Etelcalcetide的合成方法技术

本发明专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及Etelcalcetide的合成方法。本发明专利技术采用β‑S(Trt)‑D‑Arg(Boc)3‑OH为原料，并且以半胱氨酸替代肽序中的丙氨酸，采用NCL(自然化学连接)方法进行偶联反应，本发明专利技术针对现有液相方法的不足进行了改进，根据这条肽肽序的独有特点，采用S到N的分子内迁移反应完成偶联，从而提高肽片段间的偶联效率，本专利方法总收率为71.3％。因此，本发明专利技术克服了传统偶联试剂作用下片段间偶联困难的缺陷，降低了生产成本，并且适合规模化生产。

【技术实现步骤摘要】
Etelcalcetide的合成方法
本专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及Etelcalcetide的合成方法。
技术介绍
Etelcalcetide是由AMGENINC开发的一种新颖的拟钙剂，主要用于慢性肾病成人患者做血液透析治疗的继发性甲状旁腺功能亢进的多肽药物。2017年2月07日在美国上市，商品名为Parsabiv。Etelcalcetide的主链有七个D-型氨基酸组成，侧链通过一个二硫键与L-半胱氨酸相连。其肽序如式I所示：Etelcalcetide采用固相偶联需要使用树脂，规模化生产受到限制。而且偶联时氨基酸通常需要过量(3-5当量)，Etelcalcetide又以昂贵的D型氨基酸为主，因此，采用固相合成方法，成本过高，规模化生产受到限制。专利CN106928321及WO2016154580A1氨基酸之间偶联均采用传统的偶联试剂(PyBop，HATU，DIC或EDC等)进行活化偶联，但该方法用于片段之间的偶联效率通常较低，造成收率过低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种Etelcalce本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Etelcalcetide的合成方法，其特征在于，以β-S(Trt)-D-Arg(Boc)3-OH为原料，用半胱氨酸替代肽序中的丙氨酸，采用NCL方法进行偶联反应，制得Etelcalcetide。/n

【技术特征摘要】
1.Etelcalcetide的合成方法，其特征在于，以β-S(Trt)-D-Arg(Boc)3-OH为原料，用半胱氨酸替代肽序中的丙氨酸，采用NCL方法进行偶联反应，制得Etelcalcetide。


2.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：以β-S(Trt)-D-Arg(Boc)3-OH和苯硫酚(PhSH)为原料，在溶剂存在的条件下经偶联反应获得化合物1；
步骤2：以Ac-D-Cys(Acm)-OH与HONb为原料，在溶剂存在的条件下经偶联剂活化，与H-Ala-OH脱水缩合获得化合物2；
步骤3：以化合物2和苯硫酚(PhSH)为原料，在溶剂、偶联剂存在的条件下经缩合反应获得化合物3；
步骤4：以Boc-D-Cys(Trt)-OH、H-D-Arg(Pbf)-NH2·HCI为原料，在溶剂、偶联剂存在的条件下经缩合反应获得二肽片段即化合物4；
步骤5：化合物4在裂解液存在的条件下经去保护基反应获得化合物5；
步骤6：以化合物5与化合物1为原料，在溶剂、缓冲溶液、TCEP和三氟乙醇存在的条件下，经NCL反应，裂解获得化合物6；
步骤7：以化合物6与化合物1为原料，在溶剂、缓冲溶液、TCEP和三氟乙醇存在的条件下，经NCL反应，裂解获得化合物7；
步骤8：以化合物7与化合物1为原料，在溶剂、缓冲溶液、TCEP和三氟乙醇存在的条件下，经NCL反应，裂解获得化合物8；
步骤9：以化合物8与化合物3为原料，在溶剂、缓冲溶液、TCEP和三氟乙醇存在的条件下，经NCL反应，然后在引发剂、tBuSH存在的条件下经脱硫反应、纯化获得化合物9；
步骤10：以化合物9与L-Cys-OH为原料，经碘氧化、纯化获得Etecalcetide。


3.如权利要求2所述的合成方法，其特征在于，步骤1中所述溶剂包括四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二恶烷、乙腈、四氯化碳、二硫化碳、苯、甲苯、己烷、氯仿、二氯甲烷中的一种或两者以上的混合物；
步骤1中β-S(Trt)-D-Arg(Boc)3-OH和苯硫酚(PhSH)的摩尔比为1:1.0～1.5；
步骤1中所述偶联反应的温度为20℃～30℃；所述偶联反应的时间为2h～10h；所述偶联反应采用的偶联剂包括DIC与化合物A的组合物，DIPEA、化合物A和化合物B的组合物，其中化合物A为HOAt或HOBt，化合物B为PyAOP、PyBOP、HATU、HBTU、TBTU或EDC中的一种或两者以上的组合物。


4.如权利要求2或3所述的合成方法，其特征在于，步骤2中Ac-D-Cys(Acm)-OH与HONb的摩尔比为1:1.0～1.5；
步骤2中所述活化选用的溶剂包括四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二恶烷、乙腈、四氯化碳、二硫化碳、苯、甲苯、己烷、氯仿、二氯甲烷中的一种或两者以上的组合物；
步骤2中所述活化的温度为20℃～30℃，所述活化的时间为1h～5h；
步骤2中所述活化采用的偶联剂为DIC或DIPEA与化合物B的组合物，化合物B为PyAOP、PyBOP、HATU、HBTU、TBTU或EDC中的一种或两者以上的组合物；
步骤2中所述脱水缩合选用的溶剂包括四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二恶烷、乙腈、四氯化碳、二硫化碳、苯、甲苯、己烷、氯仿、二氯甲烷、水中的一种或两者以上的混合物；
步骤2中所述脱水缩合的温度为20℃～30℃，所述脱水缩合的时间为1h～3h。


5.如权利要求1至4任一项所述的合成方法，其特征在于，步骤3中化合物2和苯硫酚(PhSH)的摩尔比为1:1.0～1.5；
步骤3中，所述缩合反应采用的溶剂包括四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二恶烷、乙腈、四氯化碳、二硫化碳、苯、甲苯、己...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶志强，姚志军，宓鹏程，陶安进，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44