一种评价保健食品减肥功能的方法技术

本发明专利技术属于检测技术领域。本发明专利技术公开了一种评价保健食品减肥功能的方法，其包括脂质分解代谢促进模型造模与抑制脂肪吸收模型造模两部分，两部分都采用斑马鱼作为实验对象。本发明专利技术具有以下有益效果：斑马鱼减肥模型实验周期相对于大鼠实验（75‑90天），实验周期更短，仅需48小时；由于斑马鱼饲养成本低，体积小，发育周期短、单次产卵次数高的特点能同时进行多个供试品的评价；用斑马鱼进行保健食品减肥功效测价，实现了真正的高效和廉价；顺从了欧盟颁布的动物保护3R福利，利用斑马鱼模式生物进行保健食品功效评价。

【技术实现步骤摘要】
一种评价保健食品减肥功能的方法
本专利技术涉及检测
，尤其是涉及一种评价保健食品减肥功能的方法。
技术介绍
现有技术中针对保健食品减肥功效的评价常采用哺乳动物如小鼠等进行功能检测，但是其存在以下缺陷：1.哺乳动物减肥功能检测方法，肥胖模型法造模时间为45天，供试品的给予时间一般为30-45天，总实验周期为75-90天，实验周期太长。2.哺乳动物减肥指标中食物利用率、体内脂肪重量(睾丸及肾周脂肪垫)、脂/体比，指标不够直观。3.在国家食品药品监督管理总局(CFDA)网站数据查询项下“特殊食品”下拉栏中，可见“国产保健食品”和“进口保健食品”子下拉栏，分别输入关键词“减肥”，可以得出国产减肥保健食品375种，进口减肥保健食品10种。减肥保健食品按机制可分为5类，第一即左旋肉碱产品，然而左旋肉碱主要作用是运输脂肪到线粒体中进行氧化分解，如果运动量(能量消耗)不大，脂肪消耗不多，只是增加左旋肉碱并不会增加脂肪的氧化功能；第二即减肥茶，主要功能为润肠通便、清热解毒；三是中药(一般为健胃消食、利水渗湿、泻下药)及其提取物；四是代餐粉(或称膳食纤维或称奶昔)；以及其他。减肥保健食品机制多样，临床上引起肥胖的原因又非常多，很难用一两种模型来完全模拟以及评价。4.哺乳动物饲养成本高，且不符合动物保护3R(减少、替代、优化)原则。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种实验周期短、能同时进行多个供试品评价、高效廉价并且符合动物保护3R原则的评价保健食品减肥功能的方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种评价保健食品减肥功能的方法，包括以下部分：a)脂质分解代谢促进模型造模：选取斑马鱼水溶给予含有供试品的培养液设置供试品组，选取斑马鱼置于培养液中设置正常对照组，对供试品组和正常对照组进行整体脂肪染色，染色后在荧光显微镜下进行图片分析并采集数据，以斑马鱼的卵黄囊脂肪荧光信号强度S评价供试品的脂质分解代谢促进作用，b)抑制脂肪吸收模型造模：选取斑马鱼水溶给予含有供试品的培养液设置供试品组，选取斑马鱼置于培养液中设置模型对照组，供试品组及模型对照组处理40～60分钟后，分别水溶给予蛋黄粉处理；然后经多聚甲醛溶液固定、PBS缓冲液冲洗、丙二醇梯度脱水后，用油红O工作液染色处理，染色后观察斑马鱼甘油三酯并进行图片分析、采集数据，以斑马鱼肠腔至尾部血管脂肪光密度总和IOD评价供试品的脂肪吸收抑制作用，作为优选，a)脂质分解代谢促进模型造模中，选用受精后两天的斑马鱼。作为优选，b)抑制脂肪吸收模型造模中，选用受精后5天的斑马鱼。作为优选，斑马鱼选用黑色素等位基因突变型Albino系斑马鱼。作为优选，a)脂质分解代谢促进模型造模中，供试品组及正常对照组设置后处理20～28小时，再进行整体脂肪染色处理。作为优选，a)脂质分解代谢促进模型造模中，以水溶形式给予尼罗红进行整体染色处理。作为优选，b)抑制脂肪吸收模型造模中，蛋黄粉的添加量为0.1wt％；作为优选，b)抑制脂肪吸收模型造模中，多聚甲醛溶液的浓度为4wt％。作为优选，b)抑制脂肪吸收模型造模中，经多聚甲醛溶液固定后在4℃下处理8～14小时再进行PBS缓冲液冲洗处理。作为优选，b)抑制脂肪吸收模型造模中，油红O工作液中油红O的浓度为0.5wt％。因此，本专利技术具有以下有益效果：(1)斑马鱼减肥模型实验周期相对于大鼠实验(75-90天)，实验周期更短，仅需48小时；(2)由于斑马鱼饲养成本低，体积小，发育周期短、单次产卵次数高的特点能同时进行多个供试品的评价；(3)用斑马鱼进行保健食品减肥功效测价，实现了真正的高效和廉价；(4)顺从了欧盟颁布的动物保护3R福利，利用斑马鱼模式生物进行保健食品功效评价。附图说明图1为供试品A处理后斑马鱼卵黄囊脂肪荧光染色典型；图2为供试品B处理后斑马鱼肠腔至尾部血管脂肪染色典型图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术的技术方案作进一步的说明。显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。总实施例一种评价保健食品减肥功能的方法，包括以下部分：a)脂质分解代谢促进模型造模：选取受精后2天的黑色素等位基因突变型Albino系斑马鱼水溶给予含有供试品的培养液设置供试品组，选取斑马鱼置于培养液中设置正常对照组，处理20～28小时后，对供试品组和正常对照组以水溶形式给予尼罗红进行整体脂肪染色，染色后在荧光显微镜下进行图片分析并采集数据，以斑马鱼的卵黄囊脂肪荧光信号强度S评价供试品的脂质分解代谢促进作用，b)抑制脂肪吸收模型造模：选取受精后5天的黑色素等位基因突变型Albino系斑马鱼水溶给予含有供试品的培养液设置供试品组，选取斑马鱼置于培养液中设置模型对照组，供试品组及模型对照组处理40～60分钟后，分别水溶给予0.1wt％的蛋黄粉处理；然后经4wt％的多聚甲醛溶液在4℃下固定处理8～14小时，然后PBS缓冲液冲洗、丙二醇梯度脱水后，用浓度为0.5wt％的油红O工作液染色处理，染色后观察斑马鱼甘油三酯并进行图片分析、采集数据，以斑马鱼肠腔至尾部血管脂肪光密度总和IOD评价供试品的脂肪吸收抑制作用，实施例11.实验准备1.1实验动物：随机选取150尾受精后2天(2dpf)黑色素等位基因突变型Albino系斑马鱼，随机选取360尾受精后5天(5dpf)黑色素等位基因突变型Albino系斑马鱼。2.实验2.1脂质分解代谢促进模型：2.1.1原理：已知斑马鱼卵黄囊脂质成分(主要为甘油三酯和卵磷脂)与哺乳动物/人体腹部脂肪(白色脂肪，约95％为甘油三酯)相近，利用特异性活体荧光染料NileRed对脂肪进行染色标记，投喂产品后，在荧光显微镜下观察，荧光强度的变化可表明产品对正常斑马鱼脂质分解代谢的影响。2.1.2实验方法：随机选取150尾受精后2天(2dpf)黑色素等位基因突变型Albino系斑马鱼于六孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予供试品A208μg/mL、417μg/mL和833μg/mL三组浓度，阳性对照组白藜芦醇11.4μg/mL浓度，同时设置正常对照组，每孔容量为3mL。各实验组分别处理24h后，均水溶给予尼罗红进行整体脂肪染色。染色结束后，每组随机取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照并保存图片，利用NIS-ElementsD3.10高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，分析统计斑马鱼卵黄囊脂肪荧光信号强度(S)，以卵黄囊脂肪荧光信号强度的统计学结果评价供试品A对正常斑马鱼脂质分解代谢的影响。统计学处理结果用mean±SE表示，脂质分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种评价保健食品减肥功能的方法，其特征在于包括：/na)脂质分解代谢促进模型造模：/n选取斑马鱼水溶给予含有供试品的培养液设置供试品组，选取斑马鱼置于培养液中设置正常对照组，对供试品组和正常对照组进行整体脂肪染色，染色后在荧光显微镜下进行图片分析并采集数据，以斑马鱼的卵黄囊脂肪荧光信号强度S评价供试品的脂质分解代谢促进作用，

