一种精浆丙二醛含量的定量测定方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种精浆丙二醛含量的定量测定方法及试剂盒，步骤：取精液标本，离心，取上清液于离心管中，得到精浆标本，想所述精浆标本中加入标本处理液消除所述精液标本中的蛋白质以及脂类的干扰，混匀，静置，离心，吸取上清液得到处理标本；取丙二醛标准品与TBA试剂混匀作为标准管，取所述处理标本与TBA试剂混匀作为样品管，所述TBA试剂包括硫代巴比妥酸溶液以及硫酸铁溶液；将所述标准管和所述样品管在95℃条件下反应30min，冷却，使用分光光度计在532nm、450nm、600nm处，测定所述标准管和所述样品管的吸光度；将测定值通过公式进行计算，得到样品管中丙二醛的浓度；本发明专利技术在精浆样本加入三氯乙酸以及加入硫酸铁溶液的TBA试剂，采用分光光度法进行处理计算。采用分光光度法进行处理计算。

【技术实现步骤摘要】
一种精浆丙二醛含量的定量测定方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于精子生化指标体外检测的
，涉及一种精浆丙二醛含量的定量测定方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]现代社会中对于男性不育症的的病因学探讨发现,精子在过量活性氧自由基的过氧化作用后可导致精子功能丧失，是男性不育的重要原因之一。氧自由基为机体氧代谢过程中所产生的一类高活性化学基团,可攻击精子细胞膜中的多聚不饱和脂肪酸产生丙二醛(MDA)等脂质过氧化产物，因此，精浆MDA含量是精子脂质过氧化损伤严重程度的指标，精浆中MDA含量升高,表明精子质膜的脂质过氧化损害加强,抗氧化能力减弱。所以对于MDA的检测对于治疗男性不育症有重要的意义。
[0003]现有技术中，申请号为CN03818036.7的专利技术专利公开了测定尿液中MDA的试剂盒，虽然能够检测尿液中MDA的存在，但是仅限于定性测量，不能定量测量；而申请号为CN201910985706.0的专利技术专利公开了一种检测尿液中MDA的试剂条，将检测结果通过化学分析仪进行颜色分析得到尿液中MDA的含量，但是该产品不能消除标本中可溶性糖以及不饱和脂肪酸对MDA测定的影响，检测结果误差较大，临床应用价值较低。
[0004]申请号为CN108572224A的专利技术专利公开了一种生物组织中丙二醛含量的测定方法，该方法采用使用吖啶酮乙酰肼作为荧光标记试剂在三氯乙酸溶液的催化作用下对生物组织提取液和丙二醛标准溶液中的丙二醛进行衍生化，使用带有荧光检测器的高效液相色谱进行定量检测分析，该方法虽然检测准确度较高，但是操作繁琐，需要高效液相色谱仪进行检测，不适于推广。
[0005]申请号为CN201910242240.5的专利技术公开了一种测定楸树叶片丙二醛含量的测定方法，采用TBA法对MDA进行检测，但该专利适用于楸树叶片等植物叶片标本中丙二醛含量测定，样本处理方法与精浆差异较大，不适合进行精浆丙二醛含量测定。另外，由于人类精浆标本中含有一定量果糖，会对TBA反应产生干扰，精浆标本中含有的果糖等可溶性糖也可以与TBA试剂反应，反应产物在450nm处有吸收峰，同时在532nm处也会产生吸光度，使MDA测定结果偏高，该专利技术未给出消除果糖等可溶性糖对检测结果影响的方法，不适合用于测定人精浆丙二醛含量。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种精浆丙二醛含量的定量测定方法，通过对精浆样本加入三氯乙酸处理之后，使用加入硫酸铁溶液的TBA试剂与精浆混合，采用分光光度法进行处理，再经过计算得到精浆中MDA的浓度。
[0007]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种精浆丙二醛含量的定量测定方法，包括步骤如下：
[0009]步骤一：取精液标本，离心，取上清液于离心管中，得到精浆标本，想所述精浆标本
中加入标本处理液消除所述精液标本中的蛋白质以及脂类的干扰，混匀，静置，离心，吸取上清液得到处理标本；
[0010]步骤二：取丙二醛标准品与TBA试剂混匀作为标准管，取所述处理标本与TBA试剂混匀作为样品管，所述TBA试剂包括硫代巴比妥酸溶液以及硫酸铁溶液；
[0011]步骤三：将所述标准管和所述样品管在95℃条件下反应30min，冷却，使用分光光度计在532nm、450nm、600nm处，测定所述标准管和所述样品管的吸光度；
[0012]步骤四：将测定值通过以下公式进行计算，所述公式为：
[0013][0014]得到所述样品管中丙二醛的浓度。
[0015]进一步，所述丙二醛标准品为1-30umol/L，所述丙二醛标准品的配置步骤为：称取丙二醛二甲缩醛1.64-49.26mg，加入0.01-1.0mol/L盐酸1000ml，室温充分搅拌10-120min，待丙二醛二甲缩醛充分溶解后制得所述丙二醛标准品。
