基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT-proBNP检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT‑proBNP检测试剂盒及其应用，属于免疫化学检测技术领域。本发明专利技术对酶‑抗体以及磁珠‑抗体的连接方法进行了优化，大大降低了酶和磁珠对抗原‑抗体之间结合的影响，极大提高了检测灵敏度；同时采用比活力更高的碱性磷酸酶CmAP代替现有商品化的碱性磷酸酶BIAP，使检测的灵敏度得到进一步的提高。为心力衰竭的早期诊断和治疗提供更及时、可靠的信息。

【技术实现步骤摘要】
基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT-proBNP检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及免疫化学检测
，具体涉及一种基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT-proBNP检测试剂盒及其应用。
技术介绍
心力衰竭是当前一种复杂的症候群，是冠心病病情发生和发展的最终结果，临床表现是呼吸困难，水肿和无力而致体力活动受限等，预后较差，其死亡率较高。据国内相关调查，心力衰竭住院率虽然相对不高，只为同期心血管疾病的20％，但是死亡率却为40％，并且患者的预后较差。因此，早期诊断及时治疗对改善心力衰竭患者的预后具有重要意义。B型钠尿肽(BNP)在心室容积扩张和压力负荷增加时升高，能敏感而特异地反映左心功能的变化。在血浆中N氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)分子与BNP分子以1：1的比例存在于血循环中，其比BNP更稳定，可以此反映心室功能的变化。目前世界上针对NT-proBNP的主流检测方法为化学发光免疫分析法(CLIA)。将碱性磷酸酶(ALP)或吖啶酯结合的单克隆抗NT-proBNP检测抗体，连同含缓冲液的表面活性剂和样本，加入到反应容器中。在短本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，包括：碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体和磁珠包被的NT-proBNP包被抗体；/n所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体由如下方法制备而成：/n将NT-proBNP检测抗体与高碘酸钠反应，使抗体Fc端上的糖链氧化生成醛基，得到第一产物；/n将第一产物用过量的半胱氨酸盐酸盐与氰基硼氢化钠处理，使醛基与半胱氨酸盐酸盐发生醛胺缩合反应，抗体Fc端生成有活性的巯基；/n将碱性磷酸酶用SMCC处理，暴露出有活性的马来酰胺基团；然后与Fc端生成有活性巯基的NT-proBNP检测抗体混合，使巯基与马来酰胺反应生成稳定的硫醚键；再用NEM溶液...

【技术特征摘要】
1.一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，包括：碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体和磁珠包被的NT-proBNP包被抗体；
所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体由如下方法制备而成：
将NT-proBNP检测抗体与高碘酸钠反应，使抗体Fc端上的糖链氧化生成醛基，得到第一产物；
将第一产物用过量的半胱氨酸盐酸盐与氰基硼氢化钠处理，使醛基与半胱氨酸盐酸盐发生醛胺缩合反应，抗体Fc端生成有活性的巯基；
将碱性磷酸酶用SMCC处理，暴露出有活性的马来酰胺基团；然后与Fc端生成有活性巯基的NT-proBNP检测抗体混合，使巯基与马来酰胺反应生成稳定的硫醚键；再用NEM溶液封闭反应，除盐，制备得到碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体；
所述磁珠包被的NT-proBNP包被抗体由如下方法制备而成：
将NT-proBNP包被抗体与高碘酸钠反应，使抗体Fc端上的糖链氧化生成醛基，得到第二产物；
将第二产物与生物素-LC-酰肼试剂反应，酰肼基团与醛基反应生成稳定的腙键，使抗体的Fc端修饰上生物素；
将链霉亲和素修饰的磁珠与Fc端修饰有生物素的NT-proBNP包被抗体混合，生物素与链霉亲和素反应生成稳定的共价键，即制备得到磁珠包被的NT-proBNP包被抗体。


2.根据权利要求1所述的NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，NT-proBNP检测抗体与高碘酸钠反应具体为：将NT-proBNP检测抗体溶于buffer1中，加入初始浓度为200mM的高碘酸钠溶液，4-6℃反应1h；
所述NT-proBNP检测抗体与高碘酸钠溶液加入量的比为5mg：(100-120)μL；
所述buffer1为pH8.0的0.1MTEA缓冲液，含0.16MNaCl。


3.根据权利要求1所述的NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述醛胺缩合反应具体为：向第一产物中加入初始浓度为0.75M的半胱氨酸盐酸盐和0.3M的氰基硼氢化钠，室温反应过夜。


4.根据权利要求1所述的NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，碱性磷酸酶用S...

【专利技术属性】
技术研发人员：高玉舟，李海超，何欣，乔善鹏，刘珍妮，
申请(专利权)人：济南国科医工科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37