一种香樟花活性物质的提取方法和抗氧化性能的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种香樟花活性物质的提取方法和抗氧化性能的测定方法。香樟花活性物质的提取方法为：取新鲜采摘后的香樟花，经过清洗后，冷冻干燥除去水分；用闪式提取器进行提取，待静置过夜后，过滤得到提取液，提取液旋蒸得到香樟花提取物；将香樟花提取物溶解于无水乙醇中，制得储备液。香樟花活性物质抗氧化性能的测定方法为：将香樟花活性物质的提取方法所制得的储备液稀释成不同浓度梯度，使用同浓度维生素C作为阳性对照，对DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、三价铁离子还原能力进行测定。本发明专利技术对香樟花中活性物质进行了高效提取，该提取物具有较强的DPPH和ABTS自由基清除能力以及三价铁离子还原力。

A method for extraction of active substances from camphor flowers and determination of antioxidant activity

【技术实现步骤摘要】
一种香樟花活性物质的提取方法和抗氧化性能的测定方法
本专利技术涉及一种香樟花活性物质的提取方法和抗氧化性能的测定方法，属于天然产物的提取

技术介绍
香樟花是樟属植物香樟树(Cinnamomumcamphora)的花，花季4-5月，在中国多分布于南方及西南各省区。香樟树全树具有樟脑香气，主要用于樟脑的提制和生产。香樟花整体形小，花长约5mm，开花时呈淡黄色，香气清新淡雅。现在对香樟树的研究中多集中在枝叶树干中，研究表明其枝叶等均具有较强的生理活性如抗氧化性，抗菌性等，但未对香樟花进行提取和活性研究的相关报道。闪式提取是一种植物组织破碎提取法，在室温下通过高速粉碎物料至较低粒度，辅以合适的溶剂能够高效的提取物料中的活性成分，相较常规的溶剂浸提法提取效率更高，所需溶剂量更少，被广泛的应用于植物组织的初步分离和提取中。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：如何对香樟花中活性物质进行高效提取，并对抗氧化活性进行初步探索。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种香樟花活性物质的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)取新鲜采摘后的香樟花，经过清洗后，冷冻干燥除去水分；步骤2)：选用无水乙醇作为溶剂，用闪式提取器进行提取，待静置过夜后，过滤得到提取液，提取液旋蒸得到香樟花提取物；步骤3)：将香樟花提取物溶解于无水乙醇中，制得储备液。优选地，所述步骤2)中香樟花与无水乙醇的质量比为1：10；闪式提取器的功率为150W，提取时间为1min。<br>优选地，所述步骤3)中储备液的浓度为40mg/mL。本专利技术还提供了一种香樟花活性物质抗氧化性能的测定方法，其特征在于，将上述香樟花活性物质的提取方法所制得的储备液稀释成不同浓度梯度，使用同浓度维生素C作为阳性对照，对DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、三价铁离子还原能力进行测定。优选地，测定所述DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力时，所述储备液的稀释液浓度、维生素C的浓度不大于320μg/mL。更优选地，所述DPPH自由基清除能力的测定方法为：将所述储备液与维生素C分别稀释成浓度为不同梯度稀释液；取各浓度150μL样品和150μL浓度为1.5mM的DPPH的无水乙醇溶液置于96孔板中，混合均匀，30℃避光保存，30min后使用酶标仪测量吸光度值；DPPH自由基清除率公式如式1所示：式1中，A空白为150μL无水乙醇和150μLDPPH溶液的吸光度，A样品为150μL样品和150μLDPPH溶液的吸光度。更优选地，所述ABTS自由基清除能力的测定方法为：预先配置所需的ABTS工作液，将所述香樟花储备液与维生素C分别稀释成浓度为不同梯度稀释液，取各浓度0.15mL样品和2.85mLABTS工作液置于试管中，30℃下静置8min，以无水乙醇为空白，在734nm下使用紫外分光光度计测定吸光度；ABTS自由基清除率公式如式2所示：式2中，A空白为0.15mL无水乙醇和2.85mlABTS工作液的吸光度，A样品为0.15mL样品和2.85mLABTS工作液的吸光度。优选地，测定所述三价铁离子还原能力时，所述储备液的稀释液浓度、维生素C的浓度不大于1mg/mL。更优选地，所述三价铁离子还原能力的测定方法为：将储备液与维生素C分别稀释成不同梯度稀释液；将各浓度样品与2.5mL0.2mM、pH值6.6的磷酸钠缓冲溶液和2.5mL1wt％铁氰化钾溶液混合均匀，将混合液50℃温育20min；急剧冷却后，加入2.5mL10wt％三氯乙酸溶液，然后将其在6000r/min下离心10min，取上层溶液；将2.5mL上层清液、2.5mL蒸馏水和0.5mL0.1wt％氯化铁溶液混合均匀，在700nm下，使用紫外分光光度计测量吸光度值。本专利技术对香樟花中活性物质进行了高效提取，并对抗氧化活性进行初步探索。本专利技术工艺简单，能耗低，提取率高，可快速得到香樟花中活性物质。实验表明，该提取物与阳性对照维生素C相比，具有较强的DPPH和ABTS自由基清除能力以及三价铁离子还原力，在日化、食品领域具备潜在的应用前景。附图说明图1为香樟花提取物和维生素C对1,1-二苯基-2-苦肼基(自由基)(DPPH)自由基清除作用示意图；图2为香樟花提取物和维生素C对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除作用示意图；图3为香樟花提取物和维生素C对三价铁离子总还原力示意图。具体实施方式为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。实施例1香樟花活性成分的提取：材料和方法1.1材料与主要仪器香樟花，采摘自上海市奉贤区海湾镇；无水乙醇购买于默克化工技术(上海)有限公司、1,1-二苯基-2-苦肼基(自由基)(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、过硫酸钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、三氯乙酸、铁氰化钾、氯化铁等试剂购买于上海国药集团化学试剂有限公司。闪式提取器JHBE-50T型(河南智晶生物科技股份有限公司)；冷冻干燥机FD-1A-50型(上海比郎仪器制造有限公司)；电子天平PL203型(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；紫外分光光光度计UV-6000型(上海元析仪器有限公司)；多功能酶标仪TECAN-M200PRO型(奥地利帝肯有限公司)；微量移液枪(法国GILSON)，旋转蒸发仪，真空泵，各类玻璃器皿等。1.2试验方法1.2.1闪式提取香樟花中活性物质采摘新鲜的香樟花，将香樟花中的杂质和腐烂花瓣，用清水冲洗干净；将清洗后的香樟花初步滤去水分，置于冰箱下层冷冻后，使用冷冻干燥机除去花中水分，备用；(2)准确称取50克冷冻干燥后的香樟花于不锈钢提取罐中，加入500mL无水乙醇，使用闪式提取器，在150W的破碎功率和1min破碎时间下进行充分提取，提取液静置过夜；(3)使用真空泵抽滤除去花渣，得到提取液，使用旋转蒸发仪除去提取液中乙醇，得到香樟花提取物2.08g,称量400mg溶解于10mL无水乙醇中，得到高浓度储备液，置于冰箱备用。实施例2香樟花提取物DPPH自由基清除率的测定：将高浓度储备液与对照品维生素C分别稀释成浓度为20μg/mL，40μg/mL,80μg/mL，160μg/mL，320μg/mL的梯度稀释液。取各浓度150μL样品和150μL浓度为1.5mM的DPPH溶液(无水乙醇稀释)置于96孔板中，混合均匀，30℃避光保存，30min后使用酶标仪测量吸光度值。维生素C为阳性对照，DPPH自由基清除率公式如下：式中，A空白为150μL无水乙醇和150μLDPPH溶液的吸光度，A样品为150μL样品和150μLDPPH溶液的吸光度；IC50为DPPH自由基清除率达到50％时样品的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种香樟花活性物质的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1)取新鲜采摘后的香樟花，经过清洗后，冷冻干燥除去水分；/n步骤2)：选用无水乙醇作为溶剂，用闪式提取器进行提取，待静置过夜后，过滤得到提取液，提取液旋蒸得到香樟花提取物；/n步骤3)：将香樟花提取物溶解于无水乙醇中，制得储备液。/n

