一种辅助全细胞转化合成L-天冬酰胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种辅助全细胞转化合成L‑天冬酰胺的方法，本发明专利技术利用Ⅲ类多聚磷酸激酶2构建了单酶转化AMP再生ATP的系统，并将其应用于L‑天冬酰胺的生物合成。将来自Deinococcus ficus的Ⅲ类PPK2在Escherichia coli Rosetta(DE3)中表达，酶活力为13.19U·mL

A method of assisting whole cell transformation to synthesize L-asparagine

【技术实现步骤摘要】
一种辅助全细胞转化合成L-天冬酰胺的方法
本专利技术涉及一种辅助全细胞转化合成L-天冬酰胺的方法，属于生物转化

技术介绍
L-天冬酰胺中文又称为2-氨基-3-氨基甲酰丙酸。为白色的斜方晶系晶体或结晶性粉末，略带甜味，熔点约234℃。溶于水，几乎不溶于乙醇和乙醚，水溶液呈酸性。遇碱会水解成天冬氨酸。加热其水溶液容易分解。天冬氨酸在食品、医疗、化工以及生物方面都有所应用天冬酰胺的制备方法有直接提取法、化学合成法和生物合成法。直接提取法主要是以白羽扇豆为主，经过发芽、成浆、加热等处理流程后，在pH不大于6的条件下，经过硅藻土过滤、离心，获得第一步粗品。然后再经过浓缩、结晶获得最后的成品。直接提取法受原料质量的影响较大，工艺复杂不易控制且会造成严重的污染。化学合成法主要是通过氨水和L-天冬氨酸为原料进行酰胺化反应产生L-天冬酰胺，使L-天冬氨酸上的羟基由氨基替代。该方法副反应多，下游提取困难，污染严重。生物合成法主要是通过天冬酰胺合成酶催化谷氨酰胺的氨基转移，需要ATP参与。该方法生产过程和设备简单，生产效率高，但是由于转化过程中需要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辅助全细胞转化合成L-天冬酰胺的方法，其特征在于，所述方法是采用表达III类多聚磷酸激酶2的重组菌与表达L-天冬酰胺合成酶的重组菌耦合反应，催化L-天冬氨酸转化为L-天冬酰胺。/n

【技术特征摘要】
1.一种辅助全细胞转化合成L-天冬酰胺的方法，其特征在于，所述方法是采用表达III类多聚磷酸激酶2的重组菌与表达L-天冬酰胺合成酶的重组菌耦合反应，催化L-天冬氨酸转化为L-天冬酰胺。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表达III类多聚磷酸激酶2的重组菌为在大肠杆菌宿主中过表达核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的III类多聚磷酸激酶2。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的大肠杆菌宿主为EscherichiacoliRosetta(DE3)。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表达III类多聚磷酸激酶2的重组菌是以pET21a为表达载体。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表达L-天冬酰胺合成酶的重组菌为重组菌B.subtilisWB600/pMA5-LsaAS-A。


6.根据权利要求1所述的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗玮，许景龙，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32