一种与干细胞增殖相关的Abca4基因及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种与干细胞增殖相关的Abca4基因及其应用。一种Abca4基因、Abca4基因编码的蛋白质、或含有Abca4基因重组载体在制备用于干细胞体外培养扩增的相关试剂中的应用。干预Abca4表达为主的相关试剂可应用于提高干细胞体外培养扩增的效率。本发明专利技术首次发现并证实Abca4基因具有影响细胞增殖的功能，抑制Abca4基因或蛋白质表达可以明显增加干细胞的增殖效率，为体外培养扩增细胞提供了新的有效方法。本发明专利技术提供的Abca4抑制剂可用于制备促进体外培养细胞效率的相关试剂，可以快速提供足够数量的细胞，对于干细胞药物和疗法在多个领域应用具有明显促进作用，应用前景巨大。

【技术实现步骤摘要】
一种与干细胞增殖相关的Abca4基因及其应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种与干细胞增殖相关的Abca4基因及其应用。
技术介绍
随着全球范围内干细胞治疗技术和产业化快速发展，干细胞相关研究已经成为生命科学领域的重要方向之一，受到国内外的广泛关注。干细胞的应用范围也在迅速扩大，通过将干细胞进行体外培养、定向诱导，培植出全新的组织或器官，将成为移植器官的新来源，使许多患有严重疾病的患者能够绝处逢生。干细胞几乎在全身所有疾病均有应用前景，尤其在心肌梗死、肝硬化、脊髓损伤、多发性硬化、中风、肌萎缩侧索硬化症、老年痴呆症、间质性肺病、克罗恩病、骨关节炎、股骨头坏死、椎间盘退化、系统性红斑狼疮和卵巢早衰等缺乏有效治疗措施的严重疾病表现出潜在治疗价值。干细胞药物和疗法已经在多个领域展现出了巨大的前景，同时市场需求巨大，随着干细胞基础研究的发展和技术的不断进步，干细胞产业有着巨大的发展空间并将迎来快速发展期，干细胞技术的研究必将给生物医学领域带来深刻的变革。经过基因工程修饰后的干细胞可表达各种细胞营养因子基因，并使其能够分泌营养因子，移植后对于促进移植的干细胞和受体组织内损伤细胞的存活都具有非常重要意义。间充质干细胞不仅具有多向分化潜能，而且来源广泛、取材方便、低免疫性、可进行自体移植，使其具有很大的应用前景。许多研究已经发现间充质干细胞移植后可以向病变部位的组织渗透融合、替代损伤细胞，同时与宿主细胞间的相互作用可导致一些细胞因子的产生，这些细胞因子对神经功能的恢复发挥积极的作用。干细胞作为种子在组织工程可吸收支架方面也具有广泛的应用价值，随着新材料和新技术的出现，目前可以制造精确的仿生三维组织结构支架。无论干细胞在哪些领域应用，都离不开体外培养扩增，快速高效获得足够治疗或研究所需细胞数量是干细胞研究与应用的关键。另外许多干细胞经过长期传代会丢失干性，使细胞出现分化迹象，严重影响干细胞继续扩增传代。因此，开发和研究增加干细胞体外扩增效率的新方法具有极其重要意义和广泛应用前景。
技术实现思路
鉴于现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种与干细胞增殖相关的Abca4基因及其应用。本专利技术提供了通过干预Abca4表达增加干细胞体外扩增效能的方法应用，利用此方法可以高效、快速获取足够数量的体外培养扩增的干细胞，用于干细胞相关治疗或研究。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。一种Abca4基因、Abca4基因编码的蛋白质、或含有Abca4基因重组载体在制备用于干细胞体外培养扩增的相关试剂中的应用。所述的应用为增加干细胞体外扩增效能方面的应用。通过干预Abca4表达增加干细胞体外扩增效能的方法应用，利用此方法可以高效、快速获取足够数量的体外培养扩增的干细胞，用于制备干细胞相关治疗药物中的应用。所述干细胞体外培养扩增的相关试剂包括干预Abca4基因mRNA的试剂，和/或干预Abca4蛋白表达的试剂。所述干细胞包括人类组织来源的原代干细胞，各种动物组织来源的原代干细胞，各种细胞系。进一步地，干预Abca4表达为主的相关试剂可应用于提高干细胞体外培养扩增的效率。更进一步，所述干预Abca4表达的相关试剂可基于使用已知方法来发挥其功能：干预基因mRNA水平表达，或干预蛋白水平表达，或以Abca4为靶向的特异性抑制剂，或以Abca4为靶向的特异性抗体，或以Abca4为靶向的非编码RNA(包括LncRNA、miRNA、circRNA、piRNA等等)，或以Abca4为靶向的转绿调控因子，或Abca4上游调控分子等方式实施分析。所述以Abca4为靶向的特异性抑制剂不受限制，只要所述抑制剂能够抑制Abca4或涉及Abca4上游或下游途径的物质的表达或活性，且对于干细胞体外培养扩增有效的分子即可。