针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒及其应用，所述试剂盒包含17对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：Amelogenin、D3S1358、D6S477、D1S1656、D19S253、D2S441、D6S1043、D15S659、D3S3045、Penta E、D8S1132、Penta D、D10S1435、D22S1045、D10S1248、D12S391和DYS391。本发明专利技术所述试剂盒对于现场案件中的微量、降解、含抑制剂等疑难检材具有快速、高效检测的优点；同时，本试剂盒针对疑难案件检材扩增高效，且优选的基因座信息可对已有案件数据库进行补充，缩短案件排查时间，锁定嫌疑人。锁定嫌疑人。锁定嫌疑人。

【技术实现步骤摘要】
针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，涉及采用分子标记进行基因检测，具体为针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]短串联重复序列基因座(short tandem repeat，STR)首次提出于上个世纪90年代初，其核心序列一般为2-6个碱基构成，常见的是4个碱基。由于不同个体之间、不同基因座之间的核心序列重复数存在差异，而呈现出长度多态性。基因座的片段扩增子相对较小，多个STR基因座也可以复合扩增，较RFLP等技术相比，能够同时获得多个基因座丰富信息，在微量、降解检材方面，具高效、灵敏、准确等明显优势。
[0003]复合STR-DNA分型技术因上述明显优势，受到学术界、各大公司的青睐和大量注资研究，试剂盒开发技术和检测平台均有很大发展。关于试剂盒内基因座的选择，各国政府也陆续出台相关规定，以规范法医STR检测市场。1997年，美国公布了CSF1PO、D16S539、FGA、D18S51、TH01、D5S818、TPOX、VWA、D3S1358、D13S317、D7S820、D8S1179、D21S11共13个核心基因座。2017年初，FBI又公布了7个新增的STR核心基因座，即D1S1656、D2S441、D2S1338、D10S1248、D12S391、D19S433、D22S1045和Amelogeni。中国于2019年公布的常染色体核心和优选基因座共30个，这30个基因座在完全包括了FBI的20个核心基因座的基础上，增加了三个中国人群遗传多态性高的基因座Penta D、Penta E、D6S1043，和6个优选基因座D8S1132、D15S659、D3S3045、D19S253、D6S477、D10S1435。
[0004]STR分型鉴定在我国已被广泛应用，法医物证STR-DNA分型检测帮助公安机关破获了大量的案件。目前，国内已建立应用DNA数据库，不同地区可以跨时空多应用DNA数据库，进行DNA分型比对，快速、高效缩小排查范围，锁定犯罪嫌疑人。
[0005]然而，在实际检测过程中，由于样本的多样性和采样环境、保存条件等多种条件的限制，数量庞大的疑难检材，难以获得完整、准确的DNA分型结果。疑难样本主要特点有高度降解、DNA微量、含有高浓度抑制剂。即使采用磁珠法、硅珠法等提取技术，如腐殖酸等多种抑制剂仍然残留，影响PCR扩增过程。故现场案件检材，尤其是疑难检材，对试剂盒性能要求高于常规试剂盒。现有的常规体试剂盒扩增子片段较大，灵敏度低，抗抑制剂能力弱，无法满足疑难检材检测需求。鉴于上述疑难检材检测难度，目前案件现场检材多使用国外厂商试剂盒，主流是ABI的Identifiler
TM plus，其次是Promega的21System。该两种试剂盒所含基因座分别为16和21个，主要包括FBI推荐的核心基因座，相对而言，基因座信息较少。目前现场案件检测急需补充试剂盒，该类试剂盒要求既包含中国推荐的优选基因座和中国人群多态性高的基因座又能够适应疑难检材的检测要求。该类补充试剂盒可实现对疑难检材进行检测，对原有DNA数据库进行基因座信息补充，帮助缩小嫌疑人范围，也能结合现有Identifiler
TM plus或21System在人类个体识别和亲权鉴定中发挥重要作用。

