用于评估生物材料中的流感病毒类型的非缔合的病毒尺寸颗粒的流式细胞术方法技术

本申请涉及用于评估生物材料中的具有特定表位的非缔合的病毒尺寸颗粒的方法和流体样品，所述方法使用与表位特异性结合的荧光抗体染色剂，其中对具有病毒尺寸颗粒和荧光抗体染色剂的所述流体样品进行流式细胞术，以鉴定荧光发射检测事件，该事件指示有非缔合的标记的病毒尺寸颗粒通过流式细胞仪的流动池，该非缔合的标记的病毒尺寸颗粒包含所述病毒尺寸颗粒和荧光抗体染色剂。

【技术实现步骤摘要】
用于评估生物材料中的流感病毒类型的非缔合的病毒尺寸颗粒的流式细胞术方法本申请是中国专利技术申请(专利技术名称：用于评估生物材料中的流感病毒类型的非缔合的病毒尺寸颗粒的流式细胞术方法，申请日：2016年3月23日；申请号：201680029170.X；国际申请号：PCT/US2016/023737)的分案申请。交叉引用本申请要求以下美国临时专利申请的优先权且将它们每一个引入作为参考：序列号62/280,079，名称为FLOWCYTOMETRYMETHODFOREVALUATINGBIOLOGICALMATERIALFORUNASSOCIATEDPARTICLESOFVIRUSSIZE，2016年1月18日提交，且其代理机构案卷编号为50911-00035；序列号62/280,029，名称为EVALUATINGBIOLOGICALMATERIALFORUNASSOCIATEDVIRUS-SIZEPARTICLESOFBACULOVIRUSVIRALTYPE，2016年1月18日提交，且其代理机构案卷编号为50911-00036；序列号62/280,042，名本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.评估生物材料样品中的具有特定表位的非缔合的病毒尺寸颗粒的方法，该方法包括:/n对包含该生物材料样品至少一部分的流体样品进行流式细胞术，其中所述流体样品包含荧光抗体染色剂，所述荧光抗体染色剂能与所述特定表位直接或间接结合以形成包括具有所述表位的病毒尺寸颗粒和所述荧光抗体染色剂的非缔合的标记的颗粒，/n其中在流式细胞术期间进样至流式细胞仪的流体样品包含的未结合在非缔合的标记的颗粒中的荧光抗体染色剂的浓度范围为0.5微克/毫升至10微克/毫升。/n

【技术特征摘要】
20150323 US 62/137,102;20151231 US 62/273,874;20161.评估生物材料样品中的具有特定表位的非缔合的病毒尺寸颗粒的方法，该方法包括:
对包含该生物材料样品至少一部分的流体样品进行流式细胞术，其中所述流体样品包含荧光抗体染色剂，所述荧光抗体染色剂能与所述特定表位直接或间接结合以形成包括具有所述表位的病毒尺寸颗粒和所述荧光抗体染色剂的非缔合的标记的颗粒，
其中在流式细胞术期间进样至流式细胞仪的流体样品包含的未结合在非缔合的标记的颗粒中的荧光抗体染色剂的浓度范围为0.5微克/毫升至10微克/毫升。


2.评估生物材料样品中的具有特定表位的非缔合的病毒尺寸颗粒的方法，该方法包括:
对包含该生物材料样品至少一部分的流体样品进行流式细胞术，其中所述流体样品包含荧光抗体染色剂，所述荧光抗体染色剂能与所述特定表位直接或间接结合以形成包括具有所述表位的病毒尺寸颗粒和所述荧光抗体染色剂的非缔合的标记的颗粒，且
在流式细胞术之前，制备该流体样品，包括：
将待评估是否存在非缔合的颗粒的生物材料与荧光抗体染色剂混合，该荧光抗体染色剂能与所述表位直接或间接结合以形成非缔合的标记的病毒尺寸颗粒，
在混合后，在流式细胞术之前不从流体样品中去除未结合在非缔合的标记的颗粒中的荧光抗体。


3.评估生物材料样品中的具有特定表位的非缔合的病毒尺寸颗粒的方法，该方法包括:
对包含该生物材料样品至少一部分的流体样品进行流式细胞术，其中所述流体样品包含荧光抗体染色剂，所述荧光抗体染色剂能与所述特定表位直接或间接结合以形成包括具有所述表位的病毒尺寸颗粒和所述荧光抗体染色剂的非缔合的标记的颗粒；
其中所述流式细胞术不检测光散射。


