Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂及其应用，具体而言，涉及Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂在制备抑制癌症侵袭转移的试剂中的用途、抑制细胞内Ku70蛋白T455位点磷酸化的方法以及一种侵袭转移能力被抑制的癌细胞，为癌症侵袭转移尤其是肺癌的侵袭转移提供新的治疗途径和研究模型。

【技术实现步骤摘要】
Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂及其应用
本专利技术涉及癌症侵袭转移领域，具体而言，涉及Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂及其应用。
技术介绍
癌症是目前导致人类死亡的头号杀手，其发病率和死亡率呈逐年上升趋势，成为严重威胁人类健康和生命的疾病。侵袭转移是导致癌症患者高死亡率的主要原因，其中癌基因活化和抑癌基因失活是导致癌症侵袭转移的重要原因。尽管目前临床上靶向癌症的治疗方法不断创新，手术治疗联合放、化疗仍是当前临床上肺癌患者首选治疗手段，但较高的术后复发和转移率是导致临床癌症患者治疗失败和高死亡率的主要原因，并未有效延长癌症患者的存活时间和总体生存率。因此，获得抑制癌症侵袭转移的靶点对癌症的治疗和药物的开发具有重要意义。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂在制备抑制癌症侵袭转移的试剂中的用途。本专利技术的第二目的在于提供一种抑制细胞内Ku70蛋白T455位点磷酸化的方法。本专利技术的第三目的在于提供一种侵袭转移能力被抑制的癌细胞。为实现上述专利技术目的，本专利技术特提供以下技术方案：Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂在制备抑制癌症侵袭转移试剂中的用途。在一些具体的实施方式中，所述磷酸化抑制剂为增加ING5基因表达的试剂。优选地，所述增加ING5基因表达的试剂包括：超表达ING5基因的载体以及将所述载体转染至细胞内的转染试剂。更优选地，所述载体包括真核细胞表达载体、慢病毒载体或腺病毒载体，例如，pcDNA3.1、慢病毒载体或腺病毒载体。在一些具体的实施方式中，所述癌症为肺癌，优选为非小细胞肺癌，例如肺鳞癌或肺腺癌。本专利技术还提供一种抑制细胞内Ku70蛋白T455位点磷酸化的方法，所述方法包括增加细胞内ING5基因的表达。在一些具体的实施方式中，所述增加细胞内ING5基因的表达包括将超表达ING5基因的载体转染至所述细胞内，优选地，所述载体包括真核表达载体或病毒载体，例如pcDNA3.1、慢病毒载体或腺病毒载体。在一些具体的实施方式中，所述细胞为癌症细胞，例如肺癌细胞，优选为非小细胞肺癌细胞，例如肺鳞癌细胞或肺腺癌细胞。在一些具体的实施方式中，所述细胞为具有侵袭转移可能性的癌症细胞；优选地，所述细胞为具有侵袭转移可能性的肺癌细胞，例如，具有侵袭转移可能性的非小细胞肺癌细胞，例如具有侵袭转移可能性的肺鳞癌细胞或肺腺癌细胞。在一些具体的实施方式中，所述细胞为非小细胞肺腺癌A549细胞和H1299细胞。在一些具体的实施方式中，所述方法为非治疗目的或非诊断目的方法。本专利技术还提供一种侵袭转移能力被抑制的癌细胞，与同种细胞相比，所述侵袭转移能力被抑制的细胞超表达ING5基因。在一些具体的实施方式中，所述癌细胞为非小细胞肺癌细胞，例如非小细胞肺腺癌A549细胞和H1299细胞。术语定义除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语的含义与本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。如本文所用，术语“转移”是指癌性肿瘤在器官或身体部位中的生长，该器官或身体部位不直接连接到原始癌性肿瘤的器官。转移将被理解为包括微转移，即在未与原始癌性肿瘤的器官直接连接的器官或身体部位中存在不可检测量的癌细胞。转移也可以定义为一个过程的几个步骤，诸如癌细胞从原始肿瘤部位离开，以及癌细胞向身体其他部位迁移和/或侵袭。如本文所用，术语“侵袭”是指当肿瘤生长局部扩散到通过抑制、破坏或阻止正常器官功能而损害了所涉及组织的功能时，就会出现“肿瘤侵袭”。如本文所用，术语“超表达”或“过表达”是指作为研究对象的生物样品中的靶核苷酸序列或蛋白质的表达水平比正常样品中的高的情况。例如，在通过本领域通常所利用的表达分析方法，例如逆转录RT-PCR或ELISA方法(参照：Sambrook，J.etal.