一种封闭剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种封闭剂及其制备方法，属于免疫检测技术领域，所述封闭剂包括活化后的动物抗体和活化后的灭活标记蛋白，所述活化后的灭活标记蛋白为对标记蛋白进行灭活，后进行活化获得，所述标记蛋白包括碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶中的一种。所述方法包括：采用活化剂A对动物抗体处理，获得活化后的动物抗体；将标记蛋白灭活，获得灭活标记蛋白，后采用活化剂B对所述灭活标记蛋白处理，获得活化后的灭活标记蛋白；将所述活化后的动物抗体和所述活化后的灭活标记蛋白混匀，后纯化，获得所述封闭剂。该新的封闭剂可以用于封闭固相载体上的位点(空白位点和活化位点)以减少标记物与固相载体的非特异性结合，进而提高试剂盒的灵敏度和精密度。

【技术实现步骤摘要】
一种封闭剂及其制备方法
本专利技术属于免疫检测
，涉及一种封闭剂及其制备方法。
技术介绍
免疫分析法是基于抗原抗体高特异性和高灵敏性反应的一种技术，该技术已经在医学检验、环境监测等方面得到广泛应用。目前市场上常见的免疫分析产品有酶联免疫检测法(ELISA)、荧光免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CLIA)、放射免疫分析(RIA)等；其基本检测原理为：将一种抗体固定于固相载体上，用于捕获样本中待测物，然后加入样本和标记物(标记物可为ALP/HRP、吖啶酯等标记的另一种抗体(夹心法)或待测物类似物(竞争法))，反应完成后清洗除去反应体系中未结合的物质，最后加入相应底物(AMPPD、CDPStar、鲁米洛等)，底物与标记物反应产生信号，根据信号值和定标曲线计算出样本中待测物浓度。通常固相载体上的位点(空白位点和活化位点)不会完全被抗体占据，因而会有部分标记物通过非特异性吸附于固相载体，导致异常信号产生，进而干扰测试结果，影响测试的灵敏度、精密度。为提高检测试剂的灵敏度和精密度，需要对包被抗体的固相载体上的位点进行封闭以减少非特异性吸附。目前常用的封闭剂有牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、动物抗体等蛋白溶液，此类封闭剂在进行封闭时，多以非特异性吸附的方式对固相载体空白位点进行封闭，以占据的方式阻止标记物与固相载体的空白位点进行结合。但是这种封闭方式存在两个缺点：①封闭过程由于是非特异性吸附的方式导致结果是随机的，仍然有部分空白位点未被封闭；②吸附的方式导致大量活化的位点未封闭，同样会结合标记物从而影响测试结果。因此急需开发一种新的封闭剂，以解决检测试剂灵敏度和精密度差的问题。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种封闭剂及其制备方法，该新的封闭剂可以用于封闭固相载体上的位点(空白位点和活化位点)以减少标记物与固相载体的非特异性结合，进而提高试剂盒的灵敏度和精密度。本专利技术通过以下技术方案实现：本专利技术的目的之一在于提供一种封闭剂，所述封闭剂包括活化后的动物抗体和活化后的灭活标记蛋白，所述活化后的灭活标记蛋白为对标记蛋白进行灭活，后进行活化获得，所述标记蛋白包括碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶中的一种。进一步地，所述活化后的动物抗体和所述活化后的灭活标记蛋白的质量比为1：(0.5～4)。更进一步地，所述活化后的动物抗体和所述活化后的灭活标记蛋白的质量比为1：(2.5～3.5)。进一步地，所述动物抗体为纯度＞95％的IgG或IgM抗体；所述动物抗体的来源包括鼠、兔、山羊、牛源中的一种。本专利技术的目的之二在于提供所述的封闭剂的制备方法，所述方法包括：采用活化剂A对动物抗体处理，获得活化后的动物抗体；将标记蛋白灭活，获得灭活标记蛋白，后采用活化剂B对所述灭活标记蛋白处理，获得活化后的灭活标记蛋白；将所述活化后的动物抗体和所述活化后的灭活标记蛋白混匀，后纯化，获得所述封闭剂。进一步地，所述动物抗体与所述活化剂A的质量比为1：(3～10)；所述活化剂A选自2-亚氨基硫烷盐酸盐、(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)二环己基碳二亚胺中的一种。进一步地，所述灭活标记蛋白与所述活化剂B的质量比为1：(0.8～1.5)；所述活化剂B选自琥珀酰亚胺-4-(N-马来酰亚胺)环已烷-1-1羟酸酯、戊二醛、过碘酸钠中的一种。进一步地，所述灭活采用的方式包括高温灭活、强酸灭活、强碱灭活。进一步地，所述将所述活化后的动物抗体和所述活化后的灭活标记蛋白混匀时，加入氯化镁溶液，所述氯化镁溶液的浓度为(0.8～1.5)M。