本发明专利技术提供一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法，包括以下步骤：（1）取烟草样品加入有机试剂，超声振荡后，将液体转移至新离心管中，加入净化剂，漩涡振荡、离心后，取有机层吹干，加入复溶液复溶，分层后，得到上层多菌灵待测液，下层甲基硫菌灵待测液；（2）将所述待测液与团聚剂、纳米金溶胶混合均匀后，通过便携式拉曼光谱仪检测，并分析测得的表面增强拉曼光谱图，获得多菌灵和甲基硫菌灵的检测结果。
【技术实现步骤摘要】
一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法
本专利技术涉及农药多菌灵、甲基硫菌灵的检测方法，具体是指利用表面增强拉曼光谱检测烟草中残留的多菌灵、甲基硫菌灵，属于农药残留分析检测领域。
技术介绍
多菌灵和甲基硫菌灵均属于苯并咪唑类，是具有高效、广谱、低毒特点的一类杀菌剂，其通过干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成影响细胞分裂起到杀菌作用，广泛应用于农业生产中植物真菌病害的防治。甲基硫菌灵为在烟草上登记使用的农药，在植物体内可代谢为多菌灵。研究发现，甲基硫菌灵具有基因毒性和生殖毒性，其降解或代谢产物多菌灵残效期长，具有蓄积毒性。鉴于多菌灵和甲基硫菌灵的广泛施用及剂量依赖的潜在风险，发展多菌灵和甲基硫菌灵残留的快速检测具有重要意义。目前，多菌灵和甲基硫菌灵残留的检测方法主要为液相色谱及其与质谱联用技术、免疫分析法等。如专利技术专利200610097540.1和专利技术专利201710608203.2分别公开了蔬菜和铁皮石斛中多菌灵和甲基硫菌灵残留的液相色谱检测方法。专利201410486081.0公开了一种液质联用仪同时检测柑橘中多菌灵、甲基硫菌灵等农药残留的方法。这类方法具有检测灵敏度高、特异性强等优势，但往往需要复杂的提取、净化等前处理过程，周期长、成本高，且需要昂贵的大型仪器，不适合批量样品的现场快速检测。专利201710250425.1公开了一种多菌灵和甲基硫菌灵二合一检测酶联免疫试剂盒，其相对于传统仪器分析技术具有快速简便等优势，但是在获得高效价和高特异性的抗体，以及提高方法检测灵敏度和检测限方面，仍待进一步研究和提高。而且，多菌灵与甲基硫菌灵结构相似，目前的快速检测方法仍未能很好地解决它们之间相互干扰的问题。因此，寻求特异性强、成本低、操作简便、检测速度快的多菌灵和甲基硫菌灵检测方法具有重要的现实意义。表面增强拉曼光谱技术(SERS)是一种非常有效的探测分子间相互作用、表征表面分子吸附行为和分子结构的工具，具有检测灵敏度高、样品前处理简单、分析速度快、仪器体积小巧便于携带、检测成本低等优势，在环境污染物、食用添加剂、农药残留等的快速检测方面受到越来越多的关注。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于表面增强拉曼光谱的，同时、快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵的方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法，包括以下步骤：(1)取烟草样品加入有机试剂，超声振荡后，将液体转移至新离心管中，加入净化剂，漩涡振荡、离心后，取有机层吹干，加入复溶液复溶，分层后，得到上层多菌灵待测液，下层甲基硫菌灵待测液；其中，为使多菌灵和甲基硫菌灵充分溶出，所述有机溶剂为乙腈和甲苯的混合溶剂；所述复溶液为环己烷与纯水混合溶剂，为了除去烟草中色素、多酚等的干扰，所述净化剂为N-丙基乙二胺键合固相吸附剂(PSA)和无水硫酸镁；(2)将所述待测液与团聚剂、纳米金溶胶混合均匀后，通过便携式拉曼光谱仪检测，并分析测得的表面增强拉曼光谱图，获得多菌灵和甲基硫菌灵的检测结果。在一些实施方式中，步骤(1)中，为使多菌灵和甲基硫菌灵充分溶出，将烟草样品按照1：5～20的比例与有机试剂混合后，超声振荡1～5min。所述有机溶剂为体积比5：0.5～2.5的乙腈和甲苯的混合溶剂。在一些实施方式中，为了除去烟草中色素、多酚等的干扰，步骤(1)中，使用N-丙基乙二胺键合固相吸附剂(PSA)和无水硫酸镁作为净化剂，每克烟草样品中所述PSA的用量为0～0.1g，无水硫酸镁的用量为0.1～1g，漩涡振荡1～3min，并于8000～10000r/min离心1～2min。在一些实施方式中，步骤(1)中，所述复溶液为体积比1：1～3的环己烷与纯水混合溶剂，加入复溶液后，漩涡振荡1～3min，并于8000～10000r/min离心1～2min，得到待测样品液；其中，上层为多菌灵待测液，下层为甲基硫菌灵待测液。在一些实施方式中，为了调节体系离子强度，使金纳米粒子获得最优增强能力，步骤(2)中，所述的团聚剂为氯化钠、碳酸钾、溴化钾、氯化钾、硫酸钠、硫酸镁、碘化钾中的一种或几种混合，优选地，上层多菌灵待测液所用团聚剂为1mol/L碳酸钾与1mol/L溴化钾水溶液按体积比1：2～5混合，下层甲基硫菌灵待测液所用的团聚剂为0.5～1.5mol/L氯化钠水溶液；在一些实施方式中，步骤(2)中，所述纳米金溶胶颗粒粒径为20～150nm，为了保证合成的纳米金尺寸形貌的均一性以及纳米金溶胶体系的稳定性，并综合考虑体系中纳米金溶胶的增强能力，优选地，纳米金溶胶颗粒粒径为50～80nm。