【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】合成RIG-I样受体激动剂相关申请本申请要求于2018年4月19日提交的美国临时申请第62/659,999号的权益。上述申请的整个内容通过此引用并入本文。
技术介绍
引入到细胞中的外源性核酸(尤其是病毒核酸)会诱导先天免疫应答，从而引起干扰素(IFN)产生和细胞死亡等事件。在感应到病毒RNA时，RIG-I样受体会诱导I型干扰素(IFN)分泌，从而导致感染的细胞和相邻细胞中抗病毒IFN诱导的蛋白质上调，这会抑制病毒复制。另外的下游事件吸引免疫细胞并触发适应性免疫应答。另外，据报道，RIG-I配体会诱导许多不同类型的肿瘤细胞的凋亡，但不会诱导正常细胞的凋亡。仍然需要另外的且改进的组合物和方法来调节免疫调节蛋白的活性。此类药剂可以用于癌症免疫疗法和其它病状(如慢性感染)的治疗。需要开发用于多种治疗性免疫调节应用的改进的RIG-I样受体配体。
技术实现思路
本公开至少部分地基于充当RIG-I样受体激动剂的合成RNA分子的发现。在一些方面，本公开提供了一种合成RIG-I样受体(RLR)激动剂，其与RIG-I样受体...
【技术保护点】
1.一种合成的RIG-I样受体(RLR)激动剂，其与RIG-I样受体(RLR)特异性结合，其中所述激动剂包括平末端的发夹RNA，所述平末端的发夹RNA包括通过接头与第二多核苷酸连接的第一多核苷酸，其中所述第一多核苷酸与所述第二多核苷酸充分互补以形成双链体，其中所述双链体包括少于19个碱基对，其中第一寡核苷酸的最靠近5'的核苷酸包括5'二磷酸酯或三磷酸酯部分或其衍生物或类似物，并且其中所述激动剂包括序列基序，所述序列基序相对于不包括所述序列基序的激动剂提供由所述RLR介导的至少一种提高的生物活性。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180419 US 62/6599991.一种合成的RIG-I样受体(RLR)激动剂，其与RIG-I样受体(RLR)特异性结合，其中所述激动剂包括平末端的发夹RNA，所述平末端的发夹RNA包括通过接头与第二多核苷酸连接的第一多核苷酸，其中所述第一多核苷酸与所述第二多核苷酸充分互补以形成双链体，其中所述双链体包括少于19个碱基对，其中第一寡核苷酸的最靠近5'的核苷酸包括5'二磷酸酯或三磷酸酯部分或其衍生物或类似物，并且其中所述激动剂包括序列基序，所述序列基序相对于不包括所述序列基序的激动剂提供由所述RLR介导的至少一种提高的生物活性。
2.根据权利要求1所述的激动剂，其中所述序列基序选自由以下组成的组：
(i)GT重复基序；
(ii)GA重复基序；
(iii)AUCG重复基序；
(iv)AU重复基序；
(v)二嘧啶基序；
(vi)二嘌呤基序；
(vii)嘧啶三联体基序；
(viii)嘌呤三联体基序；
(ix)回文序列基序；以及
(x)(i)到(ix)的任意组合。
3.根据权利要求1和2所述的激动剂，其中所述至少一种提高的生物活性选自：
(i)RLR介导的细胞因子产生的增加；
(ii)干扰素刺激的基因的RLR介导的表达的增加；
(iii)RLR介导的细胞内信号传导的增加；
(iv)与RLR的结合亲和力的增加；以及
(v)(i)到(iv)的任意组合。
4.根据权利要求1到3所述的激动剂，其中所述序列基序为GT重复基序，所述GT重复基序包括<19个、约15到18个、约15个、约10到15个、约10个、约5到10个、约5个、约4个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个或4个鸟嘌呤和胸腺嘧啶核苷酸或其衍生物或类似物的序列。
5.根据权利要求4所述的激动剂，其中所述GT重复基序为[GT]n，其中n＝2到9。
6.根据权利要求4和5所述的激动剂，其中所述GT重复基序为[GT]7。
7.根据权利要求4和5所述的激动剂，其中所述GT重复基序为[GT]3，并且其中所述GT重复基序之后分别为嘌呤三联体基序和UCG。
8.根据权利要求7所述的激动剂，其中所述嘌呤三联体基序为GGA。
9.根据权利要求1到3所述的激动剂，其中所述序列基序为GA重复基序，所述GA重复基序包括<19个、约15到18个、约15个、约10到15个、约10个、约5到10个、约5个、约4个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个或4个鸟嘌呤和腺嘌呤核苷酸或其衍生物或类似物的序列。
10.根据权利要求9所述的激动剂，其中所述GA重复基序为[GA]n，其中n＝2到9。
11.根据权利要求10所述的激动剂，其中所述GA重复基序为[GA]7。
12.根据权利要求1到3所述的激动剂，其中所述序列基序为AUCG重复基序，所述AUCG重复基序包括<19个、约16个、约12到16个、约12个、约8到12个、约6个、16个、12个、8个腺嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸或其衍生物或类似物的序列。
13.根据权利要求12所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序为[AUCG]n，其中n＝2到4。
14.根据权利要求13所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序为[AUCG]3。
15.根据权利要求12到14所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是CG或二嘧啶基序。
16.根据权利要求15所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是CG。
17.根据权利要求15所述的激动剂，其中所述二嘧啶基序为CC。
18.根据权利要求12到14所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是二嘌呤基序。
19.根据权利要求18所述的激动剂，其中所述二嘌呤基序为GA。
20.根据权利要求18所述的激动剂，其中所述二嘌呤基序为II。
21.根据权利要求12到20中任一项所述的激动剂，其中构成所述AUCG重复基序的U被经过修饰的核苷取代。
22.根据权利要求21所述的激动剂，其中所述经过修饰的核苷为核糖胸苷(T)。
23.根据权利要求12到20中任一项所述的激动剂，其中构成所述AUCG重复基序的G被经过修饰的核苷取代。
