一种纯化尿激酶的亲和层析填料及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种纯化尿激酶的亲和层析填料及制备方法和应用，本发明专利技术属于生物化学纯化领域，本发明专利技术在实施过程中使用氨甲苯酸和4‑氨基苯甲脒二盐酸盐对Sepharose CL‑6B进行修饰，得到一种Sepharose CL‑6B‑氨甲苯酸‑p‑AB填料，该填料可以更好地纯化分离高分子尿激酶和低分子尿激酶，活性回收率高，均在95％以上，回收效果好。

【技术实现步骤摘要】
一种纯化尿激酶的亲和层析填料及制备方法和应用
本专利技术属于生物化学纯化领域，具体涉及一种纯化尿激酶的亲和层析填料及制备方法和应用。
技术介绍
组织型纤溶酶原激活剂是治疗急性心肌梗塞最具代表性的溶栓剂。然而，组织型纤溶酶原激活剂的副作用是显著的，例如出血和再闭塞。有研究表明组织型纤溶酶原激活剂和尿激酶联合治疗可降低这些副作用，因此，尿激酶也被广泛用作治疗急性心肌梗塞的有效溶栓剂。人尿源尿激酶主要有天然高分子量尿激酶(HUK,54000Dal)和低分子量尿激酶(LUK,33000Dal)两种，而高分子尿激酶(HUK)是尿液中尿激酶的主要成分，低分子尿激酶(LUK)被认为是通过蛋白水解降解和/或自溶切割从高分子尿激酶(HUK)衍生而来的。尽管体外血浆存在时，高分子尿激酶(HUK)和低分子尿激酶(LUK)的酶活性几乎相同，基于高分子尿激酶(HUK)对原生动物体内的Glu-纤溶酶原的亲和力更高，因此高分子尿激酶(HUK)的活性被认为比低分子尿激酶(LUK)更为重要。Abaza、Koopman、Shetty和西拉伯等人报道了高分子尿激酶(HUK)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纯化尿激酶的亲和层析填料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)氨甲苯酸-Sepharose CL-6B的制备/na、将Sepharose CL-6B依次用水、20％二恶烷水溶液、60％二恶烷水溶液和100％二恶烷洗涤，得到洗涤后的Sepharose CL-6B；/nb、将洗涤后的Sepharose CL-6B置于100％二恶烷中，得到Sepharose CL-6B溶液，并向Sepharose CL-6B溶液加入N，N'-羰基二咪唑，得到悬浮液；/nc、将悬浮液在室温下搅拌30分钟，然后依次用100％二恶烷、60％二恶烷水溶液、20％二恶烷水溶液和水洗涤，得到活化的Sephar...

【技术特征摘要】
1.一种纯化尿激酶的亲和层析填料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)氨甲苯酸-SepharoseCL-6B的制备
a、将SepharoseCL-6B依次用水、20％二恶烷水溶液、60％二恶烷水溶液和100％二恶烷洗涤，得到洗涤后的SepharoseCL-6B；
b、将洗涤后的SepharoseCL-6B置于100％二恶烷中，得到SepharoseCL-6B溶液，并向SepharoseCL-6B溶液加入N，N'-羰基二咪唑，得到悬浮液；
c、将悬浮液在室温下搅拌30分钟，然后依次用100％二恶烷、60％二恶烷水溶液、20％二恶烷水溶液和水洗涤，得到活化的SepharoseCL-6B；
d、在室温下，将活化的SepharoseCL-6B与氨甲苯酸置于40mLpH＝10的水中反应10小时，然后依次用水、NaOH、HCl和水洗涤，即得到氨甲苯酸-SepharoseCL-6B；
(2)SepharoseCL-6B-氨甲苯酸-p-AB的制备
将制备的氨甲苯酸-SepharoseCL-6B置于水中制成溶液，向溶液中加入4-氨基苯甲脒二盐酸盐和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，得到悬浮液，使用HCl和NaOH将悬浮液的pH调节至4.5，并在此pH条件下保持10小时；然后依次用水、NaOH、HCl和水洗涤，即得到目标产物SepharoseCL-6B-氨甲苯酸-p-AB。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤b中所述的SepharoseCL-6B与N，N'-羰基二咪唑的加入量之比为40mL：2.0-3.0g。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤d中所述的SepharoseCL-6B和氨甲苯酸添加量之比为40mL：20-24g。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的氨甲苯酸-SepharoseCL-6B、4-氨基苯甲脒二盐酸盐和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二...

【专利技术属性】
技术研发人员：田瀚，付贞，唐维，熊心磊，郭芬，
申请(专利权)人：武汉人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42