对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株及应用，该菌株为Vibrio cholerae CHN‑F4菌株，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020260；其编码的特异性lolB基因的序列如SEQ ID NO.1所示；其编码的16S rRNA基因的序列如SEQ ID NO.2所示；其对十种抗菌素敏感，包括氨苄西林、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、利福平、壮观霉素、链霉素、四环素、复方新诺明和甲氧苄氨嘧啶；本发明专利技术不仅为我国检测用微生物参考物质提供了新菌种资源，而且为霍乱弧菌进化、食品安全，以及环境污染的研究提供了模式菌株。

Antibiotic sensitive non-O1 / O139 Vibrio cholerae strains and their application

【技术实现步骤摘要】
对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株及应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种从中国长江入海口表层海水中分离、鉴定得到的对十种抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株(即VibriocholeraeCHN-F4)及应用。
技术介绍
霍乱弧菌(Vibriocholerae)是革兰氏阴性细菌，隶属于γ-变形菌门(Gammaproteobacteria)、弧菌目(Vibrionales)、弧菌科(Vibrionaceae)、弧菌属(Vibrio)。该菌生存于近岸海域、河口、养殖水域等环境，并常见于甲壳类和鱼类等水产品中。迄今为止，已被鉴定的霍乱弧菌至少分为206个血清型，其中仅O1和O139血清型产生“霍乱”毒素(CholeraToxin，CT)和毒素共调节菌毛(Toxin-CoregulatedPilus，TCP)，引发“霍乱”的爆发与流行。据文献报道，大多数霍乱弧菌环境分离菌株不携带CT和TCP的编码基因。中国长江入海口具有独特的生态环境，然而，涉及中国长江入海口的霍乱弧菌及其对抗菌素耐受性的研究鲜有报道。源自中国长江入海口表层海水中，对十种抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌未见报道。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术从中国长江入海口表层海水中分离、鉴定得到一株对十种抗菌素敏感的菌株，经鉴定为一株新的非O1/O139型霍乱弧菌菌株，即VibriocholeraeCHN-F4，从而填补了我国在该领域研究的空白。为达到上述目的，本专利技术的解决方案是：一种对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株，拉丁文学名为Vibriocholerae，菌株名为CHN-F4。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(ChinaCenterforTypeCultureCollection,CCTCC)，中国，武汉大学；保藏日期为2020年7月1日；保藏编号为：CCTCCNO：M2020260。该非O1/O139型霍乱弧菌菌株不携带霍乱毒素、毒素共调节菌毛的编码基因ctxAB和tcpA，及辅助毒素小带联结毒素(ZonulaOccludensToxin，ZOT)、附属霍乱肠毒素(AccessoryCholeraEnterotoxin，ACE)的编码基因zot和ace，上述检测均为阴性。进一步地，该非O1/O139型霍乱弧菌CHN-F4菌株的特异性lolB基因的序列如SEQIDNO.1所示。进一步地，该非O1/O139型霍乱弧菌CHN-F4菌株的16SrRNA基因的序列如SEQIDNO.2所示。进一步地，该非O1/O139型霍乱弧菌CHN-F4菌株对十种抗菌素敏感，包括氨苄西林(Ampicillin)、氯霉素(Chloramphenicol)、庆大霉素(Gentamicin)、卡那霉素(Kanamycin)、利福平(Rifampicin)、壮观霉素(Spectinomycin)、链霉素(Streptomycin)、四环素(Tetracycline)、复方新诺明(Sulfamethoxazole-Trimethoprim)和甲氧苄氨嘧啶(Trimethoprim)。一种对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株在检测和研究微生物中的应用。