一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，包括以下步骤：抽取移植用脂肪颗粒,将获得的脂肪颗粒放入离心管中离心后，将上层的油脂回收备用，中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，得到破碎脂肪；将第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中；将油脂加入到脂肪组织中，混匀过滤，将滤液装入第四注射器内，保持注射器内负压，离心后，收取中间层产物，即得富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质；本发明专利技术操作过程简便、成本低廉，且制得的脂肪移植材料相比原有脂肪体积大大浓缩。

【技术实现步骤摘要】
一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法[
]本专利技术属于脂肪移植
，具体地说是一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法。[
技术介绍
]由于外伤、感染、肿瘤切除或先天性缺陷原因等造成的体表组织器官凹陷畸形，除了影响容貌之外，还会不同程度的影响患者的心理健康及社会交际活动。自体脂肪移植填充是目前治疗体表软组织凹陷或轮廓不对称的主要方法之一。其主要缺点是移植后容易吸收，吸收率占20％～90％不等，大多需要接受反复数次注射才能达到较为满意的效果。脂肪干细胞和基质血管片段细胞在干细胞治疗领域的应用越发广泛，尤其是SVF的应用已在众多国家展开临床试验，其在提高脂肪移植后保存率以及创面修复方面优势明显：脂肪组织新鲜分离得到的SVFs中含有大量的、具有生物学活性的自体ASCs；来源于自身脂肪组织，无免疫排斥反应；人体内储量丰富；无需体外培养，降低细菌污染的风险。然而现有技术在获取脂肪移植材料的过程较为复杂，成本较高，对于脂肪移植材料的提取不能达到很好的效果，尤其是不能够去除成熟的脂肪细胞及油脂。因此，若能提供一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质，将具有非常重要的意义。[
技术实现思路
]本专利技术的目的就是要解决上述的不足而提供一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，不仅操作过程简便、成本低廉，而且制得的脂肪移植材料相比原有脂肪体积大大浓缩，为脂肪移植填充提供了良好的材料。为实现上述目的设计一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，包括以下步骤:1)用带螺纹注射器抽取移植用脂肪颗粒,在抽取的脂肪颗粒中添加肝素钠，上、下颠倒带螺纹注射器将其混匀；2)将获得的脂肪颗粒放入离心管中,以1000-1200g/min速度离心4-5min，离心后，脂肪颗粒分为上、中、下三层，将上层的油脂回收备用，底层的液体弃去，将中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；3)将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，推动带螺纹注射器的活塞，将脂肪颗粒通过脂肪破碎器推注至第一注射器中，反复推注，得到破碎脂肪；4)将装有破碎脂肪的第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中，推注速度为10-20ml/s，如此连续往返推注2-3min；5)将步骤2)回收的上层油脂加入到步骤4)经反复推注过的脂肪组织中，混匀后过滤，将滤液装入密封的第四注射器内，保持注射器内负压，轻微震荡30-40s后，将震荡后的混合物以2500-2800g/min的速度离心6-8min；6)离心后，混合液分为上、中、下三层，上层为油脂层，下层为肿胀液层，收取中间层产物，即得富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质。进一步地，步骤5)中，所述过滤为40-80目数筛网过滤，且筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织。进一步地，步骤6)中，收取中间层产物后，加入等体积的生理盐水混匀，于6000-8000rpm条件下离心5～10min，弃去离心沉淀，收集上层产物，即为富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质。进一步地，步骤6)离心后，若混合液不分层或分层不明显，则重复步骤4)至步骤5)。本专利技术还提供了一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质，该脂肪移植材料由上述制备方法制备得到。本专利技术所述的制备方法制备得到的富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质在作为面部年轻化及软组织损伤修复的应用。本专利技术同现有技术相比，具有如下优点：(1)本专利技术在获取脂肪颗粒后，采取了离心的方式，在简单的操作流程下，致使脂肪颗粒先出现简单的分层后，随即去除脂肪颗粒中多余的膨胀液后，为后续的操作提供更为优质的脂肪颗粒；(2)本专利技术应用流体涡旋原理，将脂肪组织中绝大多数成熟脂肪细胞破碎，同时采用絮凝沉淀技术，将破碎脂肪细胞产生的油滴汇集并去除；(3)本专利技术采用的注射器在使用前均经过杀菌消毒，并放置于密闭袋中，保证了操作过程的严谨度；(4)本专利技术不仅操作过程简便、成本低廉，而且制得的脂肪移植材料比原有的脂肪体积浓缩了近10倍，为脂肪移植填充提供了良好的材料；(5)本专利技术移植后定植于局部的干细胞数量远远大于普通脂肪移植数量，作为干细胞疗法，远期疗效更佳，值得推广应用。