[0016]进一步，所述标本处理液为0.5-5.0mol/L三氯乙酸。
[0017]进一步，所述TBA试剂包括质量分数为0.1-2.0％的硫代巴比妥酸溶液以及0.05-5.0mg/L硫酸铁溶液。
[0018]进一步，所述TBA试剂的配置步骤为：称取硫代巴比妥酸100-2000mg，加入0.2-2.0mol/L氢氧化钠溶液1-30ml，充分搅拌，使硫代巴比妥酸完全溶解，加入10-100ml所述标本处理液，加入50-5000mg/L硫酸铁溶液50-500ul，用去离子水定容至100ml。
[0019]本申请一种精浆丙二醛含量的定量测定方法，通过TBA试剂对丙二醛进行检测，操作方便，采用采用分光光度法读取检测结果，无需高压液相色谱等昂贵仪器，易于临床实验室开展。另外使用三氯乙酸对精浆标本进行处理，将蛋白、脂类等成分祛除，消除其对反应的干扰；通过在TBA试剂中加入0.1mg/L硫酸铁，有效增加了反应产物在532nm处的吸光度值，增加了检测的敏感性；同时，由于精浆标本中含有的果糖等可溶性糖也可以与TBA试剂反应，反应产物在450nm处有吸收峰，同时在532nm处也会产生吸光度，使MDA测定结果偏高。本申请对反应产物同时进行450nm与532nm吸光度检测，通过计算，有效消除精浆果糖等可溶性糖对结果的影响。
[0020]本专利技术还提供了一种精浆丙二醛含量的检测试剂盒，技术方案如下：
[0021]一种精浆丙二醛含量的检测试剂盒，包括，丙二醛标准品、标本处理液以及TBA试剂；其中，所述丙二醛标准品浓度为1-30umol/L，所述标本处理液为0.5-5.0mol/L三氯乙酸，所述TBA试剂包括质量分数为0.1-2.0％的硫代巴比妥酸溶液以及0.05-5.0mg/L硫酸铁溶液。
[0022]进一步，所述试剂盒中包括规格为0.5-5.0ml的离心管，所述丙二醛标准品、标本处理液以及TBA试剂分别独立装于瓶中。
具体实施方式
[0023]为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的方案，下面结合本专利技术示例对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的示例仅仅是本专利技术的一部分示例，而不是全部的示例。基于本专利技术的中示例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性
劳动的前提下，所获得的所有其他实施方式都应当属于本专利技术保护的范围。
[0024]在本实施方式的描述中，术语“内”、“外”、“前”、“后”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系均仅仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。
[0025]为清楚地说明本专利技术的设计思想，下面结合实施例对本专利技术进行说明。
[0026]实施例一
[0027]试剂组成：10umol/L丙二醛溶液(标准品)、2mol/L三氯乙酸(标本处理液)、TBA试剂。
[0028]试剂配制：
[0029]0.02mol/L盐酸配制：量取10mL0.24mol/L盐酸加水稀释至120mL。
[0030]丙二醛标准本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种精浆丙二醛含量的定量测定方法，其特征在于，包括步骤如下：步骤一：取精液标本，离心，取上清液于离心管中，得到精浆标本，想所述精浆标本中加入标本处理液消除所述精液标本中的蛋白质以及脂类的干扰，混匀，静置，离心，吸取上清液得到处理标本；步骤二：取丙二醛标准品与TBA试剂混匀作为标准管，取所述处理标本与TBA试剂混匀作为样品管，所述TBA试剂包括硫代巴比妥酸溶液以及硫酸铁溶液；步骤三：将所述标准管和所述样品管在95℃条件下反应30min，冷却，使用分光光度计在532nm、450nm、600nm处，测定所述标准管和所述样品管的吸光度；步骤四：将测定值通过以下公式进行计算，所述公式为：得到所述样品管中丙二醛的浓度。2.根据权利要求1所述的一种精浆丙二醛含量的定量测定方法，其特征在于，所述丙二醛标准品为1-30umol/L，所述丙二醛标准品的配置步骤为：称取丙二醛二甲缩醛1.64-49.26mg，加入0.01-1.0mol/L盐酸1000ml，室温充分搅拌10-120min，待丙二醛二甲缩醛充分溶解后制得所述丙二醛标准品。3.根据权利要求1所述的一种精浆丙二醛含量的定量测定方法，其特征在于，所述标本处理液为0.5-5....

【专利技术属性】
技术研发人员：张道兵，
申请(专利权)人：珠海高瑞特医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：