【技术特征摘要】
1.一种香樟花活性物质的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)取新鲜采摘后的香樟花，经过清洗后，冷冻干燥除去水分；
步骤2)：选用无水乙醇作为溶剂，用闪式提取器进行提取，待静置过夜后，过滤得到提取液，提取液旋蒸得到香樟花提取物；
步骤3)：将香樟花提取物溶解于无水乙醇中，制得储备液。


2.如权利要求1所述的香樟花活性物质的提取方法，其特征在于，所述步骤2)中香樟花与无水乙醇的质量比为1：10；闪式提取器的功率为150W，提取时间为1min。


3.如权利要求1所述的香樟花活性物质的提取方法，其特征在于，所述步骤3)中储备液的浓度为40mg/mL。


4.一种香樟花活性物质抗氧化性能的测定方法，其特征在于，将权利要求1-3任意一项所述的香樟花活性物质的提取方法所制得的储备液稀释成不同浓度梯度，使用同浓度维生素C作为阳性对照，对DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、三价铁离子还原能力进行测定。


5.如权利要求4香樟花活性物质抗氧化性能的测定方法，其特征在于，测定所述DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力时，所述储备液的稀释液浓度、维生素C的浓度不大于320μg/mL。


6.如权利要求5香樟花活性物质抗氧化性能的测定方法，其特征在于，所述DPPH自由基清除能力的测定方法为：将所述储备液与维生素C分别稀释成浓度为不同梯度稀释液；取各浓度150μL样品和150μL浓度为1.5mM的DPPH的无水乙醇溶液置于96孔板中，混合均匀，30℃避光保存，30min后使用酶标仪测量吸光度值；DPPH自由基清除率...

【专利技术属性】
技术研发人员：易封萍，郝临雨，吕晨媛，崔歆卬，张松幸，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：上海;31