一对含双氮生物碱对映体及其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物领域，具体地说是一对深海沉积物真菌来源的含双氮生物碱对映体的制备方法及其应用。其具体结构式如（I）所示，制备方法为将深海沉积物来源的真菌草酸青霉（

【技术实现步骤摘要】
一对含双氮生物碱对映体及其制备和应用
本专利技术涉及微生物领域，具体地说是一对深海沉积物真菌来源的含双氮生物碱对映体的制备方法及其应用。
技术介绍
恶性肿瘤一直对人类的健康具有严重的威胁，虽然临床被批准了很多药物用于肿瘤细胞治疗，但相当一部分药物具有严重的副作用。因此，越来越多科学家把目光投入到具有独特环境的海洋中，特别是低温低氧黑暗的深海，以期望发现具有良好的抑制肿瘤细胞效果且副作用较少的化合物。其中，生物碱类化合物作为一种具有极高生物活性的天然产物,在抑制肿瘤细胞增殖和抑菌方面的潜力也逐渐显现出来。深海沉积物来源真菌次级代谢产物具有针对性强、活性显著且结构新颖的优点，能够为科学家在制备抑菌剂及新药结构修饰和合成方面提供新的思路。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一对含双氮生物碱对映体及其制备和应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一株草酸青霉菌的应用，所述菌株在作为抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。一株草酸青霉菌的应用，所述菌株在制备含双氮生物碱对映体中的应用。一种含双氮生物碱对映体，含双氮生物碱对映体为R或S，结构式如式（I）所示，即手性位点为12.（I）。一种含双氮生物碱对映体的制备方法，将深海沉积物来源的真菌草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经纯化后，即为式（I）所示的含双氮生物碱对映体；所述的草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37于2020年6月9日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCCNo.19913；（I）。具体制备步骤：1）将草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37接种于真菌培养基中，发酵10-60天，之后经有机溶剂提取并浓缩，得到其粗提物；2）取步骤1）中获取的粗提物进行硅胶柱层析，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层层析检测；3）收集步骤2）中洗脱组分再依次经反相硅胶柱层析、凝胶柱层析、高效液相色谱反相柱和高效液相色谱手性柱，即得如式（I）所示对一对含双氮生物碱对映体。步骤1）中真菌培养基为大米固体培养基、菊芋葡萄糖液体培养基或马铃薯葡萄糖液体培养基；有机溶剂提取液为乙酸乙酯、石油醚、正己烷、环己烷、二氯甲烷、甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇中一种或几种；其中几种物质以任意比例混合。步骤２）中洗脱液为体积比50-0:1的石油醚-乙酸乙酯、石油醚-乙醇、石油醚-丙醇、石油醚-异丙醇、二氯甲烷-乙酸乙酯、二氯甲烷-甲醇、二氯甲烷-乙醇、二氯甲烷-丙醇、二氯甲烷-异丙醇中的一组或几组。步骤３）所述反相硅胶柱层析洗脱液为体积比5-0:3的水-甲醇或水-乙醇；凝胶柱层析洗脱液为体积比2-0:1的二氯甲烷-甲醇或二氯甲烷-乙醇；高效液相色谱反相柱流动相为体积比为10-0:3的水-甲醇或水-乙腈，洗脱流速为1-3毫升/分钟，截留10-60分钟组分；高效液相色谱手性柱流动相为体积比10-0:3的正己烷-乙醇或正己烷-异丙醇，洗脱流速为1-2毫升/分钟，截留5-13.5分钟组分即得目标产物1（R）；截留14-30分钟组分即得目标产物2（S）。一种含双氮生物碱对映体的应用，所述的一对含双氮生物碱对映体在制备抑制肿瘤细胞增殖方面药物中的应用。所述一对含双氮生物碱对映体用于制备抑菌剂中的应用。本专利技术具有以下优点：本专利技术的一对含双氮生物碱对映体是通过分离于深海沉积物来源的真菌草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37，经发酵提取、分离纯化获得一对含双氮生物碱对映体，对映体具有抑制肿瘤细胞增殖的作用，同时还具有抑菌的活性。具体实施方式：以下结合实例对本专利技术的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本专利技术，并不局限于本专利技术。实施例1草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37的获取：1、菌株的分离：将深海沉积物样品用无菌海水进行梯度稀释，分离稀释度采用10-4-10-6，再各取0.2、0.4、0.6、0.8毫升分别涂布于PDA培养基、PSA培养基、YM培养基和查氏培养基。于28摄氏度培养5-30天，进行真菌菌落观察。根据平板上菌落形态特征等不同，进行平板划线纯化培养。2、菌株的鉴定:2.1、形态学及生理生化特征鉴定：该菌株生物学特性，在PDA培养基上，28摄氏度恒温培养时，菌落呈墨绿色绒状，具有较为浓密孢子块，生长较快，初步鉴定为青霉。2.2、分子鉴定：提取并克隆该菌种核糖体rDNA基因转录间隔序列进行基因测序，得到基因序列如下：CCAACCTCCCACCCGTGTTTATCGTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTCACGGCCGCCGGGGGGCATCCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACACACAAACGAACTCTTGTCTGAAGATTGCAGTCTGAGTACTTGACTAAATCAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCTCTCGCCCCCCGCTTCCGGGGGGCGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTCGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCCCGCCGGCGAACACCATCAATCTTAACCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAAC，经过检索对比，将菌株13-37确定为草酸青霉（Penicilliumoxalicum）。实施例2深海沉积物来源的一对含双氮生物碱对映体的结构如式（I）所示，（I）。该对含双氮生物碱对映体具有以下理化特性：目标产物1（R）:无色油状；比旋光度[α]28D=168.6(c0.04,MeOH)目标产物2（S）:无色油状；比旋光度[α]28D=-175.7(c0.05,MeOH)该对含双氮生物碱对映体的NMR数据如下：核磁共振氢谱（DMSO-d6，500MHz）δH8.01s,8.12dd(7.9,1.2),7.55dd(7.9,7.1),7.83ddd(8.1,7.1,1.2),7.62d(8.1),5.41dd(11.1,4.9),3.41dd(14.3,4.9),3.32dd(14.3,11.1),6.87d(8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株草酸青霉菌的应用，其特征在于：所述菌株在作为抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一株草酸青霉菌的应用，其特征在于：所述菌株在作为抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。


2.一株草酸青霉菌的应用，其特征在于：所述菌株在制备含双氮生物碱对映体中的应用。


3.一种含双氮生物碱对映体，其特征在于：含双氮生物碱对映体为R或S，结构式如式（I）所示



（I）。


4.一种权利要求3所述的含双氮生物碱对映体的制备方法，其特征在于：将深海沉积物来源的真菌草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经纯化后，即为式（I）所示的含双氮生物碱对映体；所述的草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37于2020年6月9日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCCNo.19913；



（I）。


5.按权利要求4所述的含双氮生物碱对映体的制备方法，其特征在于具体制备步骤：
1）将草酸青霉（Penicilliumoxalicum）13-37接种于真菌培养基中，发酵10-60天，之后经有机溶剂提取并浓缩，得到其粗提物；
2）取步骤1）中获取的粗提物进行硅胶柱层析，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层层析检测；
3）收集步骤2）中洗脱组分再依次经反相硅胶柱层析、凝胶柱层析、高效液相色谱反相柱和...

【专利技术属性】
技术研发人员：季乃云，刘雅萍，
申请(专利权)人：中国科学院烟台海岸带研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37