一种泰拉霉素含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种泰拉霉素含量的检测方法，该方法采用如下的色谱条件进行检测：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱，流动相：20mmol/L甲酸铵水溶液‑甲醇‑乙腈；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；CAD检测器雾化温度：45℃，载气气压为60psi，流速为4L/min；进样量20μL；稀释剂为甲醇‑0.1％甲酸水(20:80)。本发明专利技术创造通过HPLC、同时辅助使用电喷雾检测器对泰拉霉素注射液样品的含量进行测定。经过精密度试验、线性关系试验对方法进行了验证，结果表明该方法准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确性高。

【技术实现步骤摘要】
一种泰拉霉素含量的检测方法
本专利技术属于分析检测
，特别涉及一种泰拉霉素制剂含量的检测方法。
技术介绍
泰拉霉素，别名土拉霉素，英文名：Tulathromycin，分子式为C41H79N3O12，分子量为806.08，是由15元氮杂内酯环(式1A)和13元氮杂内酯环(式1B)2种异构体以9:1的比例组成的混合物。它为动物专用的大环内酯类半合成抗生素，属三胺类广谱抗生素。目前市售的10％泰拉霉素注射液(商品名:瑞可新)是由13元氮杂内酯环异构体CP-547，272(含量为8.0％～13.0％，泰拉霉素B)和15元氮杂内酯环异构体CP－472，295(含量为87.0％～92.0％，泰拉霉素A)组成的。泰拉霉素是广谱抗菌药，其具有吸收迅速、生物利用度高、低残留、半衰期长、药效持久、胃肠外单次给药即能提供全程治疗等特点，主要用于放线杆菌、支原体、巴氏杆菌、副嗜血杆菌引起的猪、牛的呼吸系统疾病。泰拉霉素的使用减少了病原传播，便于规模化管理。泰拉霉素在畜牧业生产中发挥着重要的作用。为了保障畜牧养殖业和社会食品安全，建立简便、准确、可靠的泰拉霉素质量控制方法十分必要。由于泰拉霉素是由15元氮杂内酯环和13元氮杂内酯环两种异构体以9:1的比例组成的混合物，其结构中不含发色基团，无紫外吸收或者仅有紫外末端吸收。因此也不能采用常用的高效液相色谱－紫外或荧光检测器测定。而蒸发光检测器由于灵敏度和重现性差，面积需要求导后进行线性回归后才能进行含量测定使它的推广应用受到一定的影响。本专利技术为了克服现有技术的不足，提供了一种HPLC-CAD检测泰拉霉素注射液制剂含量的方法，电喷雾检测器是一种新型的高效液相色谱通用性检测器，灵敏度较高通用。其原理是基于雾化-气溶胶的HPLC检测器，通过电晕针使氮气带电，而后将带电氮气与经干燥过的洗脱液中的溶质颗粒逆向充分混合，带电氮气的电荷转移，使溶质颗粒带电后，进入静电计检测电信号值。本方法具有简便、高效、精密度和准确度高的优点。
技术实现思路
本专利技术创造为解决现有技术中的问题，提供了一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，故本方法具有简便、高效、精密度和准确度高的优点。本专利技术采用的技术方案为：一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，该方法采用如下的色谱条件进行检测：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱，流动相：20mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇-乙腈；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；CAD检测器雾化温度：45℃，载气气压为60psi，流速为4L/min；进样量20μL；稀释剂为甲醇-0.1％甲酸水(20:80)。优选地，所述色谱柱为岛津WondasilC18柱(4.6*150mm，5μm)或沃特世XterraRP(4.6*150mm，3.5μm)。更优选地，所述色谱柱为沃特世XterraRP(4.6*150mm，3.5μm)。适合的色谱柱使得被测样品具有更好的分离效果。优选地，流动相中，甲醇的体积分数为35％-45％，乙腈的体积分数为30％-50％；余量为20mmol/L甲酸铵水溶液；更优选地，20mmol/L甲酸铵水溶液、甲醇、乙腈的体积比为：25：35：40。本专利技术中流动相中用甲酸铵水溶液和甲醇、乙腈体系，稀释剂用甲醇/0.1％甲酸水(20:80)。能够很好的对泰拉霉素注射液制剂在进液相前进行稀释，并在较短的保留时间内获得较好的出峰效果，有利于检测精度的提高。泰拉霉素，为15元氮杂内酯环(式1A)和13元氮杂内酯环(式1B)2种异构体以9:1的比例组成的混合物。式1A泰拉霉素A式1B泰拉霉素B本专利技术方法，包括下述步骤：S1：用稀释剂配制已知泰拉霉素含量浓度的对照溶液，并采用如上所述的色谱条件进行同一色谱条件下的检测，计算不同浓度的对照溶液在同一保留时间下的峰面积，其中泰拉霉素B在泰拉霉素A之前先出峰，作出以泰拉霉素A和B峰面积总和y关于对照溶液浓度x的标准曲线方程y＝f(x)；S2：精密称取一定质量的泰拉霉素注射液样品，用本专利技术中的稀释剂处理后，采用同步骤S1的液相色谱检测条件(包括色谱条件、保留时间、进样量等)，获得待测泰拉霉素注射液样品溶液在同一保留时间下的峰面积，并根据步骤S1所获得的标准曲线方程y＝f(x)，计算得到待测泰拉霉素注射液样品中泰拉霉素的浓度；S3：根据待测泰拉霉素注射液样品的密度，可以得到泰拉霉素注射液样品中泰拉霉素的含量数据。