一种高灵敏快速筛查内分泌干扰物的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种高灵敏快速筛查内分泌干扰物的试剂盒及方法，包含NR‑LBD蛋白溶液、磁性微球‑NCoA‑BAP‑BamH I交联聚合蛋白溶液、特异性双标记荧光探针和反应液。本发明专利技术首先将NR‑LBD蛋白溶液、活化的磁性微球‑NCoA‑BAP‑BamH I交联聚合蛋白溶液和适量体积的待测物质共同孵育，然后磁性分离清洗所述检测体系，再加入特异性双标记荧光探针，利用荧光定量PCR仪扩增检测荧光强度，最后通过软件计算得出待测物质的EC50或IC50。本发明专利技术所提供的试剂盒及检测方法操作简单、检测时长短、灵敏度高、重复性好，测试通量大，可广泛应用于大批量化学品内分泌干扰活性的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏快速筛查内分泌干扰物的试剂盒及方法
本专利技术涉及环境化合物的检测
，特别是涉及一种高灵敏快速筛查内分泌干扰物的试剂盒及方法。
技术介绍
当前日益严重的环境污染问题已成为我国经济和社会可持续发展所必须面对的巨大挑战之一。工业化和城市化产生的各类有毒有害物质已严重威胁到人类健康和生态环境安全。化学物质的内分泌干扰效应是其综合毒性的重要组成部分。内分泌干扰物(EndocrineDisruptingChemicals，EDCs)也称为环境激素，是指能通过干扰人类或动物内分泌系统诸环节并导致异常效应的环境物质。它们虽并不直接作为有毒有害物质给生物体带来异常影响，但即使数量极少，也能让机体内分泌失衡，出现种种异常效应。近年来研究发现，EDCs与人类的健康密切相关。这些物质会导致动物体和人体生殖器障碍、生殖能力下降、甲状腺机能障碍、肠癌、宫颈癌、卵巢癌等发病率上升、行为障碍、幼体畸形甚至死亡。流行病学研究进一步表明，EDCs对胚胎时期的影响可能与成年后的很多疾病有关。因此，针对目前人们关注的与人类健康关系密切的核受体类型，建立化合物内分泌干本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高灵敏快速筛查内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于，包括重组核受体配体结合域NR-LBD蛋白溶液、磁性微球-NCoA-BAP-BamH I交联聚合蛋白溶液、特异性双标记荧光探针和反应液。/n

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏快速筛查内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于，包括重组核受体配体结合域NR-LBD蛋白溶液、磁性微球-NCoA-BAP-BamHI交联聚合蛋白溶液、特异性双标记荧光探针和反应液。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述重组核受体配体结合域NR-LBD蛋白是通过以人或小鼠细胞或组织的cDNA为模板，对与人或小鼠健康关系密切的核受体NR配体结合域的编码序列进行扩增，经原核细胞表达与纯化所得。


3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述与人或小鼠健康关系密切的核受体NR包括雌激素受体ER、孕激素受体PR、雄激素受体AR、甲状腺激素受体TR、糖皮质激素受体GR、盐皮质激素受体MR、过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR、组成型雄甾烷受体CAR、孕烷X受体PXR、维生素D受体VDR、维甲酸受体RAR、维甲酸相关孤核受体ROR、肝脏X受体LXR、法尼醇X受体FXR和雌激素相关受体ERR。


4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁性微球-NCoA-BAP-BamHI交联聚合蛋白通过以下步骤制备得到：
以人或小鼠的细胞或组织的cDNA为模板，参考NCBI公布的人或小鼠核受体共激活因子NCoA的编码序列，对核受体共激活因子NCoA的编码序列进行扩增；
以大肠杆菌基因组为模板，参考NCBI公布的大肠杆菌碱性磷酸酶BAP的编码序列，通过引物扩增得到BAP的编码序列；
以解淀粉芽孢杆菌H基因组为模板，参考NCBI公布的解淀粉芽孢杆菌H限制性内切酶BamHI的编码序列，通过引物扩增得到BamHI的编码序列；
将NCoA和BAP经原核系统共表达与纯化获得NCoA-BAP融合蛋白，将BamHI经原核系统表达与纯化获得BamHI蛋白；
通过蛋白交联将NCoA-BAP与BamHI聚合成NCoA-BAP-BamHI交联聚合蛋白，再与预处理的磁性微球联合孵育，获得磁性微球-NCoA-BAP-BamHI交联聚合蛋白。


5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述人或小鼠核受体共激活因子NCoA包括甾醇受体共激活因子、激活的信号共整合因子2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1。


6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性双标记荧光探针的核苷酸序列为5'R-acagtGGATCCtacgCCCCAAaaCgtaGGATCCactga-Q3'，其中，5'端...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾晓静，张照斌，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11