伴随蛋白/肽及其在提高蛋白质组实验效率中的应用制造技术

本发明专利技术属于蛋白质组学技术领域，具体涉及伴随蛋白/肽，包括保守序列肽、保守序列蛋白、短序列肽和短序列蛋白中的一种或多种，保守序列肽为极亲水性多肽或极疏水性多肽，保守序列蛋白是多个保守序列肽连接而成的蛋白，短序列肽的氨基酸个数为Q，Q大于等于1且小于4，短序列蛋白为多个短序列肽连接而成蛋白。本发明专利技术还提供了伴随蛋白/肽在提高蛋白质组实验效率中的应用。本发明专利技术的伴随蛋白/肽可以减少蛋白质组实验中各步骤的样本的损失，同时液质联用质谱信号的采集数据不受到伴随蛋白/肽的影响；此外，本发明专利技术的伴随蛋白/肽可以兼容目前所有的蛋白质组实验方法和应用，从而有效提高了蛋白质组实验效率。

Chaperone protein / peptide and its application in improving the efficiency of proteome experiment

【技术实现步骤摘要】
伴随蛋白/肽及其在提高蛋白质组实验效率中的应用
本专利技术属于蛋白质组学
，具体涉及伴随蛋白/肽及其在提高蛋白质组实验效率中的应用。
技术介绍
蛋白质组学是以蛋白质为基本研究对象，用系统生物学的方法，研究生物体的细胞、组织的组成和变化规律的科学。经过二十来年的发展，基于质谱的蛋白质组学已经大规模地应用于生物研究领域，并开始进入临床研究领域。由于临床样本的珍贵性，以及生物研究的特殊需求，少量(痕量)样本的蛋白质组学研究如单细胞蛋白组学等等，在成为研究热点的同时，也面临较大的技术挑战。基于质谱的蛋白质组实验方法中最常用的是自下而上的(bottom-up)蛋白质组学，其实验方法中涉及多步样本的前处理，来提取用于分析的多肽。当样本量偏少时，不仅蛋白的提取难度增大，各步骤的损失也变得显著，因此往往难以获得足够质量的多肽用于分析。目前，大多数样本制备方法是根据减小反应体积、减少转移步骤的思路来尽可能地降低损失，如JeroenKrijgsveld将蛋白富集在磁珠表面、进行蛋白质各项反应的SP3方法(Ultrasensitiveproteomeanalysisusingparamagneticbeadtechnology，MolecularSystemBiology，2014，10:757)；浙江大学方群教授研究团队等通过微流控系统处理皮升级别的试剂，在液滴内提取蛋白质的方法(Nanoliter-ScaleOil-Air-DropletChip-BasedSingleCellProteomicAnalysis，AnalyticalChemistry，2018，90，8，5430–5438)；NikolaiSlavov通过兼容和优化自动化样本制备系统，结合使用多肽体外标记(tandemmasstag)技术(SCoPE-MS:massspectrometryofsinglemammaliancellsquantifiesproteomeheterogeneityduringcelldifferentiation，GenomeBiology，2018，19，161)，通过减少人工操作步骤来降低干扰，减轻损失。但是，这些方法依然存在技术变量多、仪器设备需求门槛高、依赖操作者经验等问题，不适用于大多数实验室进行相关的课题研究以及多元化的生物应用。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供了伴随蛋白/肽，目的是为了解决现有改善蛋白质组实验里难以获得足够质量的多肽用于分析的方法中，依然存在技术变量多、仪器设备需求门槛高、依赖操作者经验等问题，不适用于大多数实验室进行相关的课题研究以及多元化的生物应用的技术问题。本专利技术还提供了伴随蛋白/肽在提高蛋白质组实验效率中的应用。本专利技术提供的伴随蛋白/肽，具体技术方案如下：提高蛋白质组实验效率的伴随蛋白/肽，包括保守序列肽、保守序列蛋白、短序列肽和短序列蛋白中的一种或多种，所述保守序列肽为极亲水性多肽或极疏水性多肽，所述保守序列蛋白是多个保守序列肽连接而成的蛋白，所述短序列肽的氨基酸个数为Q，所述Q大于等于1且小于4，所述短序列蛋白为多个短序列肽连接而成蛋白。在某些实施方式中，所述保守序列肽的结构为(A)x(B)y(C)z···(α)β，其中A，B，C，···，α表示为任一种氨基酸，且A，B，C，···，α的亲疏水性质相同亲，所述x，y，z，···，β表示个数，所述x，y，z，···，β均为任一个大于等于0的整数。在某些实施方式中，所述保守序列蛋白的结构为<seq1>(γ)x<seq2>(γ)y···<seqN>(γ)β，其中<seq1>，<seq2>，···，<seqN>表示任一个保守序列肽，γ为任一个作为酶解位点的氨基酸，x，y，z，···，β表示个数，x，y，z，···，β均为任一个大于等于0的整数，所述x，y，z，···，β的总和大于等于2。