由于采用上述方案，本专利技术的有益效果是：本专利技术的对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株，即VibriocholeraeCHN-F4；其编码的霍乱弧菌的特异性lolB基因的序列如SEQIDNO.1所示；其编码的16SrRNA基因的序列如SEQIDNO.2所示；其不携带“霍乱”毒素CT和毒素共调节菌毛TCP的编码基因ctxAB、tcpA，以及辅助毒素小带联结毒素ZOT和附属霍乱肠毒素ACE的编码基因zot和ace；其对十种抗菌素敏感，包括氨苄西林、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、利福平、壮观霉素、链霉素、四环素、复方新诺明和甲氧苄氨嘧啶；本专利技术不仅为我国检测用微生物参考物质提供了新菌种资源，而且为霍乱弧菌进化、食品安全，以及环境污染的研究提供了模式菌株。附图说明图1是本专利技术实施例1中获得的霍乱弧菌CHN-F4菌株在胰蛋白胨大豆培养基(TrypticSoyBroth，TSB)(pH8.5，3％NaCl)琼脂(1.5％)平板上的菌落特征，培养温度为37℃。图2是本专利技术实施例3中上述霍乱弧菌CHN-F4菌株的精氨酸双水解酶试验(Double-ArginineDihydrolaseTest，D-ADT)(A)和七叶苷水解试验(EsculinHydrolysisTest，EHT)(B)结果。其中，反应管号从左至右依次表示接种阳性对照(霍乱弧菌GIM1.449标准菌株)、空白对照(未接种菌株)、接种霍乱弧菌CHN-F4菌株。图3是本专利技术实施例4中4.1的获得的霍乱弧菌CHN-F4菌株的基因组DNA样品的琼脂糖凝胶电泳分析结果。其中，泳道M表示DNA分子量Marker(λDNA/HindIIIMarker)；泳道1：阳性对照，霍乱弧菌GIM1.449标准菌株的基因组DNA样品；泳道2：空白对照，不加DNA样品；泳道3：霍乱弧菌CHN-F4菌株的基因组DNA样品。电泳条件：琼脂糖凝胶浓度为0.7％，电压100V，电泳时间约30min。图4是本专利技术实施例4中4.2获得的霍乱弧菌CHN-F4菌株的霍乱弧菌的特异性lolB基因的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析结果。其中，泳道M表示DNA分子量Marker(D15000+200)；泳道1:阳性对照，反应模板为标准菌株霍乱弧菌GIM1.449的基因组DNA样品；泳道2：空白对照，不加DNA模板；泳道3：霍乱弧菌CHN-F4菌株的基因组DNA样品。电泳条件：琼脂糖凝胶浓度为2％，电压120V，电泳时间约35min。图5是本专利技术实施例4中4.3获得的霍乱弧菌CHN-F4菌株的16SrRNA基因扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析结果。其中，泳道M表示DNA分子量Marker(D15000+200)；泳道1:阳性对照，反应模板为标准菌株霍乱弧菌GIM1.449的基因组DNA样品；泳道2：空白对照，不加DNA模板；泳道3：反应模板为霍乱弧菌CHN-F4菌株的基因组DNA样品。电泳条件：琼脂糖凝胶浓度为2％，电压120V，电泳时间约30min。图6是本专利技术实施例5获得的霍乱弧菌CHN-F4菌株基于16SrRNA基因的系统进化树(PhylogeneticTree)。其中，霍乱弧菌CHN-F4菌株的16SrRNA基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；其它参考菌株的16SrRNA基因的核苷酸序列来源自GenBank数据库，其序列登录号标注于菌株名称后面括号内，包括16株霍乱弧菌、2株副溶血性弧菌(Vibroparahaemolyticus)，以及2株创伤弧菌(Vibriovulnificus)。霍乱弧菌CHN-F4(VibriocholeraeCHN-F4)保藏于中国典型培养物保藏中心(ChinaCenterforTypeCultureCollect本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株，其特征在于：所述非O1/O139型霍乱弧菌菌株的保藏编号为：CCTCC NO：M 2020260。/n

【技术特征摘要】
1.一种对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株，其特征在于：所述非O1/O139型霍乱弧菌菌株的保藏编号为：CCTCCNO：M2020260。


2.根据权利要求1所述的对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株，其特征在于：所述非O1/O139型霍乱弧菌菌株的lolB基因的序列如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求1所述的对抗菌素敏感的非O1/O139型霍乱弧菌菌株，其特征在于：所述非O1/O139型霍乱弧菌菌株的16SrRNA基因的序列如SEQIDNO.2所示。

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈兰明，付惠玉，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海;31