24.根据权利要求23所述的激动剂，其中所述经过修饰的核苷为肌苷(I)。
25.根据权利要求12到14所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是IG。
26.根据权利要求12到14所述的激动剂，其中构成所述AUCG重复序列的G被肌苷(I)取代，并且其中所述AUCG重复序列之前是肌苷(I)。
27.根据权利要求26所述的激动剂，其中所述第一多核苷酸的最靠近5'的核苷酸是肌苷(I)。
28.根据权利要求12和13所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序为[AUCG]2。
29.根据权利要求28所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是二嘌呤基序。
30.根据权利要求29所述的激动剂，其中所述二嘌呤基序为GG。
31.根据权利要求28所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是嘌呤三联体。
32.根据权利要求31所述的激动剂，其中所述嘌呤三联体为GGG。
33.根据权利要求28所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是CCCCCG。
34.根据权利要求28所述的激动剂，其中所述AUCG重复基序之前是TCGUCG。
35.根据权利要求1到3所述的激动剂，其中所述序列基序为回文序列，所述回文序列包括以产生回文的任何顺序连接的<19个、约15到18个、约15个、约10到15个、约10个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个或4个核苷酸或其衍生物或类似物的序列。
36.根据前述权利要求中任一项所述的激动剂，其中所述接头的侧翼是AU。
37.根据前述权利要求中任一项所述的激动剂，其中所述接头的侧翼是AU重复基序，其中所述AU重复基序为[AU]n，其中n＝2到3。
38.根据权利要求37所述的激动剂，其中所述AU重复基序为[AU]2。
39.一种合成的RIG-I样受体(RLR)激动剂，其与RIG-I样受体(RLR)特异性结合，其中所述激动剂包括平末端的发夹RNA，所述平末端的发夹RNA包括式：
5'-(N1-N2-X1)-L-(X2-N3-N4)-3'，其中
(i)(N1-N2-X1)包括第一多核苷酸，所述第一多核苷酸包括连接的核苷酸N1、N2和X1；
(ii)(X2-N3-N4)包括第二多核苷酸，所述第二多核苷酸包括连接的核苷酸X2、N3和N4；
(iii)N1、N2、N3和N4各自包括单个核苷酸，所述单个核苷酸包括选自由以下组成的组的核苷：腺苷、鸟苷、胞苷、5-甲基尿苷、尿苷和肌苷；
(iv)N1与N4碱基配对；
(v)N2与N3碱基配对；
(vi)N1包括5'二磷酸酯或三磷酸酯部分或其衍生物或类似物；
(vii)X1和X2各自为包括选自由以下组成的组的核苷的寡核苷酸：腺苷、鸟苷、胞苷、5-甲基尿苷、尿苷和肌苷；
(viii)X1与X2互补；
(ix)X1和X2各自的长度为12个核苷酸到16个核苷酸，并且长度相同；并且
(x)L为可操作地连接所述第一多核苷酸与所述第二多核苷酸的接头，
其中N1、N2、N3和N4中的至少一个为肌苷，和/或X1和/或X2中的至少一个包括至少一个肌苷核苷，并且其中所述肌苷核苷与所述发夹RNA中的胞苷碱基配对。
40.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1包括肌苷，并且N4包括胞苷。
41.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1包括胞苷，并且N4包括肌苷。
42.根据权利要求39所述的激动剂，其中N2包括肌苷，并且N3包括胞苷。
43.根据权利要求39所述的激动剂，其中N2包括胞苷，并且N3包括肌苷。
44.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1包括鸟苷。
45.根据权利要求39所述的激动剂，其中N2包括鸟苷。
46.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1包括胞苷。
47.根据权利要求39所述的激动剂，其中N2包括胞苷。
48.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，并且N3和N4包括胞苷。
49.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括鸟苷。
50.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷。
51.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括肌苷。
52.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1包括肌苷，并且N4包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
53.根据权利要求39所述的激动剂，其中N2包括肌苷，并且N3包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
54.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，N3和N4包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
55.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2各自包括至少一个肌苷。
56.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括鸟苷，并且其中X1和X2各自包括至少一个肌苷。
57.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2各自包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
58.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括鸟苷，并且其中X1和X2各自包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
