一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法技术

本发明专利技术公开了一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法，通过将磁性载体的环氧基与基因改造的含半胱氨酸(cys)的SpyCatcher的侧链巯基定向共价连接，制备得到具有一步纯化共价捕获SpyTag标签蛋白的功能性复合载体。本发明专利技术制备的蛋白质修饰磁性载体具有良好的分散性、磁响应性及稳定性，其表面修饰的SpyCatcher具有在温和条件下特异性共价结合SpyTag标签蛋白的能力，可直接从粗蛋白中一步纯化共价捕获SpyTag标签蛋白，在蛋白固定化方面具有极大应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法
本专利技术涉及一种磁性微球固定蛋白质
，特别是涉及一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法。
技术介绍
目前，在构建异源表达的蛋白质时，往往引入纯化标签与目标蛋白进行融合表达，便于对目标蛋白进行纯化或固定化。融合蛋白常用的纯化标签包括His-tag,glutathioneS-transferase,FLAGtag,maltose-bindingprotein,Strep-tag等亲和标签。这些亲和标签的应用使得重组蛋白的纯化变得简单精确，并且对蛋白质的结构和功能影响较小，适用于多种不同的重组蛋白。虽然亲和作用在蛋白质纯化和固定化中应用广泛，但在一些领域的应用中，为了提高蛋白质的稳定性和重复使用性，往往需要对蛋白质进行共价固定化。目前，对蛋白质进行共价固定化的方法中，为排除杂蛋白的干扰，需要对蛋白质先进行纯化，然后利用载体上的活性基团与蛋白质表面的氨基、羧基或巯基反应，实现共价固定化。然而，这些方法容易形成固定化蛋白质随机取向，从而可能遮蔽蛋白质的活性位点。现有研究发现，蛋白质与蛋白质的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1、重组构建蛋白末端含有半胱氨酸的SpyCatcher蛋白质；/n步骤2、制备环氧基修饰的磁性载体；/n步骤3、将步骤1蛋白末端含有半胱氨酸的SpyCatcher蛋白质与步骤2制得的环氧基修饰的磁性载体的偶联，得到表面修饰有SpyCatcher蛋白质的磁性载体；/n步骤4、用步骤3表面修饰有SpyCatcher蛋白质的磁性载体捕获含SpyTag标签的目标蛋白，得到捕获有标签蛋白的磁性载体。/n

【技术特征摘要】
1.一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、重组构建蛋白末端含有半胱氨酸的SpyCatcher蛋白质；
步骤2、制备环氧基修饰的磁性载体；
步骤3、将步骤1蛋白末端含有半胱氨酸的SpyCatcher蛋白质与步骤2制得的环氧基修饰的磁性载体的偶联，得到表面修饰有SpyCatcher蛋白质的磁性载体；
步骤4、用步骤3表面修饰有SpyCatcher蛋白质的磁性载体捕获含SpyTag标签的目标蛋白，得到捕获有标签蛋白的磁性载体。


2.如权利要求1所述的一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法，其特征在于：步骤1中，设计引物，通过基因工程方法在SpyCatcher蛋白质基因序列的末端引入半胱氨酸密码子，构建重组质粒，然后将重组质粒转化进入表达宿主菌中，再将含有重组质粒的细菌进行培养，蛋白质诱导表达，纯化，得到蛋白末端含有半胱氨酸的SpyCatcher蛋白质。


3.如权利要求1所述的一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法，其特征在于：步骤2中，将磁性载体分散于乙腈中，加入聚合物单体甲基丙烯酸缩水甘油酯、交联剂和引发剂，设置反应温度60～80℃，持续搅拌反应6～24h，反应结束后进行磁分离，洗涤，真空干燥，得到环氧基修饰的磁性载体。


4.如权利要求3所述的一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法，其特征在于：所述交联剂包括二乙烯苯、N,N-亚甲基双丙烯酰胺和二甲基丙烯酸乙二醇酯中的至少一种，所述引发剂包括偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈和偶氮二异丁酸二甲酯中的至少一种。


5.如权利要求1所述的一种共价捕获目标蛋白的磁性载体制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国，罗棉兴，赵珺，郭洪伟，
申请(专利权)人：华侨大学，厦门普睿迈格生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35