，MolecularCloning.ALaboratoryManual，3rded.ColdSpringHarborPress(2001))进行表达分析的情况下，分析结果为表达上调的情况。如本文所用，术语“Ku70”：是经典的DNA损伤修复和凋亡调控分子，当细胞受到电离辐射或药物应激发生DNA双链断裂损伤时，Ku70既可与Ku80和DNAPKcs亚基组成DNA修复复合体，参与DNA双链断链(DSBs)损伤时NHEJ修复过程，还可与促凋亡蛋白BAX形成Ku70-BAX异二聚体，抑制其从细胞质转位到线粒体而发挥抗凋亡作用。如本文所用，术语“ING5”：生长抑制因子(InhibitorofGrowth，ING)候选抑癌基因家族新成员，研究表明，ING5可与P53、组蛋白乙酰基转移酶MORF和HBO1，以及细胞周期调控蛋白INCA1等多种蛋白质相互作用，参与调控细胞周期、凋亡、组蛋白修饰、基因表达等过程。有益效果与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：首先，本专利技术获得癌症侵袭转移新靶点，Ku70T455位点的磷酸化，并基于该靶点公开一种新型制药用途，其为癌症侵袭转移尤其是肺癌的侵袭转移提供新的治疗途径。其次，本专利技术首次发现ING5与Ku70T455位点磷酸化之间的调控关系，并基于此建立一种抑制Ku70T455位点磷酸化的方法，该方法切实有效，与广谱性磷酸化酶抑制剂相比，具有更好地特异性。另外，本专利技术还公开一种侵袭转移能力被抑制的癌细胞，为癌症转移研究提供新的研究模型。附图说明图1为非小细胞肺腺癌A549细胞和H1299细胞中ING5过表达和敲减对Ku70T455磷酸化水平的影响(WesternBlot)；图2为图1WesternBlot的定量分析结果；图3为非小细胞肺腺癌A549-ING5-OE细胞的不同修饰细胞系构建及验证结果(WesternBlot)，其中Control为A549细胞；图4为图3WesternBlot的定量分析结果；图5为CCK8检测Ku70T455突变对ING5抑制非小细胞肺腺癌细胞增殖能力的影响；图6为克隆形成实验检测Ku70T455突变对A549-ING5-OE细胞克隆形成能力的影响；图7为图6的定量分析结果；图8为Woundhealing实验检测Ku70T455突变对ING5抑制非小细胞肺腺癌细胞划痕愈合能力的影响；图9为Transwell-迁移实验检测Ku70T455突变对A549-ING5-OE细胞迁移能力的影响；图10为图9的定量分析结果；图11为Transwell-侵袭移实验检测Ku70T455突变对A549-ING5-OE细胞侵袭能力的影响；图12为图11的定量分析结果；图13为Westernblot检测Ku70T455突变对A549-ING5-OE细胞EMT的影响；图14为图13的定量分析结果；图15为裸鼠成瘤模型观察Ku70T455突变对A549-ING5-OE细胞体内成瘤的影本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂在制备抑制癌症侵袭转移的试剂中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.Ku70蛋白T455位点磷酸化抑制剂在制备抑制癌症侵袭转移的试剂中的用途。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述磷酸化抑制剂为增加ING5基因表达的试剂；
优选地，所述增加ING5基因表达的试剂包括：超表达ING5基因的载体以及将所述载体转染至细胞内的转染试剂；
更优选地，所述载体包括真核细胞表达载体、慢病毒载体或腺病毒载体，例如，pcDNA3.1、慢病毒载体或腺病毒载体。


3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述癌症为肺癌，优选为非小细胞肺癌，例如肺鳞癌或肺腺癌。


4.一种抑制细胞内Ku70蛋白T455位点磷酸化的方法，其特征在于，所述方法包括增加细胞内ING5基因的表达。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述增加细胞内ING5基因的表达包括将超表达ING5基因的载体转染至所述细胞内，优选地，所述载体包括真核表达载体或病毒载体，例如pcDNA3.1、慢病...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟瑾，李卓，王玥，赵冠人，陈明，车玲，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第八医学中心，
类型：发明
国别省市：北京;11