进一步，所述抑制剂包括针对Abca4基因表达的干扰RNA，或者负调控非编码RNA(包括LncRNA、miRNA、circRNA、piRNA等等)、负调控型的转录调控因子、或抑制型靶向分子化合物，抑制型靶向分子化合物的实例如针对Abca4蛋白的抗体。所述抑制剂可以单独使用，或与其它细胞因子以各种组合使用，以及与其它细胞培养液一起联合使用。所述抑制剂的剂量不受限制，只要获得期望的细胞增殖效果即可，可以依据干细胞种类和需要扩增的细胞数量等来恰当的确定。所述Abca4基因、Abca4基因编码的蛋白质、或重组载体在制备干细胞相关治疗药物中的应用。本专利技术的“Abca4基因”序列可以在NCBI数据库中进行查询。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下。本专利技术首次发现并证实Abca4基因具有影响细胞增殖的功能，抑制Abca4基因或蛋白质表达可以明显增加干细胞的增殖效率，为体外培养扩增细胞提供了新的有效方法。本专利技术提供的Abca4抑制剂可用于制备促进体外培养细胞效率的相关试剂，可以快速提供足够数量的细胞，对于干细胞药物和疗法在多个领域应用具有明显促进作用，应用前景巨大。附图说明图1是体外培养E12、E15、E18和E21羊水间充质干细胞形态及分化情况。图2是体外培养E12、E15、E18和E21羊水间充质干细胞表面标志物检测情况。图3是CCK8和BrdU方法检测体外培养E12、E15、E18和E21羊水间充质干细胞增殖变化情况。图4是BrdU方法检测体外培养E12和E15羊水间充质干细胞的流式细胞图。图5是BrdU方法检测体外培养E18和E21羊水间充质干细胞的流式细胞图。图6是体外培养E12-E21羊水间充质干细胞的全转录组测序结果的PCA和聚类树图。图7是体外培养E12-E21羊水间充质干细胞的全转录组测序结果的mRNA和microRNA火山图。图8是体外培养E12-E21羊水间充质干细胞的全转录组测序结果。图9是体外培养E12-E21羊水间充质干细胞的全转录组测序结果。图10是定量PCR方法检测Abca4及其上游调控分子miR-351-3p的表达情况。图11是建立高表达Abca4稳转细胞及其转染后Abca4蛋白质表达情况。图12是Abca4转染后Abca4mRNA表达及其对细胞增殖的影响情况。图13是Abca4RNA干扰(低表达)及其对Abca4蛋白质表达影响的电泳图。图14是Abca4RNA干扰(低表达)对Abca4蛋白质表达影响定量分析及其对细胞增殖的影响情况。图15是转染miR-351-3pmimic后miR-351-3p表达改变及其对细胞增殖影响。图16是转染miR-351-3pmimic后其靶基因Abca4表达变化情况。图17是转染miR-351-3pinhibitor后对细胞增殖影响及其靶基因Abca4表达变化的电泳图。图18是转染miR-351-3pinhibitor后Abca4表达变化定量分析柱状图及分别高表达miR-351-3p和Abca4对细胞增殖影响的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Abca4基因、Abca4基因编码的蛋白质、和/或含有Abca4基因重组载体在制备用于干细胞体外培养扩增的相关试剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种Abca4基因、Abca4基因编码的蛋白质、和/或含有Abca4基因重组载体在制备用于干细胞体外培养扩增的相关试剂中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的应用为增加干细胞体外扩增效能。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述干细胞体外培养扩增的相关试剂包括干预Abca4基因mRNA的试剂，和/或干预Abca4蛋白表达的试剂。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述干细胞包括人类组织来源的原代干细胞，各种动物组织来源的原代干细胞，各种细胞系。


5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，通过干预Abca4表达增加干细胞体外扩增效能的方法应用，利用此方法可以高效、快速获取足够数...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁正伟，黄捷婷，顾卉，魏晓伟，马巍，刘丹，罗文婷，
申请(专利权)人：中国医科大学附属盛京医院，
类型：发明
国别省市：辽宁;21