一种交联酶的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种交联酶的制备方法，将多酚氧化酶与谷氨酰胺转氨酶溶液混合反应，获得粒径大小几微米至几十微米、活力大小不同的交联酶微粒，通过过滤、离心等方式可以将制备得到的交联谷氨酰胺转氨酶从溶液中分离出来，制得的交联酶用于蛋白质药物分子的聚乙二醇(PEG)修饰等。交联谷氨酰胺转氨酶在使用过程中，容易回收、可以反复利用、不会对产物分离造成负担，大大降低了生产成本。该方法交联过程绿色环保、温和高效、反应可控，而且不需要载体，也不需要对谷氨酰胺转氨酶纯化，还可以多种酶一起交联固定化。

A preparation method of cross linked enzyme

【技术实现步骤摘要】
一种交联酶的制备方法
本专利技术属于生物化工
，涉及一种交联酶的制备方法。
技术介绍
天然酶(例如谷氨酰胺转氨酶)一般是溶解于水溶液中催化反应，反应结束后必须通过加热、加酸碱等方法灭活酶，昂贵的酶无法回收、只能使用一次，是一种极大的浪费。谷氨酰胺转氨酶(E.C.2.3.2.13)催化多肽链上谷氨酰胺转氨残基(酰基供体)与各种伯氨基(酰基受体)化合物(包括赖氨酸残基)之间的酰基转移反应，形成异肽键，从而实现蛋白质交联或者修饰。谷氨酰胺转氨酶催化蛋白质交联，可以改善食品质地和功能，提高产品价值，因此已经被商业化用于食品加工过程。谷氨酰胺转氨酶的另一个重要应用就是修饰蛋白质，如蛋白质药物的聚乙二醇(PEG)修饰、糖基化修饰等，其作用是延长蛋白质药物的半衰期、降低蛋白质药物的免疫原性，从而提高蛋白质药物的临床疗效。谷氨酰胺转氨酶法修饰蛋白质药物的特点是修饰位点高度特异性、反应温和、对蛋白质药物没有损伤，因此是目前定点修饰蛋白质药物最受关注、最重要的方法。游离谷氨酰胺转氨酶修饰蛋白质药物反应结束后，灭活处理不但是一种浪费，同时也会造成蛋白质药物的变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种交联酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)将底物配制成蛋白质浓度为5-10mg/mL的第一溶液，将多酚氧化酶配制成浓度范围为1-10mg/mL的第二溶液；/n(2)将所述第一溶液与所述第二溶液混合，在温度为20-50℃的条件下反应20min-24h后，离心、收集沉淀获得交联酶微粒。/n

【技术特征摘要】
1.一种交联酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)将底物配制成蛋白质浓度为5-10mg/mL的第一溶液，将多酚氧化酶配制成浓度范围为1-10mg/mL的第二溶液；
(2)将所述第一溶液与所述第二溶液混合，在温度为20-50℃的条件下反应20min-24h后，离心、收集沉淀获得交联酶微粒。


2.根据权利要求1所述的一种交联酶的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述底物为一种多肽链中含有能够被多酚氧化酶特异性催化的酪氨酸残基的酶。


3.根据权利要求1所述的一种交联酶的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述底物为谷氨酰胺转氨酶。


4.根据权利要求1所述的一种交联酶的制备方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：周建芹，刘江云，胡明刚，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32