在一些实施方式中，步骤(2)中，所述待测液、团聚剂、纳米金溶胶的体积比为1：0.1～1：0.8～6；优选地，待测液、团聚剂、纳米金溶胶的体积比为1：0.2～0.6：1～4。在一些实施方式中，步骤(2)中，所述便携式拉曼光谱仪参数为激发光源785nm，激发功率为50～500mW，扫描时间为100～10000ms，优选地，激发功率为500mw，扫描时间5000ms。在一些实施方式中，步骤(2)中，将所采集到的样品表面增强拉曼光谱与多菌灵、甲基硫菌灵标准品的表面增强拉曼图谱对比，其中，多菌灵的表面增强拉曼特征峰：625cm-1、756cm-1、903cm-1、940cm-1、1006cm-1、1082cm-1、1224cm-1、1263cm-1；甲基硫菌灵的表面增强拉曼特征峰：605cm-1、712cm-1、961cm-1、1039cm-1、1189cm-1、1259cm-1；根据特征峰便可判断样品中是否含有多菌灵或甲基硫菌灵。相较于现有检测方法，本专利技术提供的一种同时、快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法具有特异性强的明显优势。本方法通过简单前处理将多菌灵与甲基硫菌灵分离于同一处理液的不同溶剂层，并结合适宜的团聚剂体系和表面增强拉曼光谱的指纹鉴定优势，实现了快检方法中甲基硫菌灵和多菌灵的特异性识别。此外本专利技术提供的方法，烟草样品前处理步骤简单、操作方便、快速高效、成本低廉、有机试剂用量少，且无需依赖大型设备，适用于现场批量样品的快速筛查。附图说明图1为多菌灵固体拉曼光谱和不同浓度标准溶液的表面增强拉曼光谱，其中a为金溶胶空白，b、c、d、e分别为0.01、0.05、0.1、0.2mg/L多菌灵标准溶液的表面增强拉曼光谱，f为多菌灵固体拉曼光谱；图2为甲基硫菌灵固体拉曼光谱和不同浓度标准溶液的表面增强拉曼光谱，其中a为金溶胶空白，b、c、d、e分别为0.01、0.05、0.1、0.2mg/L甲基硫菌灵标准溶液的表面增强拉曼光谱，f为甲基硫菌灵固体拉曼光谱；图3为含多菌灵烟草样品的表面增强拉曼图谱，其中a、b、c分别为含有0、1、4mg/kg多菌灵的烟草样品提取液表面增强拉曼光谱，d为多菌灵标准品表面增强拉曼光谱；图4为含甲基硫菌灵烟草样品的表面增强拉曼图谱，其中a、b、c分别为含有0、2、5mg/kg甲基硫菌灵的烟草本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n(1)取烟草样品加入有机试剂，超声振荡后，将液体转移至新离心管中，加入净化剂，漩涡振荡、离心后，取有机层吹干，加入复溶液复溶，分层后，得到上层多菌灵待测液，下层甲基硫菌灵待测液；/n其中，所述有机溶剂为乙腈和甲苯的混合溶剂，所述复溶液为环己烷与纯水混合溶剂，/n所述净化剂为N-丙基乙二胺键合固相吸附剂PSA和无水硫酸镁；/n(2)将所述待测液与团聚剂、纳米金溶胶混合均匀后，通过便携式拉曼光谱仪检测，并分析测得的表面增强拉曼光谱图，获得多菌灵和甲基硫菌灵的检测结果。/n
【技术特征摘要】
1.一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)取烟草样品加入有机试剂，超声振荡后，将液体转移至新离心管中，加入净化剂，漩涡振荡、离心后，取有机层吹干，加入复溶液复溶，分层后，得到上层多菌灵待测液，下层甲基硫菌灵待测液；
其中，所述有机溶剂为乙腈和甲苯的混合溶剂，所述复溶液为环己烷与纯水混合溶剂，
所述净化剂为N-丙基乙二胺键合固相吸附剂PSA和无水硫酸镁；
(2)将所述待测液与团聚剂、纳米金溶胶混合均匀后，通过便携式拉曼光谱仪检测，并分析测得的表面增强拉曼光谱图，获得多菌灵和甲基硫菌灵的检测结果。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤(1)中，将烟草样品按照1：5～20的比例与有机试剂混合后，超声振荡1～5min。所述有机溶剂为体积比5：0.5～2.5的乙腈和甲苯的混合溶剂。
每克烟草样品中所述PSA的用量为0～0.1g，无水硫酸镁的用量为0.1～1g，漩涡振荡1～3min，并于8000～10000r/min离心1～2min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述复溶液为体积比1：1～3的环己烷与纯水混合溶剂，加入复溶液后，漩涡振荡1～3min，并于8000～10000r/min离心1～2min，得到待测样品液；其中，上层为多菌灵待测液，下层为甲基硫菌灵待测液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的团聚剂为氯化钠、碳酸钾、溴化钾、氯化钾、硫酸钠、硫酸镁、碘化钾中的一种或几种混合。
【专利技术属性】
技术研发人员：李霞，杨君，陈晓水，尹洁，黄艺伟，项波卡，朱书秀，陆明华，周国俊，李剑锋，
申请(专利权)人：浙江中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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