用于肿瘤特异性细胞清除的抗-CD25制造技术

本发明专利技术提供在结合人CD25的抗体中发现的抗体序列，特别地，提供抗CD25‑a‑672抗体的序列，其不阻断CD25与IL‑2的结合或IL‑2信号传导。所要求保护的抗体结合CD25上的表位PHATFKAMA YKEGTM(42‑56)和YQCVQGYRALH(150‑160)。包括此种序列的抗体及其抗原结合部分可用于药物组合物和治疗方法中，特别是用于治疗癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于肿瘤特异性细胞清除的抗-CD25
本专利技术涉及抗-CD25抗体，包含抗-CD25抗体的药物组合物和这些抗体的治疗用途。
技术介绍
癌症免疫疗法涉及使用对象自身的免疫系统来治疗或预防癌症。免疫疗法利用癌细胞在其表面上通常具有可由免疫系统检测的细微不同的分子的事实。这些分子或癌症抗原为最常见的蛋白，但也包括诸如碳水化合物的分子。因此免疫疗法涉及诱导免疫系统经由这些靶抗原攻击肿瘤细胞。然而，恶性肿瘤(特别是实体瘤)可通过肿瘤细胞本身及由肿瘤微环境的组分介导的多种机制逃脱免疫监视。在后者中，通过调节性T细胞(Treg细胞或Treg)的肿瘤浸润，以及更具体地，效应物T细胞(Teff)对比Treg的不利平衡(即，Teff与Treg的较低比率)已被提议作为关键因子(SmythM等人,2014)。自其发现以来，已发现Treg在介导免疫稳态和促进外周耐受的建立和维持中至关重要。然而，在癌症的情形下，其作用更复杂。由于癌细胞表达自相关抗原和肿瘤相关抗原两者，因此Treg的存在(其试图抑制效应物细胞反应)可助力于肿瘤进展。因此，通常，Treg在已形成的肿瘤中的浸润代表有效抗肿瘤反应及治疗癌症的主要障碍之一。Treg采用的抑制机制被认为显著促进对当前疗法的限制或甚至是其失败，特别是依赖于诱导或增强抗肿瘤反应的免疫疗法(OnishiH等人；2012)。已不断地证实Treg细胞促进鼠类模型中肿瘤的建立和进展并且证实其不存在导致肿瘤进展延迟(Elpek等人,2007；Golgher等人,2002；Jones等人,2002；Onizuka等人,1999；Shimizu等人,1999)。在人体内，通过Treg细胞的高肿瘤浸润及更重要的效应物T(Teff)细胞与Treg细胞的低比率与多种癌症中的不良结果相关联(Shang等人,2015)。相反地，高Teff/Treg细胞比率与对人及小鼠两者的免疫疗法的有利反应相关联(Hodi等人,2008；Quezada等人,2006)。尽管如此，清除肿瘤中的Treg是复杂的，且此领域中的临床前及临床研究的结果是不一致的，这主要是由于难以鉴别对Treg具有特异性的靶标。CD25为用于实现Treg清除的潜在的分子靶标之一。实际上，CD25(也被称为白介素-2高亲和力受体α链(IL-2Rα))在Treg细胞上以较高水平进行组成型表达，且其不存在于T效应细胞上或以较低水平表达在T效应细胞上并且因此是有前景的Treg清除靶标。IL-2/CD25相互作用已经是鼠类模型中的若干研究的目标，其中大多数涉及大鼠抗鼠CD25抗体PC61的使用(SetiadyY等人,2010.)。此抗体的CD25结合和功能性活性已与由不同作者产生的一组单克隆抗体的活性进行了比较(LowenthalJ.W等人,1985.；Moreau,J.-L等人；VolkHD等人,1989；DantalJ等人,1991)。虽然原始研究证实了PC61的预防活性而非治疗活性，但当前研究显示此抗-CD25抗体的Fc优化形式引起肿瘤内Treg清除且在数种鼠类肿瘤模型中提供明显的治疗效益(VargasA等人,2017)。可利用的抗-CD25抗体(如PC61)阻断或抑制IL-2与CD25的结合，如同许多其他抗小鼠CD25抗体及大多数作为抗人CD25抗体被公开的抗体；参见例如WO2004/045512、WO2006/108670、WO1993/011238、WO1990/007861及WO2017/174331。例如，巴利昔单抗(basiliximab)及达克珠单抗(daclizumab)是抑制IL-2与CD25结合的抗人CD25抗体，且已被开发用于减少T效应细胞的活化(QueenC等人,1989及BielekovaB,2013)。巴利昔单抗是当前被批准用于移植物抗宿主病的嵌合小鼠-人CD25抗体，而达克珠单抗是被批准用于治疗多发性硬化的人源化CD25抗体。一些其他抗-CD25抗体仍允许IL-2与CD25结合，如克隆7D4(抗-小鼠CD25)、克隆2E4(抗-小鼠CD25)、克隆MA251(抗-人CD25)或7G7B6(抗-人CD25)(即非阻断抗体)。伊诺莫单抗(Inolimomab)/BT536尽管据称不阻断IL-2与CD25结合，但其的确阻断经由CD25的IL-2信号传导。7D4是在PC61或具有类似结合性质的抗体存在下或在用PC61或具有类似结合性质的抗体治疗后被广泛用于检测CD25-阳性细胞的大鼠IgM抗-小鼠CD25抗体(OnizukaS等人,1999)。极少文献公开7D4-IgM抗体单独的或相较于PC61的任何功能性质(KohmA等人,2006；HallettW等人,2008；FecciP等人,2006；McNeillA等人,2007；SetiadyY等人,2010；CouperK等人,2007.)。实际上，现有技术并未教导调适或在某种程度上修饰7D4的同种型或其他结构特征以便获得经改良的抗体，特别是可用于癌症治疗的抗体的可能性。尚未详细评估7D4-IgM(本身或作为经工程改造抗体)或被设计或特征为具有类似于7D4对小鼠CD25的CD25结合特征的任何抗-人CD25关于优化的Treg细胞清除的能力。如上文讨论的，Treg细胞在肿瘤中的浸润，并且特别是效应物Teff细胞与Treg细胞的低比率可产生不良的临床结果。CD25已被鉴别为Treg标志物并且因此可以是旨在清除Treg的治疗性抗体的目的靶标。重要地，CD25是IL-2的受体的α亚基且IL-2是Teff反应之关键细胞因子。目前为止已进行临床测试的抗-CD25抗体尽管清除Treg细胞，但也阻断经由CD25(具体地CD25/CD122/CD132复合物)的IL-2信号传导。本专利技术人目前已发现IL-2信号传导的此种阻断限制Teff反应且并且未阻断IL2信号传导的抗-CD25抗体可有效清除Treg细胞，同时仍允许IL-2刺激Teff细胞，从而提供展现较强抗癌作用的抗体。因此，现有技术中需要经改良的抗-CD25抗体，特别是不阻断CD25与IL-2结合或IL-2信号传导且清除Treg(尤其是肿瘤中的)且可用于治疗癌症的方法的此种抗体。
技术实现思路
本专利技术提供新的抗-CD25抗体剂。在一些实施方案中，提供的抗-CD25抗体剂是这样的抗体或抗原结合片段：特异性结合CD25，特别是人CD25，而不阻断白介素2(IL-2)与CD25结合或经由CD25的IL-2的信号传导，并且有效清除Treg(特别是肿瘤中的)。相比于不存在抗-CD25抗体剂的情况下的信号传导水平抗-CD25抗体剂允许响应于IL-2与CD25的结合的至少50％的IL-2信号传导。抗-CD25抗体剂因此被称为非阻断或非IL-2阻断抗-CD25抗体剂。在一些实施方案中，抗-CD25抗体剂或抗原结合片段结合CD25而不阻断IL-2与CD25的结合或经由CD25的IL-2的信号传导。即，在一些实施方案中，相比于不存在抗体的情况下的IL-2信号传导，抗-CD25抗体抑制小于50％的IL-2信号传导。抗-CD25抗体被表征为允许结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗体或其抗原结合片段，包含aCD25-a-672-HCDR3氨基酸序列(SEQ ID NO:4)作为重链可变互补决定区3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180313 EP PCT/EP2018/056312;20180313 GB 1804029.1.抗体或其抗原结合片段，包含aCD25-a-672-HCDR3氨基酸序列(SEQIDNO:4)作为重链可变互补决定区3。