技术实现思路

[0006]解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，采用Mini的概念设计引物，开发一种针对来源于案件现场的微量、降解、含有高抑制剂等疑难检材的补充STR引物组、及其试剂盒和应用，且同时具有高效、快速、高灵敏度和强抗抑制能力的优点。本专利技术试剂盒包含了现在市场上案件检材常用试剂盒Identifiler plus缺少的新增核心基因座和现有国家推荐的全部优选基因座，一个Amelogenin以及一个辅助性别判断的Y染色体基因座DYS391。与Identifiler plus或21System试剂盒信息相互补充，可得到中国推荐的20个核心和10个优选基因座的全部信息。该专利技术能够对现有DNA数据库进行基因座信息补充，极大地提高了疑难检材利用率。鉴于此，本专利技术提供了针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒及其应用。
[0007]技术方案：针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒，所述试剂盒包含17对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：Amelogenin、D3S1358、D6S477、D1S1656、D19S253、D2S441、D6S1043、D15S659、D3S3045、Penta E、D8S1132、Penta D、D10S1435、D22S1045、D10S1248、D12S391和DYS391。
[0008]优选的，所述17对STR基因座的特异性扩增引物序列如下：D3S1358、SEQ ID NO.1～2；D6S477、SEQ ID NO.3～4；D1S1656、SEQ ID NO.5～6；D19S253、SEQ ID NO.7～8；D2S441、SEQ ID NO.9～10；D6S1043、SEQ ID NO.11～12；D15S659、SEQ ID NO.13～14；D3S3045、SEQ ID NO.15～16；Amelogenin、SEQ ID NO.17～18；Penta E、SEQ ID NO.19～20；D8S1132、SEQ ID NO.21～22；DYS391、SEQ ID NO.23～24；Penta D、SEQ ID NO.25～26；D10S1435、SEQ ID NO.27～28；D22S1045、SEQ ID NO.29～30；D10S1248、SEQ ID NO.31～32；D12S391、SEQ ID NO.33～34。
[0009]优选的，所述17对STR基因座的特异性扩增引物的浓度如下：D3S1358引物对0.30μM；D6S477引物对0.27μM；D1S1656引物对0.30μM；D19S253、0.30μM；D2S441、0.32μM；D6S1043、0.44μM；D15S659、0.32μM；D3S3045、0.33μM；Amelogenin、0.25μM；Penta E、0.40μM；D8S1132、0.37μM；DYS391、0.32μM；Penta D、0.32μM；D10S1435、0.37μM；D22S1045、0.26μM；D10S1248、0.37μM；D12S391、0.32μM。
[0010]所述试剂盒中的引物及其序列和浓度如下表所示：
[0011][0012][0013]优选的，所述17对STR基因座的特异性扩增引物的PCR扩增产物长度均小于320bp。
[0014]优选的，所述17对STR基因座的特异性扩增引物分为5组：第1组，D3S1358、D6S477、D1S1656和D19S253；第2组，D2S441、D6S1043、D15S659和D3S3045；第3组，Amelogenin、Penta E和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含17对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：Amelogenin、D3S1358、D6S477、D1S1656、D19S253、D2S441、D6S1043、D15S659、D3S3045、Penta E、D8S1132、Penta D、D10S1435、D22S1045、D10S1248、D12S391和DYS391。2.根据权利要求1所述的针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述17对STR基因座的特异性扩增引物序列如下：D3S1358、SEQ ID NO.1～2；D6S477、SEQ ID NO.3～4；D1S1656、SEQ ID NO.5～6；D19S253、SEQ ID NO.7～8；D2S441、SEQ ID NO.9～10；D6S1043、SEQ ID NO.11～12；D15S659、SEQ ID NO.13～14；D3S3045、SEQ ID NO.15～16；Amelogenin、SEQ ID NO.17～18；Penta E、SEQ ID NO.19～20；D8S1132、SEQ ID NO.21～22；DYS391、SEQ ID NO.23～24；Penta D、SEQ ID NO.25～26；D10S1435、SEQ ID NO.27～28；D22S1045、SEQ ID NO.29～30；D10S1248、SEQ ID NO.31～32；D12S391、SEQ ID NO.33～34。3.根据权利要求1所述的针对疑难检材的补充STR位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述17对STR基因座的特异性扩增引物的浓度如下：D3S1358引物对0.30μM；D6S477引物对0.27μM；D1S1656引物对0.30μM；D19S253、0.30μM；D2S441、0.32μM；D6S1043、0.44μM；D15S659、0.32μM；D3S3045、0.33μM；Amelogenin、0.25μM；Penta E、0.40μM；D8S1132、0.37μM；DYS391、0.32μM；Penta D、0.32μM；D10S1435、0....

【专利技术属性】
技术研发人员：邵泽香，刘煜尧，范晓芸，姜颖晔，王伟，陈林丽，夏子芳，郑卫国，
申请(专利权)人：无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：