一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法，属于医药技术领域。该方法具体是先将鸡Ⅱ型胶原充分乳化，然后以年龄5~7周的SPF级DBA1/J雄性小鼠为模型动物，第1天在小鼠尾根部多点注射，第21天腹腔注射，第28天腹腔注射脂多糖溶液。此方法可操作性强，造模成功率高，可实现稳定高效制备小鼠类风湿性关节炎动物模型的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法。
技术介绍
类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以多关节慢性炎症和关节破坏损伤为主要表现的全身性常见自身免疫性疾病。RA动物模型可以模拟疾病的发病过程，有助于了解RA的发病机制，为预防和治疗提供重要依据。目前，RA的动物模型有多种，但各类模型均有缺陷。如：（1）佐剂性关节炎模型，此类模型造模多采用大鼠，在组织病理学特征上与RA有较大差别；（2）卵蛋白和蛋白多糖等诱导的关节炎模型，发病过程主要是关节内抗原的持续刺激，形成抗原-抗体复合物，其发病机制与RA也不尽相同；（3）基因修饰关节炎模型存在周期长、代价高等缺点；（4）胶原诱导的关节炎模型与人类RA发病相似度较高，但该模型制备方法差异较大，注射部位剂量不统一。造成发病时间、临床表现不一。鉴于现有技术中制备RA动物模型的方法中存在的各种缺点，亟需构建一种既能接近人类的RA发病过程，又能提高动物模型成功率，并能稳定表达人类RA病理特征的动物模型。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法，该方法可操作性强，造模成功率高。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法，包括以下步骤：步骤1，以冰醋酸溶液作为溶剂，配置鸡Ⅱ型胶原溶液；步骤2，将鸡Ⅱ型胶原溶液与等体积的完全弗式佐剂混合，制成胶原乳剂；<br>步骤3，取SPF级小鼠，在其尾根部注射胶原乳剂，然后于第21天在腹腔注射胶原乳剂、第28天腹腔注射脂多糖溶液，即可得到类风湿性关节炎小鼠模型。进一步地，步骤1中是以0.1mol/L冰醋酸溶液为溶剂，配置浓度为2mg/mL的鸡Ⅱ型胶原溶液。具体过程为：配置0.1mol/L的冰醋酸溶液，称取100µg鸡Ⅱ型胶原，将之溶于50µL冰醋酸溶液中，胶原终浓度为2mg/mL，在2～8℃下轻轻搅拌，4℃放置过夜，使之充分溶解。进一步地，步骤2的具体过程为：用1mL的无菌注射器吸取上述鸡Ⅱ型胶原溶液，另一支1mL无菌注射器吸取等体积完全弗式佐剂，将两支注射器用医用无菌输液管链接，来回推拉至混合液呈乳白色，进一步混合使充分乳化，形成胶原乳剂。进一步地，所述过程在冰上进行。进一步地，步骤3中小鼠的品系为DBA1/J，年龄在5~7周，采用雄性小鼠造模。进一步地，步骤3中，先在小鼠尾根部注射100µL胶原乳剂，然后于第21天在小鼠腹腔注射100µL胶原乳剂、第28天腹腔注射20µL1mg/mL的脂多糖溶液。有益效果：本专利技术在原有胶原模型基础上进行改良，通过充分溶解乳化小鼠易感的鸡Ⅱ型胶原，选择小鼠品系为DBA1/J5~7周的SPF级雄性小鼠，采用尾根部多点、腹腔多次免疫法来制备模型，使关节病理变化更接近于类风湿性关节炎，提高模型成功率，确保模型的可重复性和科学性。本专利技术制备小鼠类风湿性关节炎模型的改良方法，具有操作简单，较高程度的模拟人类的类风湿关节炎的病理变化，并且模型成功率、可重复性高。附图说明图1为本专利技术模型的小鼠足爪外观表现。图2为本专利技术模型的小鼠足爪临床评分。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，未详细描述的技术均按照本领域人员熟知的标准方法进行。本申请中提及的相关试剂等均有商品供应或以别的途径能为公众所得，它们仅作为举例，对本专利技术不是唯一的。可分别用其它适合的工具或生物材料来替代。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1制备小鼠类风湿性关节炎模型的改良方法1、实验动物SPF级DBA/1J小鼠（南通大学动物实验中心），雄性，年龄5~7周。2、模型制备前准备(1)配置0.1mol/L的冰醋酸溶液，同时称取100µg鸡Ⅱ型胶原，将之溶于50µL已配置的冰醋酸溶液中，胶原终浓度为2mg/mL。在2～8℃下轻轻搅拌，4℃放置过夜，使之充分溶解；（2）用1mL的无菌注射器吸取上述鸡Ⅱ型胶原溶液，另一支1mL无菌注射器吸取等体积完全弗式佐剂。将两支注射器用医用无菌输液管链接，来回推拉至混合液呈乳白色，进一步混合使充分乳化，形成100µL胶原乳剂。所用操作保持无菌并在冰上进行。结果判定：用移液器吸取少量胶原乳剂，滴一滴至清水中。乳剂迅速散开，则表明混合不充分，未完全乳化。如果乳剂保持水滴状，说明已经充分乳化。3、模型制备过程（1）小鼠尾根部注射100µL充分乳化的胶原乳剂。75%乙醇对小鼠尾部皮肤进行消毒，在小鼠尾根部由远及近进行多点皮内注射100µL充分乳化的胶原乳剂，并按压以防漏出。（2）在第一次免疫后第21天，用以上同样方法制备100µL胶原乳剂。75%乙醇对小鼠腹部皮肤进行消毒，100µL胶原乳剂进行腹腔注射。（3）第28天，制备20µL1mg/mL的脂多糖溶液。75%乙醇对小鼠腹部皮肤进行消毒，进行腹腔注射。初次免疫第21天开始，每两天对小鼠足爪进行评分。评分标准为：0分：无变化；1分：皮肤变红，轻度肿胀；2分：踝关节以下皮肤变红，关节肿胀明显；3分：关节僵硬，肢体活动受限。同时评分四只足爪，以总分计算。图1为采用本专利技术的方法制得的类风湿性关节炎模型的小鼠足爪外观表现；图2为类风湿性关节炎模型的小鼠足爪临床评分。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1，以冰醋酸溶液作为溶剂，配置鸡Ⅱ型胶原溶液；/n步骤2，将鸡Ⅱ型胶原溶液与等体积的完全弗式佐剂混合乳化，制得胶原乳剂；/n步骤3，取SPF级小鼠，在其尾根部注射胶原乳剂，然后于第21天在腹腔注射胶原乳剂、第28天腹腔注射脂多糖溶液，即可得到类风湿性关节炎小鼠模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备小鼠类风湿性关节炎模型的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，以冰醋酸溶液作为溶剂，配置鸡Ⅱ型胶原溶液；
步骤2，将鸡Ⅱ型胶原溶液与等体积的完全弗式佐剂混合乳化，制得胶原乳剂；
步骤3，取SPF级小鼠，在其尾根部注射胶原乳剂，然后于第21天在腹腔注射胶原乳剂、第28天腹腔注射脂多糖溶液，即可得到类风湿性关节炎小鼠模型。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1中是以0.1mol/L冰醋酸溶液为溶剂，配置浓度为2mg/mL的鸡Ⅱ型胶原溶液。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1的具体过程为：配置0.1mol/L的冰醋酸溶液，称取100µg鸡Ⅱ型胶原，将之溶于50µL冰醋酸溶液中，胶原终浓度为2mg/mL，在2～8℃下轻轻搅拌，4℃放置过夜，使之充分溶解。

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：包璟崟，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32