2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，还包含
a)aCD25-a-672-HCDR1氨基酸序列(SEQIDNO:2)作为重链可变互补决定区1；和
b)aCD25-a-672-HCDR2氨基酸序列(SEQIDNO:3)作为重链可变互补决定区2。


3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，还包含：
a)aCD25-a-672-LCDR1氨基酸序列(SEQIDNO:6)作为轻链可变互补决定区1；
b)aCD25-a-672-LCDR2氨基酸序列(SEQIDNO:7)作为轻链可变互补决定区2；和
c)aCD25-a-672-LCDR3氨基酸序列(SEQIDNO:8)作为轻链可变互补决定区3。


4.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含可变重链，所述可变重链包含aCD25-a-672-HCDR123氨基酸序列(SEQIDNO:5)。


5.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含可变轻链，所述可变轻链包含aCD25-a-672-LCDR123氨基酸序列(SEQIDNO:9)。


6.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段是：单克隆抗体，结构域抗体，单链抗体，Fab片段，F(ab')2片段，单链可变片段(scFv)，scFv-Fc片段，单链抗体(scAb)，或单结构域抗体。


7.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段是：兔，小鼠，嵌合，人源化或完全人抗原结合抗体。


8.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体选自由以下各项组成的组：IgG1，IgG2，IgG3和IgG4同种型抗体。


9.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段被包含在双特异性抗体、多特异性抗体、或还包含治疗剂或诊断剂的免疫缀合物中。


10.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段结合人CD25的细胞外结构域。


11.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段结合在其表面表达人CD25的细胞并且是抗-CD25抗体剂。


12.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段不抑制白介素-2(IL-2)与CD25的结合。


13.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段不抑制白介素-2(IL-2)经由CD25的信号传导。


14.根据任一前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段是去岩藻糖化的。


15.特异性结合人CD25的表位的抗体或抗原结合片段，其中所述表位包括包含在SEQIDNO:1的氨基酸42-56和/或150-160中的一个或多个氨基酸残基。


16.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：安妮·古比耶，贝特里兹·古耶内切亚·科尔佐，约瑟芬·萨利姆，凯文·莫尔德，帕斯卡·梅希尔，马克·布朗，詹姆斯·乔赫根，比昂卡·普林茨，塞尔吉奥·克萨达，
申请(专利权)人：塔斯克疗法有限公司，癌症研究技术有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB