一种柱上低pH病毒灭活的方法技术

技术编号:26486323 阅读:356 留言:0更新日期:2020-11-27 15:10
本发明专利技术属于生物技术领域,具体公开了一种柱上低pH病毒灭活的方法。具体步骤如下:1)阳离子层析柱平衡。2)蛋白样品上样。3)阳离子层析柱上样后冲洗。4)柱上低pH病毒灭活。5)阳离子层析柱再冲洗。6)蛋白洗脱回收。本发明专利技术的特色在于开发了一种快速便捷的低pH病毒灭活方法,方法的关键在于阳离子层析柱上直接进行低pH病毒灭活,操作步骤简单、工艺稳健、有利于保护对酸敏感的蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种柱上低pH病毒灭活的方法
本专利技术属于生物
,具体涉及蛋白药物下游生产工艺中一种柱上低pH病毒灭活的方法。
技术介绍
近年来蛋白类药物越来越受到人们的关注。随着哺乳动物细胞培养技术的发展,大量的抗体类蛋白或融合蛋白都采用哺乳动物进行表达生产。目前,中国仓鼠卵巢细胞(CHO,Chinesehamsterovarycells)是应用最为广泛的表达体系之一。采用动物细胞表达生产的产品,有引入病毒的风险。为了保证最终产品的安全性,需要下游生产工艺有效去除或者灭活潜在的病毒。低pH病毒灭活是一种常用的病毒灭活方式,能有效降低病毒水平,但在传统的实际应用和操作过程中仍存在一些不足之处。低pH病毒灭活通常需要在较低的pH下进行,在进行酸调节时容易发生局部过酸,导致部分产品聚体含量增加。其次,大规模生产中,pH的调节操作比较繁琐,调节过程时间长,调节pH的一致性不容易控制。另外,在容器中进行低pH调节,容易存在死角或是残液挂壁的现象,有可能导致病毒灭活不彻底。本专利技术针对蛋白药物,采用柱上低pH病毒灭活,充分利用阳离子层析柱高吸附本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种柱上低pH病毒灭活的方法,其特征在于包括如下步骤:/n1)采用50mM柠檬酸平衡缓冲液冲洗阳离子层析柱3-8个柱体积;/n2)将待处理的蛋白样品调节至pH 4.0-6.0,得到蛋白上样液;/n3)将蛋白上样液上样到阳离子层析柱上,上样量为20-120g/L填料;/n4)采用50mM柠檬酸平衡缓冲液冲洗层析柱3-8个柱体积;/n5)采用50mM柠檬酸灭活缓冲液冲洗层析柱3-8个柱体积,并暂停30-120min;/n6)采用50mM柠檬酸洗脱缓冲液洗脱回收产品。/n

【技术特征摘要】
1.一种柱上低pH病毒灭活的方法,其特征在于包括如下步骤:
1)采用50mM柠檬酸平衡缓冲液冲洗阳离子层析柱3-8个柱体积;
2)将待处理的蛋白样品调节至pH4.0-6.0,得到蛋白上样液;
3)将蛋白上样液上样到阳离子层析柱上,上样量为20-120g/L填料;
4)采用50mM柠檬酸平衡缓冲液冲洗层析柱3-8个柱体积;
5)采用50mM柠檬酸灭活缓冲液冲洗层析柱3-8个柱体积,并暂停30-120min;
6)采用50mM柠檬酸洗脱缓冲液洗脱回收产品。


2.根据权利要求1所述的一种柱上低pH病毒灭活的方法,其特征在于所述的50mM柠檬酸平衡缓冲液,pH值为4.0-6....

【专利技术属性】
技术研发人员:顾佳黎
申请(专利权)人:湖州师范学院
类型:发明
国别省市:浙江;33

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