一种控制多肽穿过纳米孔速度的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种控制多肽穿过纳米孔的速度的方法及其在测定多肽的氨基酸序列中的应用，具体为将核酸连接到多肽上获得核酸‑多肽连接物，在核酸酶的存在下施加跨纳米孔的电压使所述连接产物通过纳米孔，通过核酸酶控制核酸的运动进而控制所链接的多肽的在纳米孔中的运动，以达到控制多肽通过纳米孔速度的目的。本发明专利技术在对多肽控速的同时，读取多肽通过纳米孔过程中的纳米孔电流信号获得多肽的电信号波形，所述电线号波形可进一步用于获得所述多肽的氨基酸序列，或用于鉴定所述多肽或其部分，也可用于构建多肽的电信号波形库。

【技术实现步骤摘要】
一种控制多肽穿过纳米孔速度的方法及其应用
本专利技术涉及蛋白质/多肽检测领域，具体涉及一种控制多肽穿过纳米孔的速度的方法及其在测定多肽的氨基酸序列中的应用。
技术介绍
蛋白质是生命的物质基础，与各种生命活动息息相关，对蛋白质的氨基酸序列和其它特征进行表征对医学和生命科学有着重要意义。传统的蛋白质测序方法包括Edman降解法和质谱法。专利CN106645437A公开了一种基于化学修饰改性和同位素标记的多肽氨基酸序列从头测序方法。专利CN104034791A公开了了一种基于碰撞诱导裂解(CID)与电子转移裂解(ETD)质谱谱图融合的多肽从头测序方法。传统的蛋白质测序方法成本高、耗时长、操作复杂。因而，亟需一种高通量、低成本的蛋白质测序和检测方法。纳米孔道分析技术是一种低成本、快速、无需标记的单分子检测技术，已成功用于核酸测序领域。纳米孔测序法是采用电泳技术，借助电泳驱动单个DNA或RNA分子逐一通过纳米孔来实现测序的。专利CN104694649A公开了一种核酸分子低穿孔速度的纳米孔测序方法及其专用的纳米孔器件。专利CN106本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种控制多肽穿过纳米孔速度的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将多肽与核酸连接，获得核酸-多肽连接物；/n2)在核酸酶的存在下，施加跨纳米孔的电压使所述核酸-多肽连接物通过纳米孔，所述的核酸酶控制核酸的运动，进而控制所连接多肽穿过纳米孔的速度。/n

【技术特征摘要】
1.一种控制多肽穿过纳米孔速度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将多肽与核酸连接，获得核酸-多肽连接物；
2)在核酸酶的存在下，施加跨纳米孔的电压使所述核酸-多肽连接物通过纳米孔，所述的核酸酶控制核酸的运动，进而控制所连接多肽穿过纳米孔的速度。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的核酸酶是解旋酶、聚合酶或转位酶。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述聚合酶为phi29聚合酶。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述解旋酶为Hel308家族解旋酶。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述解旋酶为Hel308Tga或其变体的序列，Hel308Mbu或其变体的序列，Hel308Pfu或其变体的序列，Hel308Mma或其变体的序列，Hel308Mok或其变体的序列，Hel308Fac或其变体的序列，Hel308Csy或其变体的序列，Hel308Mhu或其变体的序列，或F8813蛋白或其变体的序列。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸为DNA或RNA。


7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸为单链DNA。


8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸与所述多肽共价键结合相连或通过连接基团相连形成核酸-多肽连接物。


9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述核酸与所述多肽共价键结合相连方式选自通过肟键结合相连、通过酰胺键结合相连、通过硫醚键结合相连、通过二硫键结合相连、通过磷酰键结合相连、通过腙键结合相连、通过酰脲键结合相连、通过click反应形成的环结合相连。


10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纳米孔为生物纳米孔或固态纳米孔。


11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述生物纳米孔选自金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米孔、MspA纳米孔、Csgg纳米孔、phi29纳米孔和FraC纳米孔，优选为MspA纳米孔。


12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述固态纳米孔选自石墨烯纳米孔、氮化硅纳米孔、二氧化钛纳米孔、氧化铝纳米孔。


13.一种测定多肽的电信号波形的方法，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：白净卫，陈志杰，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11