贻贝蒸煮液酶解方法技术

本发明专利技术公开了一种贻贝蒸煮液酶解的方法：将贻贝蒸煮液浓缩，得贻贝浓缩液；在100ml贻贝浓缩液中加入0.3～0.7g的风味蛋白酶，调节pH为6.5～7.5，于45～55℃的酶解温度下，酶解2～4h。采用本发明专利技术的方法，能获得风味独特的、可作为调味品的贻贝蒸煮液酶解产物。

【技术实现步骤摘要】
贻贝蒸煮液酶解方法
本专利技术涉及一种水产品蒸煮液的酶解方法，特别涉及一种响应面法优化贻贝蒸煮液的酶解工艺，属于调味品领域。
技术介绍
贻贝产量高，生长力强，是我国主要养殖贝类，其产量占全世界产量的一半以上，目前以冷冻或干制为主要加工手段。在贻贝加工的过程中，每生产1吨产品，就会产生1.5吨左右的贻贝蒸煮液。这些贻贝蒸煮液含有大量的营养成分，如果直接排入水体不仅会污染环境还会造成资源的浪费。因此利用贻贝加工过程的蒸煮液，研制出天然贻贝调味品，不仅解决了资源的浪费还解决了环境污染问题，增加贝类加工制品的附加值，产生了良好的社会和经济效益。2017100382495的专利技术《一种贻贝肉和蒸煮液的酶解纯化工艺》告知：将蒸煮贻贝的水进行脱盐得到浓缩液，将贻贝洗涤采肉后进行粉碎，均浆为均浆料，将浓缩液与贻贝肉均浆料适量混合为混合料，采用复合蛋白酶；将混合料升温酶解为酶解液后经陶瓷膜滤清后为清液，清液由膜进行分离后为截留液和透过液，截留液为贻贝多糖液；透过液脱腥，脱色，过柱液得精滤液；精滤液经减压蒸发浓缩得浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得贻贝低聚肽粉，截留液中加入乙醇，搅拌，静止后，分取沉淀，干燥，即得贻贝粗多糖。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供一种贻贝蒸煮液酶解的方法，采用该方法获得的酶解产物风味独特，能作为调味品。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种贻贝蒸煮液酶解的方法：将贻贝蒸煮液浓缩，得贻贝浓缩液；在100ml贻贝浓缩液中加入0.3～0.7g(优选0.5～0.7g)的风味蛋白酶，调节pH为6.5～7.5，于45～55℃的酶解温度下，酶解2～4h。作为本专利技术的贻贝蒸煮液酶解的方法的改进：在100ml贻贝浓缩液中加入0.63g的风味蛋白酶，调节pH为6.9，于51℃的酶解温度下，酶解3.3h。作为本专利技术的贻贝蒸煮液酶解的方法的进一步改进：贻贝蒸煮液于60℃加热浓缩至为原体积的9～11％，得贻贝浓缩液。作为本专利技术的贻贝蒸煮液酶解的方法的进一步改进：酶解时间到后，灭酶(沸水浴中6min，使酶失活)，冷却至室温后离心，离心所得的上清液为酶解液。本专利技术，在专利技术过程中，利用响应面法优化贻贝蒸煮液酶解工艺。一、响应面法优化贻贝蒸煮液酶解工艺：1)、酶解：将贻贝蒸煮液于60℃加热浓缩24小时，此时为原体积的10％，得贻贝浓缩液。取4个锥形瓶放入100ml贻贝浓缩液，分别向其中加入风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶，然后在四种蛋白酶的最适酶解条件下对贻贝蒸煮液进行酶解；如表1所述。2)、离心：酶解结束后，在沸水浴中灭酶6min，使酶失活后冷却至室温，4000r/min离心10min；3)、酶种筛选：测试步骤2)中得到的离心液，对其进行水解度的测定，测量得到风味蛋白酶的水解度最高，选风味蛋白酶为后续用酶；4)、对风味蛋白酶单因素试验，确定四种影响因素的取值范围，采用响应面方法在四因素三水平上对温度、pH、时间、加酶量进行优化，以贻贝蒸煮液的水解度为响应值，应用DesignExpert10.0软件，优化贻贝蒸煮液酶解工艺；表1、四种酶制剂的酶解条件注：酶添加量0.3％，是指100ml贻贝浓缩液中加入0.3g的酶，其余以此类推。