[具体实施方式]下面结合具体实施例对本专利技术作以下进一步说明：实施例1本专利技术提供了一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，包括以下步骤：1)用带螺纹注射器抽取移植用脂肪颗粒,在抽取的脂肪颗粒中添加肝素钠，上、下颠倒带螺纹注射器将其混匀；2)将获得的脂肪颗粒放入离心管中,以1000g/min速度离心5min，离心后，脂肪颗粒分为上、中、下三层，将上层的油脂回收备用，底层的液体弃去，将中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；3)将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，推动带螺纹注射器的活塞，将脂肪颗粒通过脂肪破碎器推注至第一注射器中，反复推注，得到破碎脂肪；4)将装有破碎脂肪的第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中，推注速度为20ml/s，如此连续往返推注2min；5)将步骤2)回收的上层油脂加入到步骤4)经反复推注过的脂肪组织中，混匀后过滤，将滤液装入密封的第四注射器内，保持注射器内负压，轻微震荡30s后，将震荡后的混合物以2500g/min的速度离心6min；其中，过滤为60目数筛网过滤，且筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织；6)离心后，混合液分为上、中、下三层，上层为油脂层，下层为肿胀液层，收取中间层产物，即得富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质。实施例2本专利技术提供了一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，包括以下步骤：1)用带螺纹注射器抽取移植用脂肪颗粒,在抽取的脂肪颗粒中添加肝素钠，上、下颠倒带螺纹注射器将其混匀；2)将获得的脂肪颗粒放入离心管中,以1200g/min速度离心4min，离心后，脂肪颗粒分为上、中、下三层，将上层的油脂回收备用，底层的液体弃去，将中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；3)将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，推动带螺纹注射器的活塞，将脂肪颗粒通过脂肪破碎器推注至第一注射器中，反复推注，得到破碎脂肪；4)将装有破碎脂肪的第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中，推注速度为10ml/s，如此连续往返推注3min；5)将步骤2)回收的上层油脂加入到步骤4)经反复推注过的脂肪组织中，混匀后过滤，将滤液装入密封的第四注射器内，保持注射器内负压，轻微震荡40s后，将震荡后的混合物以2600g/min的速度离心7min；其中，过滤为40目数筛网过滤，且筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)用带螺纹注射器抽取移植用脂肪颗粒,在抽取的脂肪颗粒中添加肝素钠，上、下颠倒带螺纹注射器将其混匀；/n2)将获得的脂肪颗粒放入离心管中,以1000-1200g/min速度离心4-5min，离心后，脂肪颗粒分为上、中、下三层，将上层的油脂回收备用，底层的液体弃去，将中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；/n3)将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，推动带螺纹注射器的活塞，将脂肪颗粒通过脂肪破碎器推注至第一注射器中，反复推注，得到破碎脂肪；/n4)将装有破碎脂肪的第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中，推注速度为10-20ml/s，如此连续往返推注2-3min；/n5)将步骤2)回收的上层油脂加入到步骤4)经反复推注过的脂肪组织中，混匀后过滤，将滤液装入密封的第四注射器内，保持注射器内负压，轻微震荡30-40s后，将震荡后的混合物以2500-2800g/min的速度离心6-8min；/n6)离心后，混合液分为上、中、下三层，上层为油脂层，下层为肿胀液层，收取中间层产物，即得富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质。/n...

【技术特征摘要】
1.一种富集高浓度自体脂肪SVF及其细胞外基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用带螺纹注射器抽取移植用脂肪颗粒,在抽取的脂肪颗粒中添加肝素钠，上、下颠倒带螺纹注射器将其混匀；
2)将获得的脂肪颗粒放入离心管中,以1000-1200g/min速度离心4-5min，离心后，脂肪颗粒分为上、中、下三层，将上层的油脂回收备用，底层的液体弃去，将中间层的脂肪组织转移至第一注射器中；
3)将装有脂肪组织的第一注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，推动带螺纹注射器的活塞，将脂肪颗粒通过脂肪破碎器推注至第一注射器中，反复推注，得到破碎脂肪；
4)将装有破碎脂肪的第二注射器拧下，通过鲁尔接头与第三注射器的注射口密封对接，将破碎脂肪通过鲁尔接头推注至第三注射器中，推注速度为10-20ml/s，如此连续往返推注2-3min；
5)将步骤2)回收的上层油脂加入到步骤4)经反复推注过的脂肪组织中，混匀后过滤，将滤液装入密封的第四注射器内，保持注射器内负压，轻微震荡30-40s后，将震荡后的混合物以2500-2800g/min的速度离心6-8min...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔爱军，
申请(专利权)人：乔爱军，
类型：发明
国别省市：北京;11