利权)人：谢东阳，
类型：发明
国别省市：