在某些实施方式中，所述短序列肽的结构为(δ)w(ε)x(θ)y(λ)z，其中，δ，ε，θ，λ表示任一种氨基酸，w，x，y，z表示个数，w，x，y，z均为任一个大于等于0的整数，所述w，x，y，z相加的总和为Q。在某些实施方式中，短序列蛋白的结构为<SEPⅠ>(γ)x<SEPⅡ>(γ)y···<SEPm>(γ)β，其中<SEPⅠ>，SEPⅡ>，···，<SEPm>表示任一个短序列肽，γ为任一个作为酶解位点的氨基酸，x，y，z，···，β表示个数，x，y，z，···，β均为任一个大于等于0的整数，所述x，y，z，···，β的总和大于等于2。本专利技术还提供了伴随蛋白/肽在提高蛋白质组实验效率的应用，将上述的伴随蛋白/肽与目标蛋白样品进行混合，对混合物进行串联质谱分析。在某些实施方式中，包括如下步骤：S1，设计和合成伴随蛋白/肽；S2，获取目标样本，将步骤S1中的伴随蛋白/肽与目标样本进行混合，获得样本混合物；S3，将步骤S2中的样本混合物进行蛋白提纯处理，获得待测蛋白；S4，对步骤S3中的待测蛋白联用液相质谱进行分析。本专利技术具有以下有益效果：1、伴随蛋白/肽可以减少蛋白质组实验中各步骤的损失。伴随蛋白/肽在样本制备时混入，在液相色谱上样后才被分离，反应体系实际上一直是伴随蛋白/肽和样本的混合物。因此，吸附和转移过程中造成的样本损失被大部分地分配到伴随蛋白/肽中去，这尤其适用于对于少量样本的蛋白质组实验，减少了样本损失的风险、降低了操作难度。2、伴随蛋白/肽不影响液质联用质谱信号的采集。由于伴随蛋白/肽难以在实验中的液相色谱上保留，不会进入质谱、或者不在质谱信号的采集范围内，因此不会掺入到采集结果中，质谱结果即是拟分析的样本结果，因此不需要对数据做进一步处理，可靠性强。3、伴随蛋白/肽可以兼容目前所有的蛋白质组方法和应用。无论是实验体系(微流控体系、胶内反应体系等)还是技术方法(多肽体外标记、离子交换色谱等)都可以引入伴随蛋白/肽。由于伴随蛋白/肽一方面在不改变操作流程的同时减少了样本的损失，另一方面不会影响质谱结果，所以对提高样本回收率和增强反应效率有很大帮助，方法适用性广、易接受。附图说明图1是本专利技术伴随蛋白/肽在提高蛋白质组实验效率的应用流程图；图2是本专利技术保守序列肽\保守序列蛋白形态示意图；图3是本专利技术保守序列肽\保守序列蛋白的色谱峰图；图4是本专利技术保守序列肽\保守序列蛋白的质谱峰图；图5是本专利技术短序列肽\短序列蛋白形态示意图；图6是本专利技术短序列肽\短序列蛋白的色谱峰图；图7是本本专利技术短序列肽\短序列蛋白的质谱峰图；图8是实施例1中利用伴随蛋白/肽进行提高蛋白质组实验效率的测试的质谱图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图1-8，对本专利技术进一步详细说明。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.伴随蛋白/肽，其特征在于，包括保守序列肽、保守序列蛋白、短序列肽和短序列蛋白中的一种或多种，所述保守序列肽为极亲水性多肽或极疏水性多肽，所述保守序列蛋白是多个保守序列肽连接而成的蛋白，所述短序列肽的氨基酸个数为Q，所述Q大于等于1且小于4，所述短序列蛋白为多个短序列肽连接而成蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.伴随蛋白/肽，其特征在于，包括保守序列肽、保守序列蛋白、短序列肽和短序列蛋白中的一种或多种，所述保守序列肽为极亲水性多肽或极疏水性多肽，所述保守序列蛋白是多个保守序列肽连接而成的蛋白，所述短序列肽的氨基酸个数为Q，所述Q大于等于1且小于4，所述短序列蛋白为多个短序列肽连接而成蛋白。


2.根据权利要求1中所述的伴随蛋白/肽，其特征在于，所述保守序列肽的结构为(A)x(B)y(C)z···(α)β，其中A，B，C，···，α表示为任一种氨基酸，且A，B，C，···，α的亲疏水性质相同亲，所述x，y，z，···，β表示个数，所述x，y，z，···，β均为任一个大于等于0的整数。


3.根据权利要求2中所述的伴随蛋白/肽，其特征在于，所述保守序列蛋白的结构为<seq1>(γ)x<seq2>(γ)y···<seqN>(γ)β，其中<seq1>，<seq2>，···，<seqN>表示任一个保守序列肽，γ为任一个作为酶解位点的氨基酸，x，y，z，···，β表示个数，x，y，z，···，β均为任一个大于等于0的整数，所述x，y，z，···，β的总和大于等于2。


4.根据权利要求1中所述的伴随蛋白/肽，其特征在于，所述短序列肽的结构为(δ)w(ε)x...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭天南，梁潇，朱怡，
申请(专利权)人：西湖大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33