4.根据权利要求3的方法，其中所述流式细胞术包括仅检测荧光发射。


5.评估生物材料样品中的具有特定表位的非缔合的病毒尺寸颗粒的方法，该方法包括:
对包含该生物材料样品至少一部分的流体样品进行流式细胞术，其中所述流体样品包含荧光抗体染色剂，所述荧光抗体染色剂能与所述特定表位直接或间接结合以形成包括具有所述表位的病毒尺寸颗粒和所述荧光抗体染色剂的非缔合的标记的颗粒；
其中所述荧光抗体染色剂包含附着至抗体分子的荧光团，每个抗体分子包含平均3至8个附着的荧光团。


6.评估生物材料样品中的具有特定表位的非缔合的病毒尺寸颗粒的方法，该方法包括:
对包含该生物材料样品至少一部分的流体样品进行流式细胞术，其中所述流体样品包含荧光抗体染色剂，所述荧光抗体染色剂能与所述特定表位直接或间接结合以形成包括具有所述表位的病毒尺寸颗粒和所述荧光抗体染色剂的非缔合的标记的颗粒；
其中所述荧光抗体染色剂为具有第一荧光发射响应的第一荧光染色剂，且所述流体样品包含具有第二荧光发射响应的第二荧光染色剂，该第二荧光发射响应不同于第一荧光染色剂的第一荧光发射响应，且所述流式细胞术包括检测在第一荧光发射响应的第一波长范围内以及在第二荧光发射响应的第二波长范围内的辐射。


7.根据权利要求6的方法，其中所述第二荧光染色剂包括对颗粒类型不具有特异性的荧光核酸染色剂。


8.根据权利要求6的方法，其中所述表位为第一表位，且所述第二荧光染色剂包含能与不同于第一表位的第二表位结合的第二荧光抗体染色剂。


9.根据权利要求6的方法，其中:
所述非缔合的颗粒为第一非缔合的颗粒，所述表位为第一表位，所述非缔合的颗粒为第一颗粒类型且所述非缔合的标记的颗粒为第一非缔合的标记的颗粒；
所述第二荧光染色剂为不同于第一荧光抗体染色剂的第二荧光抗体染色剂，且该第二荧光抗体染色剂能够结合第二非缔合的病毒尺寸颗粒以形成第二非缔合的标记的病毒尺寸颗粒，所述第二非缔合的病毒尺寸颗粒具有指示不同于第一颗粒类型的第二颗粒类型的第二表位。


10.根据权利要求6的方法，其中所述第二荧光发射具有的峰值波长与第一荧光发射的峰值波长有至少20纳米的不同。


11.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中所述流式细胞术包括:
使流体样品流过流式细胞仪的流动池；
使流过流动池的流体样品经受能引起源自荧光抗体染色剂的荧光发射响应的激发辐射；和
在所述荧光发射的波长范围内检测来自所述流动池的辐射并评估所检测到的辐射，以鉴定指示有非缔合的标记的病毒尺寸颗粒通过流动池的检测事件，该非缔合的标记的病毒尺寸颗粒包含具有所述表位的所述病毒尺寸颗粒和所述荧光抗体染色剂。


12.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中在流式细胞术期间进样至流式细胞仪的流体样品包含的荧光抗体染色剂的总浓度范围为0.5微克/毫升至10微克/毫升。


13.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中在流式细胞术期间进样至流式细胞仪的流体样品具有的非缔合的标记的颗粒的浓度为至多1x109个颗粒/毫升。


14.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中在流式细胞术期间进样至流式细胞仪的流体样品具有的非缔合的标记的颗粒的浓度范围为1x105至1x109个颗粒/毫升。


15.制备包含病毒类型的病毒尺寸颗粒的产物的方法，该方法包括:
生产处理以制备包含所述病毒类型的病毒尺寸颗粒的纯化产物；
从生产处理的阶段收集生物材料样品，预期在该阶段过程中该病毒尺寸颗粒存在于生物材料中；和
评估所述样品是否存在具有指示所述病毒类型的特定表位的病毒尺寸颗粒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：MA阿尔廷格，FK科尔迈耶，MW奥尔斯佐伊，TD盖茨，
申请(专利权)人：以埃森生物科学股份有限公司的名义经营的埃森仪器股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US