肿瘤转移相关中性粒细胞可视化检测方法技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤转移相关中性粒细胞可视化检测方法，具体包括以下步骤：1)准备新型肿瘤转移相关中性粒细胞；2)准备肿瘤细胞；3)准备可视化装置；4)准备流体；5)准备记录装置；6)寻找最佳视野；7)记录肿瘤转移相关中性粒细胞捕获循环肿瘤细胞。本发明专利技术利用实验室现有的设备即可模拟新型肿瘤转移相关中性粒细胞捕获肿瘤细胞的体内流体情况，进行可视化的检测，无需购买特殊购买高端贵重设备，能够在实验平台推广使用。

【技术实现步骤摘要】
肿瘤转移相关中性粒细胞可视化检测方法
本专利技术涉及肿瘤转移检测实验领域，具体为一种肿瘤转移相关中性粒细胞捕获循环肿瘤细胞可视化检测方法。
技术介绍
目前，发现人和小鼠中存在一群促进乳腺癌肺转移的新型肿瘤转移相关中性粒细胞，具有独特的功能表型，表现为CD45+CD11b+CD66b+CXCR4+CD62Llow(人)，及CD45+CD11b+Ly-6G+CXCR4+CD62Llow(鼠)。现有的肿瘤转移的可视化装置价格昂贵，且技术要求高，难以推广至各个实验平台。
技术实现思路
针对上述存在的技术不足，本专利技术的目的是提供一种肿瘤转移相关中性粒细胞可视化检测方法，其利用实验室现有的设备模拟新型肿瘤转移相关中性粒细胞捕获肿瘤细胞的体内流体情况，进行可视化的检测。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供肿瘤转移相关中性粒细胞可视化检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1)准备新型肿瘤转移相关中性粒细胞：利用流式分选技术获取乳腺癌小鼠、患者外周血肿瘤转移相关中性粒细胞，均匀铺在多聚赖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肿瘤转移相关中性粒细胞可视化检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/n1)准备新型肿瘤转移相关中性粒细胞：利用流式分选技术获取乳腺癌小鼠、患者外周血肿瘤转移相关中性粒细胞，均匀铺在多聚赖氨酸预包被的12孔板孵育2小时，用多聚甲醛固定，并使用1μM橙色核酸染料对肿瘤转移相关中性粒细胞的细胞外捕获网结构进行染色10min，弃上清并用磷酸缓冲盐溶液洗涤；/n2)准备肿瘤细胞：准备自发绿荧光蛋白的小鼠三阴性乳腺癌细胞、自发绿荧光蛋白的人三阴性乳腺癌细胞，调整浓度至1x10^5/mlx10ml,装于20ml注射器中，每10min震荡防止细胞沉降；/n3)准备可视化装置：12孔板延孔板边缘，使用5m...

【技术特征摘要】
1.肿瘤转移相关中性粒细胞可视化检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)准备新型肿瘤转移相关中性粒细胞：利用流式分选技术获取乳腺癌小鼠、患者外周血肿瘤转移相关中性粒细胞，均匀铺在多聚赖氨酸预包被的12孔板孵育2小时，用多聚甲醛固定，并使用1μM橙色核酸染料对肿瘤转移相关中性粒细胞的细胞外捕获网结构进行染色10min，弃上清并用磷酸缓冲盐溶液洗涤；
2)准备肿瘤细胞：准备自发绿荧光蛋白的小鼠三阴性乳腺癌细胞、自发绿荧光蛋白的人三阴性乳腺癌细胞，调整浓度至1x10^5/mlx10ml,装于20ml注射器中，每10min震荡防止细胞沉降；
3)准备可视化装置：12孔板延孔板边缘，使用5ml注射器针头戳成30°倾斜孔道，使用输液器针头戳入孔道至平板底部并固...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄建，王震，杨承慧，李丽丽，潘鋆，
申请(专利权)人：黄建，王震，杨承慧，李丽丽，潘鋆，
类型：发明
国别省市：浙江;33