基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法技术

基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法，涉及环肽类化合物。实现精准调控三元环肽分子内的二硫键配对方式，将三元环肽模板融合表达于噬菌体表面，构建噬菌体三元环肽文库。利用CPPC基序具有优先生成平行配对的二聚体的倾向性质，将两个CPPC基序和两个半胱氨酸插入多肽骨架中，实现有效调控二硫键的配对和多肽折叠，通过改变两个CPPC基序和两个半胱氨酸的排布位置，使具有不同多环拓扑结构的新型富二硫键环肽化合物得以从头设计。无需借助天然环肽骨架和非天然氨基酸的插入，可以作为多环肽库的模板，并利用该模板成功构建了噬菌体三元环肽文库，筛选出并不是来源于天然产物支架结构的具有新结构的功能性环肽配体。

【技术实现步骤摘要】
基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法
本专利技术涉及环肽类化合物，尤其是涉及一种基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法。
技术介绍
环肽类化合物是一类结构特殊、构象稳定、生物活性广泛、作用机理独特的环状化合物，对靶标受体具有高的结合亲和力和特异性、细胞毒性低、口服利用度高。因此，针对环肽类化合物进行配体药物的研发引起了人们越来越多的关注。比如用于细菌及真菌性感染的环肽药物Telavancin和Dalbavancin；抗肿瘤环肽药物Lanreotide和Romidepsin，这些药物都已经成功上市并发挥了重大的医用价值。但是这些药物中尤其是一些富含二硫键的环肽药物，主要是提取于自然界的动植物。比如环肽药物Linaclotide，由14个氨基酸组成，分子内含有三对二硫键构成三元环肽，衍生自多种可致腹泻的大肠杆菌菌株所产生的热稳定性肠毒素，用于治疗成人的便秘性肠易激综合征(IBS-C)和慢性特发性便秘(CIC)。这些环肽经过数百万年的进化，不仅具有高度的结构刚性，而且具有结合包括细胞受体、离子通道蛋白等大量靶标的能力。但是这些进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法，其特征在于包括以下步骤：/n1)选取两种具有富含二硫键环肽分子骨架的模板，在碱性条件下于水相中发生氧化反应生成两种氧化产物，合成多肽；/n2)选取步骤1)合成的多肽骨架b为模板，将该多肽模板融合表达于噬菌体表面，构建噬菌体多元环肽库。/n

【技术特征摘要】
1.基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)选取两种具有富含二硫键环肽分子骨架的模板，在碱性条件下于水相中发生氧化反应生成两种氧化产物，合成多肽；
2)选取步骤1)合成的多肽骨架b为模板，将该多肽模板融合表达于噬菌体表面，构建噬菌体多元环肽库。


2.如权利要求1所述基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法，其特征在于在步骤1)中，所述模板为：
模板a：Y—aan—Y
其中，两个Y代表CPPC，aa代表任意一个氨基酸，n代表氨基酸的数目；
模板b：Y—aan—Y—aam—Y—aar—Y
其中，四个Y中有两个是CPPC，另两个Y是C，aa代表任意一个氨基酸，n、m、r代表氨基酸的数目。


3.如权利要求1所述基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法，其特征在于在步骤1)中，所述合成的多肽包括但不限于：
H-WGCPPCGGKGGCPPCGW-NH2(peptide1)
H-WGCPPCSGGKGGSKGGSKGGSKGGCPPCGW-NH2(peptide2)
H-WGCPPCGGKGGCPPCGGKGGCGGKGGCGW-NH2(peptide3)
H-WGCGGKGGCPPCGGKGGCPPCGGKGGCGW-NH2(peptide4)
H-WGCPPCGGKGGCGGKGGCGWKGGCPPCGW-NH2(peptide5)
H-WGCPPCGGKGGCGGKGGCPPCGWKGGCGW-NH2(peptide6)。


4.如权利要求2所述基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法，其特征在于所述氨基酸为L-型氨基酸；
所述多肽中的CPPC和C的位置可以随意改变，多肽模板中的随意氨基酸的个数也可以根据需要减少或增加，改变后二硫键精准配对仍然适用。


5.如权利要求1所述基于二硫键精准配对构建噬菌体展示多元环肽库的方法，其特征在于在步骤2)中，所述融合表达于噬菌体表面的多肽序列为：
CPPCXXXXXCXXXXXCXXXXXCPPC，由N端到C端，X表...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴川六，路帅敏，吴亚培，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35