其中，所述步骤S1中，标准曲线方程y＝f(x)的标准溶液浓度x在500-1500μg/ml范围，即本专利技术能够在较大的检测范围内获得准确可靠的检测结果。进一步，所述标准曲线方程y＝f(x)为一元一次方程，相关系数R2≥0.999，能够获得拟合度很高的线性方程。本专利技术所具有的有益效果：本专利技术创造通过HPLC、同时辅助使用电喷雾检测器对泰拉霉素注射液样品的含量进行测定。经过精密度试验、线性关系试验对方法进行了验证，结果表明该方法准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确性高。附图说明图1是具体实施例中泰拉霉素对照品溶液的一个HPLC检测图谱；图2是具体实施例中泰拉霉素对照品的线性关系图与标准曲线方程。图3为实施例2不同色谱柱对泰拉霉素注射液含量测定的色谱图；其中图3-A为岛津色谱柱样品测定色谱图；3-B沃特世色谱柱样品测定色谱图；3-C安捷伦色谱柱样品测定色谱图图4为实施例3不同流动相和稀释剂测定样品的色谱图。具体实施方式下面通过结合附图对本专利技术创造进行进一步说明，但不限定本专利技术的保护范围。实施例1(1)色谱条件采用安捷伦1260高效液相色谱仪联合CoronaUltra电喷雾检测器，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱，选用WatersXterraRP(4.6*150mm，3.5μm)；流动相是20mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇-乙腈(25：35：40)；流速1.0ml/min；柱温是35℃，检测器雾化温度：45℃；载气气压为60psi，流速为4L/min；稀释剂为甲醇-0.1％甲酸水(20:80)；进样量20μl。(2)标准曲线方程的获得精密称取泰拉霉素对照品500mg，置于50ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释定容至刻度做为泰拉霉素对照溶液储备液，然后将泰拉霉素对照溶液储备液逐级稀释制成泰拉霉素浓度为0.5、0.8、1、1.2、1.5mg/ml的泰拉霉素对照溶液，将不同浓度的泰拉霉素对照溶液分别注入步骤(1)设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，进样量20μl，分别计算同一保留时间下的峰面积，其中泰拉霉素B在泰拉霉素A之前先出峰。以对照溶液浓度x为横坐标，以泰拉霉素A和B峰面积总和y为纵坐标，做出标准曲线方程y＝2626.9x-44.857，R2＝0.9999，结果表明泰拉霉素在500-1500μg/ml范围内，峰面积和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，其特征在于：该方法采用如下的色谱条件进行检测：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱，流动相：20mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇-乙腈；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；CAD检测器雾化温度：45℃，载气气压为60psi，流速为4L/min；进样量20μL；稀释剂为甲醇-0.1％甲酸水(20:80)。/n

【技术特征摘要】
1.一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，其特征在于：该方法采用如下的色谱条件进行检测：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱，流动相：20mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇-乙腈；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；CAD检测器雾化温度：45℃，载气气压为60psi，流速为4L/min；进样量20μL；稀释剂为甲醇-0.1％甲酸水(20:80)。


2.根据权利要求1所述的一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，其特征在于：所述色谱柱为岛津WondasilC18柱(4.6*150mm，5μm)或沃特世XterraRP(4.6*150mm，3.5μm)。


3.根据权利要求2所述的一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，其特征在于：所述色谱柱为沃特世XterraRP(4.6*150mm，3.5μm)。


4.根据权利要求1所述的一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，其特征在于：流动相中，甲醇的体积分数为35％-45％，乙腈的体积分数为30％-50％；余量为20mmol/L甲酸铵水溶液。


5.根据权利要求1所述的一种泰拉霉素注射液制剂含量的高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜淋洁，程雪娇，王建，罗潇，陈明霞，余贵菊，于小婷，甄盼盼，娄艳华，刘紫薇，韩怡，
申请(专利权)人：天津市中升挑战生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12