一种高效分离脂肪源前体细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种高效分离脂肪源前体细胞的方法，从人体或哺乳动物的脂肪组织块中，通过红细胞裂解液和DMEM F/12的混合溶液清洗后，采用组织消化液进行培养，沉淀，离心、过滤处理等步骤后，可从人体皮下脂肪组织中，高效分离获得高纯度和高活性的脂肪源前体细胞，分离获得的脂肪源前体细胞培养液，具备较高浓度的不同类型的细胞营养因子，所获得的脂肪源前体细胞及其产物可以用于组织修复。

【技术实现步骤摘要】
一种高效分离脂肪源前体细胞的方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种高效分离脂肪源前体细胞的方法及其用于组织修复的应用。
技术介绍
当前脂肪源前体细胞的分离的方法，主要有剪碎消化法、剪碎贴壁培养法和抽吸法等方法。前述两种方法都是取出脂肪组织后，破碎组织块，进行细胞分离。抽吸法包括负压吸引器抽吸、注射器抽吸；有相关研究表明，采集脂肪时剪碎法对脂肪细胞的损伤最轻，注射器法居中，负压器吸脂法最重，负压越大，脂肪细胞的损伤就越大。剪碎贴壁法，则通过细胞从组织块中迁移出来分离，不能立即分离得到单个细胞，且受供者年龄，健康状况等因素的影响，分离周期长。剪碎消化法，通过消化酶的作用，可以快速得到单个细胞；但是传统的消化法，会影响到脂肪源前体细胞的活性和完整性，造成较低的细胞存活率，细胞得率小，无法满足后续的临床运用。以上现有的技术方案均存在一点的弊端，无法快速分离得到优质且大量的脂肪源前体细胞，细胞不具备更高的增殖能力和细胞活性，无法满足下游的临床和研究需要，亟待专利技术一种实现高效分离且能获得较高纯度和活性的脂肪源前体细胞分离技术方案来解决上述技术问题。
技术实现思路
针对上述提到的问题，本专利技术提供一种高效分离脂肪源前体细胞的方法及其用于组织修复的应用。具体技术方案是：一种高效分离脂肪源前体细胞的方法，包括如下步骤：1）从人体皮下获取9mm3~21mm3的脂肪组织块；2）脂肪组织块用75%酒精冲洗1~2次，擦拭干净；3）将脂肪组织块放入小烧杯中，用眼科剪反复剪切组织至似糊状；4）少量基础培养液，送入CO2培养箱内静置1~2天；5)加入足够的基础培养液，培养4~6天，转移到干净的离心管中，取400g，离心10分钟；弃上清，收集下层组织沉淀；6）用PBS溶液轻缓漂洗组织沉淀物2～4次；7）加入3-5ml的0.25％胰蛋白酶溶液于35～38℃条件下消化3～6min，加入基础培养液终止消化，离心10分钟；8）弃上清，使用10倍沉淀体积的DMEMF/12培养液重悬沉淀组织，使用40微米的滤膜过滤；9）重悬混匀上述过滤液，使用10~20微米的滤膜再一次进行过滤；10）离心上述步骤9）的组织过滤液，5~7分钟，收集离心后的沉淀物，使用细胞培养液吹散重悬细胞。一种利用上述高效分离脂肪源前体细胞方法所获得的脂肪源前体细胞，该脂肪源前体细胞可用于组织修复，如皮肤组织等。本专利技术的有益效果：可从人体皮下中，高效分离获得高纯度和高活性的脂肪源前体细胞，分离获得的脂肪源前体细胞培养液，具备较高浓度的不同类型的细胞营养因子，所获得的脂肪源前体细胞及其产物可以用于组织修复。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。准备材料：眼科剪若干，眼科镊若干，PBS，75%酒精，基础培养基，培养皿若干，15mL/50mL离心管若干，移液枪头若干，手术刀片若干。实施例1：1）从人体皮下获取9mm3的脂肪组织块；2）脂肪组织块用75%酒精冲洗1次，擦拭干净；3）将脂肪组织块放入小烧杯中，用眼科剪反复剪切组织至似糊状；4）少量基础培养液，送入CO2培养箱内静置1天；5)加入足够的基础培养液，培养4天，转移到干净的离心管中，取400g，离心10分钟；弃上清，收集下层组织沉淀；8）用PBS溶液轻缓漂洗组织沉淀物2次；9）加入3-5ml的0.25％胰蛋白酶溶液于35℃条件下消化3min，加入基础培养液终止消化，离心10分钟；8）弃上清，使用10倍沉淀体积的DMEMF/12培养液重悬沉淀组织，使用40微米的滤膜过滤；9）重悬混匀上述过滤液，使用10微米的滤膜再一次进行过滤；10）离心上述步骤9）的组织过滤液，5分钟，收集离心后的沉淀物，使用细胞培养液吹散重悬细胞。实施例2：1）从人体皮下获取21mm3的脂肪组织块；2）脂肪组织块用75%酒精冲洗2次，擦拭干净；3）将脂肪组织块放入小烧杯中，用眼科剪反复剪切组织至似糊状；4）少量基础培养液，送入CO2培养箱内静置2天；5)加入足够的基础培养液，培养6天，转移到干净的离心管中，取400g，离心10分钟；弃上清，收集下层组织沉淀；10）用PBS溶液轻缓漂洗组织沉淀物4次；11）加入3-5ml的0.25％胰蛋白酶溶液于38℃条件下消化6min，加入基础培养液终止消化，离心10分钟；8）弃上清，使用10倍沉淀体积的DMEMF/12培养液重悬沉淀组织，使用40微米的滤膜过滤；9）重悬混匀上述过滤液，使用20微米的滤膜再一次进行过滤；10）离心上述步骤9）的组织过滤液，7分钟，收集离心后的沉淀物，使用细胞培养液吹散重悬细胞。以上通过具体的和优选的实施例详细的描述了本专利技术，但本领域技术人员应该明白，本专利技术并不局限于以上所述实施例，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效分离脂肪源前体细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1）从人体皮下获取 9mm

【技术特征摘要】
1.一种高效分离脂肪源前体细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）从人体皮下获取9mm3~21mm3的脂肪组织块；
2）脂肪组织块用75%酒精冲洗1~2次，擦拭干净；
3）将脂肪组织块放入小烧杯中，用眼科剪反复剪切组织至似糊状；
4）少量基础培养液，送入CO2培养箱内静置1~2天；
5)加入足够的基础培养液，培养4~6天，转移到干净的离心管中，取400g，离心10分钟；
弃上清，收集下层组织沉淀；
6）用PBS溶液轻缓漂洗组织沉淀物2～4次；
7）加入3-5ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨嘉，
申请(专利权)人：昆明学院，
类型：发明
国别省市：云南;53