一种试剂盒的制备方法及其在蛋白质荧光标记上的应用技术

本发明专利技术公开了一种试剂盒的制备方法及其在蛋白质荧光标记上的应用，具体涉及蛋白质检测技术领域，该制备方法包括如下步骤：(1)荧光素甲酯的合成；(2)6‑氧‑顺丁烯二酸单酯化‑9‑(2’‑甲氧羰基)荧光素的合成；(3)6‑氧‑(N‑羟基琥珀酰亚胺顺丁烯二酸单酯)‑9‑(2’‑甲氧羰基)荧光素的合成三个步骤。该制备方法可制备得到新型蛋白质荧光标记试剂，该新型蛋白质荧光标记试剂具有标记产物稳定性高、标记效率高、荧光量子产率高、标记的时间短以及标记时反应条件简单的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种试剂盒的制备方法及其在蛋白质荧光标记上的应用
本专利技术涉及蛋白质检测
，具体为一种试剂盒的制备方法及其在蛋白质荧光标记上的应用。
技术介绍
蛋白质作为肌体细胞的重要组成部分，是一切生命的物质基础。蛋白质和蛋白质组学的研究是科学研究领域最热门的研究方向之一，在医学、生命科学和食品安全检测中具有重要的地位。对蛋白质的检测是研究蛋白质的基础。蛋白质自身的检测信号主要有来自蛋白质本身的紫外吸收，有些蛋白质也有较弱的荧光，但是，这些检测信号强度都较弱，由此使得检测灵敏度较低，对于一些痕量的蛋白质，通过蛋白质自身的信号，难以实现有效的检测。为了弥补上述缺陷，需要对蛋白质进行染色或进行标记来提高检测的灵敏度。常见的蛋白质染色方法有考马斯亮蓝染色、银染染色、曙红Y染色、尼罗红染色、荧光染色等。然而，这些染色方法都是通过蛋白质和染色剂间的物理作用而实现的，对于一些痕量蛋白质的检测，其灵敏度也难以达到要求。为了进一步提高检测灵敏度，技术人员通过如放射性标记、酶标记、荧光标记等对蛋白质进行标记检测。其中荧光标记以其高灵敏度、安全可靠等优势本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)荧光素甲酯的合成/n(1.1)准确称取荧光素溶于溶剂A中，并滴入浓硫酸，加热回流13～15小时，且用

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)荧光素甲酯的合成
(1.1)准确称取荧光素溶于溶剂A中，并滴入浓硫酸，加热回流13～15小时，且用分子筛干燥，得到第一荧光素甲酯粗品；
(1.2)在得到的荧光素甲酯粗品中加入冰以及NaHCO3粉末，过滤，水洗，得到第二荧光素甲酯粗品；
(1.3)将得到的第二荧光素甲酯粗品放入质量分数为2％的NaHCO3水溶液中洗涤，过滤，滤渣水洗后得到第三荧光素甲酯粗品；
(1.4)将得到的第三荧光素甲酯粗品放入质量分数为1％的醋酸溶液溶液中洗涤，过滤，滤渣水洗后得到荧光素甲酯；
(2)6-氧-顺丁烯二酸单酯化-9-(2’-甲氧羰基)荧光素的合成
(2.1)将所述的荧光素甲酯溶于无水DMF中，加入顺丁烯二酸酐，加热回流9～11小时，停止反应；
(2.2)在上述反应产物中加入质量分数为2％的NaHCO3溶液，反应8～12min后，用0.1M盐酸调节体系至酸性，过滤，得到滤渣A；
(2.3)滤渣A经质量分数为1％的乙酸洗涤，在40℃的温度条件下真空干燥24小时，得到所述的6-氧-顺丁烯二酸单酯化-9-(2’-甲氧羰基)荧光素；
(3)6-氧-(N-羟基琥珀酰亚胺顺丁烯二酸单酯)-9-(2’-甲氧羰基)荧光素的合成
(3.1)准确称取6-氧-顺丁烯二酸单酯化-9-(2’-甲氧羰基)荧光素、N-羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺，均匀混合，置于无水DMF中，并于20℃的温度条件下密闭搅拌10～14小时，得到反应产物；
(3.2)将得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：马明，李锦花，肖道清，冯睿，石守江，
申请(专利权)人：宁波海关技术中心，宁波检验检疫科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：浙江;33