一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法，通过磁珠法高选择性的分离外泌体中ecDNA，无需使用超速离心等复杂操作，也避免使用氯化铯等有毒试剂，能够适应自动化操作分离得到较高纯度ecDNA产物，极大地提高了实验效率，有效节省人力、时间成本。

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法
本专利技术涉及分子生物
，尤其涉及一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法。
技术介绍
外泌体(exosome)是一种30-150nm大小、极低密度的细胞外纳米级囊状结构，由细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程而形成。外泌体在被发现后的很长一段时间内都没有引起研究者的注意，直到纳米分析技术的引进，以及2013年诺贝尔生物医学奖的公布，这个直径只有几十纳米的颗粒受到了前所未有的重视。几乎所有细胞都会分泌外泌体，细胞分泌的外泌体携带了来源细胞的诸多生物学信息，因此，外泌体也被认为是重要的潜在生物标记物，可以及时的反映来源细胞的生理与病理状态。ecDNA是近期肿瘤学领域的研究热点，国内外的相关研究还处于起步阶段。ecDNA指的是从染色体上脱落，脱离染色体以环状结构存在的DNA。研究表明ecDNA普遍存在于肿瘤细胞中，是原癌基因的载体，是肿瘤异质性的驱动力之一，会推动肿瘤的快速演化，并可能与肿瘤的耐药相关。目前，可查询的文献报道目前关于ecDNA提取的方法主要是采用氯化铯梯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法，其特征在于，包括：/n使用碱性洗涤磁珠法处理外泌体产物获得ecDNA产物；/n所述碱性洗涤磁珠法包括使用洗涤液II对吸附有核酸的磁珠进行洗涤操作，和，使用洗涤液III对经过洗涤液II洗涤操作的磁珠进行洗涤操作；/n所述洗涤液II的pH为7至12；/n所述洗涤液III包含有蛋白酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法，其特征在于，包括：
使用碱性洗涤磁珠法处理外泌体产物获得ecDNA产物；
所述碱性洗涤磁珠法包括使用洗涤液II对吸附有核酸的磁珠进行洗涤操作，和，使用洗涤液III对经过洗涤液II洗涤操作的磁珠进行洗涤操作；
所述洗涤液II的pH为7至12；
所述洗涤液III包含有蛋白酶。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碱性洗涤磁珠法包括：
使用磁珠悬液II对外泌体裂解后的产物进行核酸吸附操作；
使用洗涤液II对吸附有核酸的磁珠进行洗涤操作；
使用洗涤液III对经过洗涤液II洗涤操作的磁珠进行洗涤操作；
使用洗脱液对经过洗涤液III洗涤操作的磁珠进行洗脱操作，使磁珠上吸附的ecDNA被洗脱。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述外泌体裂解包括使用裂解液对外泌体产物进行裂解操作；所述裂解液包括蛋白酶抑制剂。


4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述洗涤液II包括终浓度为0.1至100mmol/L的Tris。


5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗涤液II包括终浓度为20mmol/L的Tris，且所述洗涤液II的pH为10。


6.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述洗涤液III包括浓度为5至20mmol/L的Tris、终浓度为0.1至5mg/mL的蛋白酶K、体积百分比浓度70至80％的乙醇。


7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述洗涤液III包括浓度为10mmol/L的Tris、终浓度为0.5mg/mL的蛋白酶K、体积百分比浓度75％的乙醇。


8.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述洗脱液包括终浓度为5至20mmol/L的Tris，且所述洗脱液的pH为8.5。


9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述洗脱液包括终浓度为10mmol/L的Tris，且所述洗脱液的pH为8.5。


10.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述裂解液包括终浓度为1.8至5mmol/L的(NH4)2SO4、0.1至3mmol/L的NaCl、0.01至15mmol/L的PMSF和体积比为0.1至10％的Tritonx-100。


11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述裂解液包括终浓度为3mmol/L的(NH4)2SO4、0.15mmol/L的NaCl、1mmol/L的PMSF和体积比为1％的Tritonx-100。


12.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述核酸吸附操作包括加入磁珠悬液II震荡混匀，室温孵育3分钟，瞬时离心3秒，吸磁后弃除上清；所述洗涤操作包括加入洗涤液震荡混匀，瞬时离心3秒，吸磁后...

【专利技术属性】
技术研发人员：臧远胜，马跃，张亚楠，
申请(专利权)人：上海长征医院，上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31