59.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
60.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2各自包括至少一个肌苷。
61.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括肌苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
62.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
63.根据权利要求39所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括肌苷，并且其中X1和X2包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
64.根据权利要求39所述的激动剂，其中X1和X2各自为12个核苷酸并且包括1个、2个、3个或4个肌苷核苷。
65.根据权利要求39所述的激动剂，其中X1和X2各自为13个核苷酸并且包括1个、2个、3个、4个或5个肌苷核苷。
66.根据权利要求39所述的激动剂，其中X1和X2各自为14个核苷酸并且包括1个、2个、3个、4个、5个或6个肌苷核苷。
67.根据权利要求39所述的激动剂，其中X1和X2各自为15个核苷酸并且包括1个、2个、3个、4个、5个、6个或7个肌苷核苷。
68.根据权利要求39所述的激动剂，其中X1和X2各自为16个核苷酸并且各自包括1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个肌苷核苷。
69.根据权利要求39所述的激动剂，其中X1和X2各自为12个核苷酸并且包括至少10％、20％、30％或40％肌苷核苷。
70.一种合成的RIG-I样受体(RLR)激动剂，其与RIG-I样受体(RLR)特异性结合，其中所述激动剂包括平末端的发夹RNA，所述平末端的发夹RNA包括式：
5'-(N1-N2-X1)-L-(X2-N3-N4)-3'，其中
(i)(N1-N2-X1)包括第一多核苷酸，所述第一多核苷酸包括连接的核苷酸N1、N2和X1；
(ii)(X2-N3-N4)包括第二多核苷酸，所述第二多核苷酸包括连接的核苷酸X2、N3和N4；
(iii)N1、N2、N3和N4各自包括单个核苷酸，所述单个核苷酸包括选自由以下组成的组的核苷：腺苷、鸟苷、胞苷、5-甲基尿苷、尿苷和肌苷；
(iv)N1与N4碱基配对；
(v)N2与N3碱基配对；
(vi)N1包括5'二磷酸酯或三磷酸酯部分或其衍生物或类似物；
(vii)X1包括序列基序[AUCN5]x，其中N5为包括鸟苷或肌苷，其中x为值指示序列基序的数量的整数，并且其中x＝3或4；
(viii)X2包括序列基序[CN6AU]y，其中N6包括鸟苷或肌苷，其中y为值指示序列基序的数量的整数，并且其中y＝3或4；
(ix)L为可操作地连接所述第一多核苷酸与所述第二多核苷酸的接头，
任选地其中N1、N2、N3和N4中的至少一个为肌苷，并且其中所述肌苷核苷与所述发夹RNA中的胞苷碱基配对。
71.根据权利要求70所述的激动剂，其中N5包括肌苷，并且N6包括肌苷。
72.根据权利要求71所述的激动剂，其中N5包括鸟苷，并且N6包括肌苷。
73.根据权利要求72所述的激动剂，其中N5包括肌苷，并且N6包括鸟苷。
74.根据权利要求73所述的激动剂，其中N5包括鸟苷(G)，并且N6包括鸟苷(G)。
75.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中x＝3，并且y＝3。
76.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中x＝4，并且y＝4。
77.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N1包括肌苷(I)，并且N4包括胞苷(C)。
78.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N2包括肌苷(I)，并且N3包括胞苷(C)。
79.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N3包括肌苷(I)，并且N2包括胞苷(C)。
80.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N4包括肌苷(I)，并且N1包括胞苷(C)。
81.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N1包括鸟苷(G)。
82.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N2包括鸟苷(G)。
83.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N1包括胞苷(C)。
84.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N2包括胞苷(C)。
85.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷(G)，并且N3和N4包括胞苷(C)。
86.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷(C)，并且N3和N4包括鸟苷(G)。
87.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷(I)，并且N3和N4包括胞苷(C)。
88.根据权利要求70到74中任一项所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷(C)，并且N3和N4包括肌苷(I)。
89.一种合成的RIG-I样受体(RLR)激动剂，其与RIG-I样受体(RLR)特异性结合，其中所述激动剂包括平末端的发夹RNA，所述平末端的发夹RNA包括非核苷酸接头，并且其中所述激动剂包括式：
5'-(N1-N2-X1)-L-(X2-N3-N4)-3'，其中
(i)(N1-N2-X1)包括第一多核苷酸，所述第一多核苷酸包括连接的核苷酸N1、N2和X1；
