IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法技术

本发明专利技术公开了IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：S1：样品垫的制备；S2：结合垫的制备；S3：NC膜的制备；S4：装配。本发明专利技术利用荧光免疫层析技术，采用双抗体夹心法原理进行检测，在层析过程中，样本中的CIV/LN/PIIINP抗原与结合垫上的荧光微球标记的CIV/LN/PIIINP单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下沿着硝酸纤维素膜向前移行至检测区域，被硝酸纤维素膜上包被的另一株CIV/LN/PIIINP单克隆单克隆抗体捕获并形成复合物沉积在T区，在激发光源的作用下，荧光物质发射特定波长的荧光信号，荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及设定的定标曲线自动转化为定量数值。

【技术实现步骤摘要】
IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法
本专利技术涉及医药诊断
，尤其涉及IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法。
技术介绍
肝纤维化是一个病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生。任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化的过程，如果损伤因素长期不能去除，纤维化的过程长期持续就会发展成肝硬化。IV型胶原/层粘连蛋白/III型前胶原氨基端肽主要用来检查诊断慢性肝病患者病情发展状况和治疗效果，是衡量炎症活动度、纤维化程度的重要依据。III型前胶原氨基端肽反映肝内III型胶原合成，血清含量与肝纤程度一致，并与血清γ－球蛋白水平明显相关。PCIII与肝纤维化形成的活动程度密切相关，但无特异性，其它器官纤维化时，PCIII也升高。持续PCIII升高的慢活肝，提示病情可能会恶化并向肝硬变形成发展，而PCIII降至正常可预示病情缓解，说明PCIII不仅在肝纤维化早期诊断上有价值，在慢性肝病的预后判断上也有意义。IV型胶原为构成基底膜主要成份本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：样品垫的制备：/nS101：样品垫处理液的配制：按照标准配方称取三羟甲基氨基甲烷 11-13g、盐酸 5-6mL、聚乙烯吡咯烷酮 9-11g和S9 9-11g加入配制桶中，使其匀速搅拌进行充分溶解后，再加入盐酸匀速搅拌进行充分混匀，然后在配置桶的内部进行加入750-850mL的体外诊断试剂用纯化水，利用体外诊断试剂用纯化水定容至1000mL，得到pH在8.0±0.1范围内的样品垫处理液；/nS102:玻璃纤维素膜（SB08）的处理:将S101所述的样品垫处理液倒入浸泡盒中，将整张玻...

【技术特征摘要】
1.IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：样品垫的制备：
S101：样品垫处理液的配制：按照标准配方称取三羟甲基氨基甲烷11-13g、盐酸5-6mL、聚乙烯吡咯烷酮9-11g和S99-11g加入配制桶中，使其匀速搅拌进行充分溶解后，再加入盐酸匀速搅拌进行充分混匀，然后在配置桶的内部进行加入750-850mL的体外诊断试剂用纯化水，利用体外诊断试剂用纯化水定容至1000mL，得到pH在8.0±0.1范围内的样品垫处理液；
S102:玻璃纤维素膜（SB08）的处理:将S101所述的样品垫处理液倒入浸泡盒中，将整张玻璃纤维素膜浸泡在样品垫处理液中25-35min，浸泡过程中使用玻璃棒进行赶走气泡，然后将浸泡过的玻璃纤维素膜放入干燥间内进行干燥4-6h，得到样品垫，样品垫利用裁切刀进行裁切成1.5cm×30.0cm规格的小样品垫，然后将小样品垫装入加干燥剂的铝箔袋中进行封口，并在铝箔袋上进行贴指示标签待用；
S2：结合垫的制备：
S201：抗体偶连荧光微球的制备：
S2011：取1%微球90-110ul，进行加入MESbuffer850-950ul，得到混合液A,混合液A然后利用冰浴中超声处理，冰浴中超声处理的超声能量为200-400W，冰浴中超声处理的超声时间为1-3S，然后进行间歇为2-4S，冰浴中超声处理的总时长为2-3min，经过超声处理后的混合液A进行离心处理，离心处理的转速设置为11000-13000rpm，离心处理的温度设置为3-5℃，离心处理的离心时间设置为9-11min，得到离心液A；
S2012:将S2011中离心液A进行去除上清液，然后进行沉淀处理并加MESbuffer120-130ul、抗体0.1mg--1mg和纯化水补齐液体至1ml，得到混合液B，混合液B然后利用冰浴中超声处理，冰浴中超声处理的超声能量为200-400W，冰浴中超声处理的超声时间为1-3S，然后进行间歇为2-4S，冰浴中超声处理的总时长为2-3min，根据羧基的含量计算使用量进行加入EDC，将加入EDC的混合液B进行通入混匀器上进行反应1.5-2.5h，经过超声处理后的混合液B进行离心处理，离心处理的转速设置为11000-13000rpm，离心处理的温度设置为3-5℃，离心处理的离心时间设置为9-11min，得到离心液B；
S2013：将S2012中离心液B进行去除上清液，然后进行沉淀处理并加MES0.5-1.5ml，得打混合液C，混合液C然后利用冰浴中超声处理，冰浴中超声处理的超声能量为200-400W，冰浴中超声处理的超声时间为1-3S，然后进行间歇为2-4S，冰浴中超声处理的总时长为2-3min，经过超声处理后的混合液C进行离心处理，离心处理的转速设置为11000-13000rpm，离心处理的温度设置为3-5℃，离心处理的离心时间设置为9-11min，得到离心液C；
S2014：将S2013中离心液C进行去除上清液，然后进行沉淀处理并加MES0.5-1.5ml，得打混合液D，混合液D然后利用冰浴中超声处理，冰浴中超声处理的超声能量为200-400W，冰浴中超声处理的超声时间为1-3S，然后进行间歇为2-4S，冰浴中超声处理的总时长为2-3min，超声处理后的混合液D进行加入乙醇胺9-11ul/ml，加入乙醇胺的混合液D进行通入混匀器上进行反应25-35min，经过均匀处理后的混合液D进行离心处理，离心处理的转速设置为11000-13000rpm，离心处理的温度设置为3-5℃，离心处理的离心时间设置为9-11min，得到离心液D；
S2015：将S2014中的离心液D进行去除上清液，然后进行沉淀处理并加封闭液0.4-0.6ml，得到混合液E然后利用冰浴中超声处理，冰浴中超...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁大丰，
申请(专利权)人：河北国高生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13