幽门螺旋杆菌检测用核酸适配体与筛选检测方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列如HPA‑2中所示。本发明专利技术还公开了该幽门螺旋杆菌特异性检测的筛选方法及检测方法与用途。检测方法以核酸适配体修饰的淬灭基团作为识别探针，以核酸适配体互补链修饰的荧光作为荧光探针，幽门螺旋杆菌的检测是通过核酸适配体探针的荧光变化来实现的。本发明专利技术核酸适配体含有80个碱基和特殊的二级结构，其对幽门螺旋杆菌菌体表面蛋白的亲和力达到19.3±3.2nM。该核酸适配体针对幽门螺旋杆菌具有高特异性的特点，可用于对幽门螺旋杆菌的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
幽门螺旋杆菌检测用核酸适配体与筛选检测方法及用途
本专利技术属病原微生物检测
，具体涉及一种可用于特异性检测幽门螺旋杆菌的核酸适配体，本专利技术还涉及用核酸适配体检测幽门螺旋杆菌的方法与用途。
技术介绍
大量研究表明，超过90%的十二指肠溃疡和80%的胃溃疡是由幽门螺旋杆菌感染引起的，可引起胃粘膜轻度慢性炎症，甚至胃、十二指肠溃疡、胃癌。自1983年胃镜活检标本成功分离培养以来，细菌学、基因组学、同位素示踪、病理学、血清学、分子生物学等多种诊断幽门螺杆菌感染的方法不断发展。但一般从标本采集的角度来看，可分为两类：侵入性和非侵入性。侵入性方法主要是指通过胃镜进行活检标本检查的方法，是目前消化疾病学科的一种常规方法，包括细菌的分离培养、直接涂片、快速脲酶试验、药敏试验等；非侵入性方法主要是指不用胃镜取活检标本诊断幽门螺旋杆菌感染的方法，包括抗体检测、抗原检测、尿素13C/14C呼气试验等。虽然这些方法对幽门螺杆菌的检测是有效的，但大多数都需要复杂的仪器和专业的操作人员，极大地限制了早期检测和预防健康造成的致命后果和经济损失。因此，开发一种简单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列如HPA-2中所示：/nHPA-2：5’-AAGGAGCAGCGTGGAGGTTACCAGGAGGACCCTATTCTCG/nTGTATCGACGAGATCCAGTGACCACGACGACACACCCTAA-3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列如HPA-2中所示：
HPA-2：5’-AAGGAGCAGCGTGGAGGTTACCAGGAGGACCCTATTCTCG
TGTATCGACGAGATCCAGTGACCACGACGACACACCCTAA-3’。


2.根据权利要求1所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，其特征在于，对核酸适配体进行突变或改造，使其能用于幽门螺旋杆菌的检测。


3.根据权利要求2所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，其特征在于，所述的突变或改造方法选自：改造、磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、同位素化修饰；或者添加生物素、地高辛、荧光物质、淬灭基团、纳米材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、叶酸或酶标记以用于幽门螺旋杆菌的检测。


4.根据权利要求1或2所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，其特征在于：荧光标记的核酸适配体互补链长度在10%-25%之间。


5.根据权利要求4所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，其特征在于：荧光标记的核酸适配体互补链如下：

。


6.一种用权利要求1－5中任何一项所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体进行幽门螺旋杆菌检测的方法，其特征在于：将待测样品与标记的核酸适配体混合后检测相应的数值，与空白比较并作出判断。


7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：将标记了淬灭基团的核酸适配体与荧光标记的互补链固定在聚苯乙烯板，用于检测，待测样品加在含有核酸适配体板上后，混合，在波长为450-500nm的蓝光下检测，与空白比较并作出判断。


8.一种如权利要求1所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体的筛选方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)合成一个长度为80nt的初始文库和PCR所需引物；
(2)用10%变性聚丙烯酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕明生，武航婕，王淑军，秦铭灿，马小艺，范诗慧，田雪晴，卢静，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32