一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用。本发明专利技术中加入玫瑰发酵液，所述的玫瑰发酵液采用特定的方法制备而成，本发明专利技术的玫瑰发酵液黄酮、多糖含量均较高，并且能够调节皮肤头皮菌群，同时也含有色氨酸，能够起到舒缓抗敏皮肤的作用；本发明专利技术的脂质体通过添加复合磷脂提高了其包封稳定性，减少溢出，充分保护玫瑰发酵液，添加神经酰胺等原料可以增加皮肤的相容性，提高脂质体的透皮吸收性，本发明专利技术的各原料起到协同增效的作用，充分发挥玫瑰发酵液保湿抗衰功效，通过玫瑰发酵液与各原料的协同作用，起到促渗和重塑皮肤屏障作用；本发明专利技术所述的脂质体的制备方法简单，生产成本低，可以大规模生产。

Preparation and application of liposome containing rose fermentation broth

【技术实现步骤摘要】
一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用
本专利技术属于化妆品
，具体涉及一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用。
技术介绍
玫瑰不仅具有观赏价值，也具有一定的营养和药用价值，其中含有许多对人体有益的活性成分(如多糖、黄酮类物质、芳香油等)。在玫瑰活性物提取中常采用的蒸馏法和浸提法不仅所得的活性物有限而且会产生大量废弃物，所以采用更环保的发酵工艺可以充分提取玫瑰中的有效成分。CN109806201A公开了通过玫瑰发酵工艺可以显著提高美白、抗皱及保湿作用。但玫瑰发酵液中多糖等成分存在稳定性差、生物利用度低、易被降解及细胞穿透力差等缺点，限制了其功效的发挥。皮肤角质层脂质是由神经酰胺(40-50％)、胆固醇(25％)、游离脂肪酸(25％)和胆固醇硫酸酯(5％)和少量磷脂组成的复杂混合物。研究发现，随着年龄的增加，皮肤角质层中的神经酰胺、胆固醇、脂肪酸等成分减少。皮肤屏障减弱、受损以及皮肤疾病的产生与这些成分含量减少息息相关。脂质体由双亲性分子组成，与皮肤角质有很好的相容性，亲肤性良好。而且在化妆品中添加脂质体能够修复受损肌肤。而且脂质体稳定性好，可以避免光热等对活性物的影响；其次安全性高，不易引发皮肤刺激性。CN110960454A公开了怀菊花提取物脂质体能够明显提高怀菊花提取物在皮肤中的贮存量，提高其抗衰老功效。传统脂质体的主要成分包括磷脂和胆固醇。神经酰胺脂质体是一种由神经酰胺、胆固醇、油酸和氢化磷脂组成的类皮肤膜。不仅可以充分发挥神经酰胺的保湿、维持皮肤屏障、抗衰老等功能，而且克服了因其疏水性强、透皮吸收差以及易受环境的缺陷。同时研究发现，由两种具有不同相变温度的磷脂组成的脂质体被证明具有较高的脂泡稳定性。因此，可以通过改变磷脂的组成可以有效地控制其屏障功能。鉴于以上原因，特提出本专利技术。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的以上问题，本专利技术提供了一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用，本专利技术制备的脂质体稳定性好，皮肤相容性好，通过各原料的协同作用，提高了透皮的吸收性，具有保湿抗衰老的作用。本专利技术的第一目的，提供了一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，包括如下步骤：(a)称取复合磷脂100-600份、胆固醇50-300份和神经酰胺30-100份到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解；(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜；(c)将10-20份玫瑰发酵液和100-200份pH值为7.4的磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体。进一步的，步骤(a)中复合磷脂为大豆磷脂和氢化大豆磷脂的混合物，优选的，大豆磷脂和氢化大豆磷脂的质量比为10:1-5:1。进一步的，步骤(b)中蒸发温度为55-65℃，蒸发时间为1.5-2.5h，转速为50-80rpm。进一步的，步骤(c)中水化时间为2-4h，超声时间为10-30min。本专利技术的大豆磷脂、胆固醇选自上海艾韦特医药科技有限公司。进一步的，所述的玫瑰发酵液的制备方法包括如下步骤：(1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过筛，并加水配成混合液，灭菌后得到玫瑰发酵基质；(2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到固体活化培养基表面，于37℃恒温倒置培养15～20h，得到活化菌株；(3)混合发酵：将所述活化菌株扩大培养后进行混合得到混合菌液，将所述混合菌液以1.5％～2.5％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40～45℃摇床发酵培养45～50h，得到初始发酵液；(4)发酵后处理：对所述初始发酵液依次进行灭菌、菌体破碎和过滤后，得到所述玫瑰发酵液。进一步的，步骤(1)中，所述混合液的质量浓度为10％～15％。进一步的，步骤(1)中，筛网的目数为100～200目，灭菌为将混合液在121℃下灭菌15min，或对混合液进行软包装后，用水作为介质，在600MPa，25℃下进行超高压灭菌。超高压灭菌的温度较低，可保护多酚、黄酮类物质，但超高压灭菌成本高，可根据实际情况选择灭菌方式。菌种活化的目的是使保藏菌种的活性得以恢复，同时恢复其优良的生产性能。菌种选自双歧杆菌、芽孢杆菌、乳杆菌、酿酒酵母中的至少一种。进一步的，步骤(2)中，所述菌种选自青春双歧杆菌CICC6175、纳豆芽孢杆菌CICC10262、保加利亚乳杆菌CICC20271、酿酒酵母菌CICC1252中的至少一种。进一步的，所述菌种为纳豆芽孢杆菌CICC10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC1252的混合菌种，步骤(3)中扩大培养后的所述纳豆芽孢杆菌CICC10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC1252种子液的质量比例为1:(2～5):(2～5)。申请人研究发现，当发酵菌种满足上述配比时，得到的玫瑰发酵液中含有较多的黄酮和糖类物质。进一步的，菌种活化方式为：用灭菌竹签蘸取少量的菌种，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置培养15～20h，得到活化菌株。由于双歧杆菌和乳杆菌需要无氧条件活化，芽孢杆菌和酿酒酵母需要有氧活化，可以将双歧杆菌、乳杆菌、芽孢杆菌和酿酒酵母分别接种于不同的固体活化培养基，然后在适宜的条件下培养，待混合发酵步骤将上述活化菌株加入玫瑰发酵基质中即可。进一步的，步骤(2)中，所述活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-801g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。不同菌种的扩大培养方法如下：[1]对于酿酒酵母菌CICC1252，固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到酿酒酵母种子液。[2]对于纳豆芽孢杆菌CICC10262，固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到纳豆芽孢杆菌种子液。[3]对于青春双歧杆菌CICC6175，由于在无氧条件进行活化，需要对其进行耐氧训练。具体为固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(a)称取复合磷脂100-600份、胆固醇50-300份和神经酰胺30-100份到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解；/n(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜；/n(c)将10-20份玫瑰发酵液和100-200份pH值为7.4的磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体。/n