【技术特征摘要】
1.一种评价保健食品减肥功能的方法，其特征在于包括：
a)脂质分解代谢促进模型造模：
选取斑马鱼水溶给予含有供试品的培养液设置供试品组，选取斑马鱼置于培养液中设置正常对照组，对供试品组和正常对照组进行整体脂肪染色，染色后在荧光显微镜下进行图片分析并采集数据，以斑马鱼的卵黄囊脂肪荧光信号强度S评价供试品的脂质分解代谢促进作用，
b)抑制脂肪吸收模型造模：
选取斑马鱼水溶给予含有供试品的培养液设置供试品组，选取斑马鱼置于培养液中设置模型对照组，供试品组及模型对照组处理40～60分钟后，分别水溶给予蛋黄粉处理；然后经多聚甲醛溶液固定、PBS缓冲液冲洗、丙二醇梯度脱水后，用油红O工作液染色处理，染色后观察斑马鱼甘油三酯并进行图片分析、采集数据，以斑马鱼肠腔至尾部血管脂肪光密度总和IOD评价供试品的脂肪吸收抑制作用，





2.根据权利要求1所述的一种评价保健食品减肥功能的方法，其特征在于：
所述a)脂质分解代谢促进模型造模中，选用受精后两天的斑马鱼。


3.根据权利要求1所述的一种评价保健食品减肥功能的方法，其特征在于：
所述b)抑制脂肪吸收模型造模中，选用受精后5天的斑马鱼。


4.根据权利要求1或2或3所述的一种评价保健食品减肥功能的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴明珠，郭胜亚，朱晓宇，徐懿乔，黄燕烽，夏波，李春启，
申请(专利权)人：南京新环检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32