一种经基因编辑的功能性肝实质细胞的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种经基因编辑的功能性肝实质细胞的制备方法及其应用，具体地，本发明专利技术提供了一种肝实质细胞的制备方法，包括步骤：在第一培养基、第二培养基、第三培养基的存在下，在培养体系中培养经基因编辑的内胚层干细胞，从而获得功能性的肝实质细胞。本发明专利技术的功能性的肝实质细胞具有非常高的分化率和纯度，并且，本发明专利技术的肝实质细胞还具有治疗肝脏相关疾病的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种经基因编辑的功能性肝实质细胞的制备方法及其应用
本专利技术涉及生物技术和细胞治疗领域。具体地，本专利技术涉及一种经基因编辑的功能性肝实质细胞的制备方法及其应用。
技术介绍
Wilson’sdisease是一种常染色体隐性遗传疾病，与其相关的基因ATP7B编码的是一种P型ATPase，参与细胞内Cu2+的转运。而Wilson’sdisease病人ATP7B基因发生异常，导致Cu2+无法正常排泄而在肝脏、脑等组织的大量积累进而引发肝损伤及脑部豆状核变性等。WD的世界范围发病率为1/30000～1/100000，在中国较多见。目前关于Wilson’sdisease的治疗主要有药物和肝移植治疗，前者往往只能起到缓解作用并且存在较大的毒副作用和药物依赖性，后者则受制于合适的供体肝源。因此，发展新型的细胞替代治疗，尤其是病人特异性细胞治疗，具有极其重大的临床意义。WD动物模型LongEvansCinnamon(LEC)大鼠经移植正常大鼠的原代肝实质细胞后，能够改善其铜离子排泄功能，恢复正常肝功并长期存活，但目前利用人源肝实质细胞治疗WD本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝实质细胞的制备方法，其特征在于，包括步骤：/n(a)在第一培养条件下，在培养体系中培养内胚层干细胞，从而获得经肝脏特化的肝向内胚层(Hepatic Endoderm)细胞；所述内胚层干细胞为经基因编辑的细胞；/n(b)在第二培养条件下，在培养体系中培养步骤(a)获得的肝向内胚层(HepaticEndoderm)细胞，从而获得肝母细胞；和/n(c)在第三培养条件下，在培养体系中培养步骤(b)获得的肝母细胞，从而获得肝实质细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种肝实质细胞的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(a)在第一培养条件下，在培养体系中培养内胚层干细胞，从而获得经肝脏特化的肝向内胚层(HepaticEndoderm)细胞；所述内胚层干细胞为经基因编辑的细胞；
(b)在第二培养条件下，在培养体系中培养步骤(a)获得的肝向内胚层(HepaticEndoderm)细胞，从而获得肝母细胞；和
(c)在第三培养条件下，在培养体系中培养步骤(b)获得的肝母细胞，从而获得肝实质细胞。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述经基因编辑的细胞包括经基因纠正的细胞和/或经基因突变的细胞。


3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述经基因纠正的细胞包括细胞中的ATP7B基因为野生型的ATP7B基因的细胞。


4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述经基因突变的细胞中的ATP7B基因含有选自下组的一个或多个基因突变位点：
c.2333G>T；
c.2621C>T；
c.2975C>T；
其中，核苷酸位置编号基于野生型人ATP7B编码基因序列(NG_008806)。


5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述经基因突变的细胞中的ATP7B具有选自下组的一个...

【专利技术属性】
技术研发人员：程新，邓小刚，周莹，
申请(专利权)人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：上海;31