(ii)(X2-N3-N4)包括第二多核苷酸，所述第二多核苷酸包括连接的核苷酸X2、N3和N4；
(iii)N1、N2、N3和N4各自包括单个核苷酸，所述单个核苷酸包括选自由以下组成的组的核苷：腺苷、鸟苷、胞苷、5-甲基尿苷、尿苷和肌苷；
(iv)N1与N4碱基配对；
(v)N2与N3碱基配对；
(vi)N1包括5'二磷酸酯或三磷酸酯部分或其衍生物或类似物；
(vii)X1和X2各自为包括选自由以下组成的组的核苷的寡核苷酸：腺苷、鸟苷、胞苷、5-甲基尿苷、尿苷和肌苷；
(viii)X1与X2互补；
(ix)X1和X2各自的长度为12个核苷酸到16个核苷酸，并且长度相同；并且
(x)L为共价连接所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸的非核苷酸接头，
其中如果存在的话，肌苷与胞苷碱基配对。
90.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1包括肌苷，并且N4包括胞苷。
91.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1包括胞苷，并且N4包括肌苷。
92.根据权利要求89所述的激动剂，其中N2包括肌苷，并且N3包括胞苷。
93.根据权利要求89所述的激动剂，其中N2包括胞苷，并且N3包括肌苷。
94.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1包括鸟苷。
95.根据权利要求89所述的激动剂，其中N2包括鸟苷。
96.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1包括胞苷。
97.根据权利要求89所述的激动剂，其中N2包括胞苷。
98.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，并且N3和N4包括胞苷。
99.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括鸟苷。
100.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷。
101.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括肌苷。
102.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1包括肌苷，并且N4包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
103.根据权利要求89所述的激动剂，其中N2包括肌苷，并且N3包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
104.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，N3和N4包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
105.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2各自包括至少一个肌苷。
106.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括鸟苷，并且其中X1和X2各自包括至少一个肌苷。
107.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括鸟苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2各自包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
108.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括鸟苷，并且其中X1和X2各自包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
109.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
110.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2各自包括至少一个肌苷。
111.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括肌苷，并且其中X1和/或X2各自包括至少一个肌苷。
112.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括肌苷，并且N3和N4包括胞苷，并且其中X1和X2包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
113.根据权利要求89所述的激动剂，其中N1和N2包括胞苷，并且N3和N4包括肌苷，并且其中X1和X2包括肌苷并且不包括鸟苷核苷。
114.根据权利要求89所述的激动剂，其中X1和X2各自为12个核苷酸并且包括1个、2个、3个或4个肌苷核苷。
115.根据权利要求89所述的激动剂，其中X1和X2各自为13个核苷酸并且包括1个、2个、3个、4个或5个肌苷核苷。
116.根据权利要求89所述的激动剂，其中X1和X2各自为14个核苷酸并且包括1个、2个、3个、4个、5个或6个肌苷核苷。
117.根据权利要求89所述的激动剂，其中X1和X2各自为15个核苷酸并且包括1个、2个、3个、4个、5个、6个或7个肌苷核苷。
118.根据权利要求89所述的激动剂，其中X1和X2各自为16个核苷酸并且各自包括1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个肌苷核苷。
119.根据权利要求89所述的激动剂，其中X1和X2各自为12个核苷酸并且包括至少10％、20％、30％或40％肌苷核苷...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·M·克里格，A·J·莫里斯，
申请(专利权)人：查美特制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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