进一步地，所述纯化采用分子筛进行处理本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：本专利技术一种封闭剂及其制备方法，用活化后的动物抗体和活化后的灭活标记蛋白的结合物作为新的封闭剂进行封闭，比单独的活化后的动物抗体或者单独的活化后的灭活标记蛋白的效果更好，灵敏度和精密度更高。由于标记蛋白会在免疫反应中参与反应，故先将其灭活；又由于活化后的动物抗体和活化后的灭活标记蛋白要相结合，两者均需要先将表面基团活化才能进行化学结合。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。图1是不同实验组LOB；图2是采用样本1的不同对比例CV值；图3是为采用样本2的不同对比例CV值。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。本专利技术实施例提供的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：根据本专利技术的典型实施方式之一，提供一种封闭剂，所述封闭剂包括活化后的动物抗体和活化后的灭活标记蛋白，所述活化后的灭活标记蛋白为对标记蛋白进行灭活，后进行活化获得，所述标记蛋白包括碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶中的一种。现有技术中，在免疫反应中标记物与抗体容易和固相载体上未结合的位点发生非特异性反应，从而影响试剂灵敏度和精密度。为防止和减少吸附的发生，在固相载体偶联物制备过程中对未结合的位点，结合非特异性反应性发生的原因，专利技术中用动物血清(抗体，实施例中用MouseIgG)和标记物(实施例中用ALP)的结合物进行封闭，且两者均需要先将表面基团活化才能进行化学结合。由于ALP会在免疫反应中参与反应，故先将其灭活。将动物血清和标记物结合起来作为封闭剂比单独作用效果更好。采用ALP与动物抗体结合物原理：①结合物的分子量(体积)比单个的大，在封闭过程中更容易被识别而形成封闭，提高封闭效率；②单个的ALP或者动物抗体不带电，两者活化后结合一起会形成带电的基团，更容易与同样带电的固相载体上空白位点进行物理结合；③ALP和动物抗体是被活化的，也会固相载体上未结合抗体的活化的位点进行结合。结合物比单个的能有效提高封闭效率，对空白位点和活化的位点同时进行封闭。所述动物抗体为纯度＞95％的IgG或IgM抗体；所述动物抗体的来源包括鼠、兔、山羊、牛源中的一种。本专利技术实施例中选用MouseIgG，在其他实施方式中MouseIgG可更换为MouseIgM或其他物种(兔(Rabbit)、山羊(Goat)、牛(Bovine))IgG/IgM。作为优选的实施方式，所述活化后的动本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种封闭剂，其特征在于，所述封闭剂包括活化后的动物抗体和活化后的灭活标记蛋白，所述活化后的灭活标记蛋白为对标记蛋白进行灭活，后进行活化获得，所述标记蛋白包括碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶中的一种。/n

【技术特征摘要】
1.一种封闭剂，其特征在于，所述封闭剂包括活化后的动物抗体和活化后的灭活标记蛋白，所述活化后的灭活标记蛋白为对标记蛋白进行灭活，后进行活化获得，所述标记蛋白包括碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶中的一种。


2.根据权利要求1所述的一种封闭剂，其特征在于，所述活化后的动物抗体和所述活化后的灭活标记蛋白的质量比为1：(0.5～4)。


3.根据权利要求1所述的一种封闭剂，其特征在于，所述动物抗体为纯度＞95％的IgG或IgM抗体；所述动物抗体的来源包括鼠、兔、山羊、牛源中的一种。


4.一种权利要求1-3任一所述的封闭剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
采用活化剂A对动物抗体处理，获得活化后的动物抗体；
将标记蛋白灭活，获得灭活标记蛋白，后采用活化剂B对所述灭活标记蛋白处理，获得活化后的灭活标记蛋白；
将所述活化后的动物抗体和所述活化后的灭活标记蛋白混匀，后纯化，获得所述封闭剂。


5.根据权利要求4所述的一种封闭剂的制备方法，其特征在于，所述动物抗体与所述活化剂A的质量比为1：(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄丹，来祥兵，赵愿安，舒芹，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42