一种动态检测蛋白质O-GlcNAc糖基化的探针及其制备方法与应用技术

本公开涉及分子生物学领域，公开了一种动态检测蛋白质O‑GlcNAc糖基化的探针及其制备方法与应用。所述探针包括N‑乙酰氨基葡萄糖苷酶的失活突变体、蛋白标签和荧光分子标记，该探针可在活体中对蛋白质O‑GlcNAc糖基化进行动态检测和监测的探针，在识别底物时序列偏好性较小，且不存在识别底物的倾向性问题，并具有高特异性、高灵敏度的特点。此外，本发明专利技术所提供的探针还具有低毒性的优势，在进行活体检测时，不会对果蝇早期活胚胎的有丝分裂造成损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种动态检测蛋白质O-GlcNAc糖基化的探针及其制备方法与应用
本公开涉及分子生物学领域，尤其涉及一种动态检测蛋白质O-GlcNAc糖基化的探针及其制备方法与应用。
技术介绍
蛋白质O-GlcNAc糖基化是一种在蛋白质丝、苏氨酸残基上连接单个N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的动态可逆的翻译后修饰，细胞内蛋白质O-GlcNAc糖基化的水平由N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(OGA)两种互相拮抗的酶共同维持，它们分别催化GlcNAc在蛋白质上的添加和去除。这种修饰参与细胞众多生物学过程。目前已知的蛋白质O-GlcNAc糖基化检测方法包括凝集素检测法、代谢标记检测法、酶标记检测法和抗体检测法：1、凝集素检测法：小麦胚芽凝集素(WheatGermAgglutinin,WGA)是一种常见的植物凝集素，它不仅能与O-GlcNAc单结合，还能与末端含有N-乙酰氨基葡萄糖或壳聚糖的低聚糖结合。2、代谢标记检测法：原理是将具有特殊修饰基团的GlcNAc类似物(如GlcNAz，GlcNAlk)引入细胞中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动态检测蛋白质O-GlcNAc糖基化的探针，其特征在于，包括OGA失活突变体、蛋白标签和荧光分子标记；所述OGA失活突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种动态检测蛋白质O-GlcNAc糖基化的探针，其特征在于，包括OGA失活突变体、蛋白标签和荧光分子标记；所述OGA失活突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述蛋白标签为HaloTag。


3.根据权利要求1或2所述的探针，其特征在于，所述蛋白标签连接在所述OGA失活突变体的N端。


4.根据权利要求3所述的探针，其特征在于，所述荧光分子标记为HaloTag-AlexaFluorligand。


5.权利要求1～4任一项所述探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)构建含有OGA失活突变体-蛋白标签融合蛋白基因的表达载体；
2)将步骤1)构建的表达载体转...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁凯，丹尼尔范阿尔顿，张耀文，王丹丹，陈芳，孟阳，张娜，廖潇啸，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43