【技术特征摘要】
1.一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)称取复合磷脂100-600份、胆固醇50-300份和神经酰胺30-100份到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解；
(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜；
(c)将10-20份玫瑰发酵液和100-200份pH值为7.4的磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体。


2.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(a)中复合磷脂为大豆磷脂和氢化大豆磷脂的混合物，优选的，大豆磷脂和氢化大豆磷脂的质量比为10:1-5:1。


3.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(b)中蒸发温度为55-65℃，蒸发时间为1.5-2.5h，转速为50-80rpm。


4.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(c)中水化时间为2-4h，超声时间为10-30min。


5.根据权利要求1-4任意一项所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，所述的玫瑰发酵液的制备方法包括如下步骤：
(1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过筛，并加水配成混合液，灭菌后得到玫瑰发酵基质；
(2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到固体活化培养基表面，于37℃恒温倒置培养15～20h，得到活化菌株；
(3)混合发酵：将所述活化菌株扩大培养后进行混合得到混合菌液，将所述混合菌液以1.5％～2.5％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40～45℃摇床发酵培养45～50h，得到初始发酵液；
(4)发酵后处理：对所述初始发酵液依次进行灭菌、菌体破碎和过...

【专利技术属性】
技术研发人员：张启清，余海励，盛俊娇，孙绪友，
申请(专利权)人：上海怡宝化妆品集团有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31