表2、响应面设计试验因素水平5)、从响应面试验中挑选不同水解度的样品并选取最佳实验条件样品进行风味分析。二、水解度的测定方法水解度测定：参照GBT5009.39-2003甲醛电位滴定法。水解度(DH)＝离心液中氨基酸态氮含量/离心液中总氮含量。三、实验结果分析(1)酶的添加量对水解度的影响酶的添加量控制为0.1％、0.3％、0.5％、0.7％、0.9％，固定水解温度50℃，时间3h，pH7.0。从图1可以看出，随着蛋白酶含量的增加，水解度呈上升趋势，到加酶量为0.5％的时候，水解度趋于稳定，这是由于酶浓度逐渐为底物所饱和，而且加入过多的蛋白酶会造成其自水解，会对底物产生一定的影响，综合考虑，酶的添加量选择在0.3％～0.7％较为合适。(2)酶解时间对水解度的影响酶解时间控制为1h、2h、3h、4h、5h，固定水解温度50℃，pH7.0，酶的添加量0.5％。从图2可以看出，随着酶解时间的增长，水解度呈现先上升后下降额趋势，在水解3h的时候达到最大值。因此，酶解时间选择在2～4h较为合适。(3)pH对水解度的影响pH控制在6、6.5、7、7.5、8，固定水解温度50℃，酶的添加量0.5％，时间3h。从图3可以看出在pH为7的时候，水解度最高，高于或低于7水解度都会较对大值有所降低，这是因为每一种酶都有其最适pH，只有在合适的环境下，酶及底物蛋白质的解离基团才能处于易于结合并转化成产物的解离状态，否则酶的活性就会受到抑制，甚至失活。因此在酶解过程中，pH选择6.5～7.5较为合适。(4)温度对水解度的影响温度控制在40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，固定酶的添加量0.5％，时间3h，pH7.0。从图4可以看出，温度在40～50℃的时候，水解度一直处于上升状态，这是因为在低于其最适温度前，温度处于主导地位，随着温度的升高，分子运动剧烈，酶与底物的接触机会增加，反应速率加快，水解度升高；在50℃时达到最高，50～55℃的时候趋于稳定，但高于55℃的时候下降的很明显，这是因为酶是一种活性蛋白，当温度过高时，其结构发生改变，酶的活性降低，反应速率降低。因此，综上分析酶解温度选择45～55℃较为适宜。四、响应面优化设计利用Design-Expert8.0.6软件，根据Box-Benhnken设计原则进行四因素三水平实验设计，酶解温度(A)、酶解pH(B)、酶解时间(C)、加酶量(D)四要素为自变量，测定贻贝蒸煮液水解度(Y)做响应值，做响应面分析实验，实验分析方案及结果见表3。表3、响应面实验分析方案及结果回归方程方差分析以加酶量、酶解时间、酶解温度、酶解pH为自变量，蒸煮液水解度作为响应值，利用DesignExpert8.0.6软件进行非线性回归的二次多项式模型拟合，预测的模型如下：Y＝+13.86+0.13X1-0.17X2+0.088X3+0.20X4+0.11X1X2-0.027X1X3+0.045X1X4+7.500E-003X2X3-0.11X2X4-0.030X3X4-0.22X12-0.30X22-0.22X32-0.18X42。方差分析及显著性比较见表4。表4、水解度回归模型方差分析由图4可知，模型P<0.0001，说明响应面回归模型极显著；失拟项P＝0.4624>0.05不显著，说明该回归方程能较好的拟合真实的响应面。从X1，X2，X3，X4四个因素对水解度的影响来看，因素X1、X2、X3、X4、X12、X22、X32、X42对结果影响显著本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.贻贝蒸煮液酶解的方法，其特征在于：/n将贻贝蒸煮液浓缩，得贻贝浓缩液；/n在100ml贻贝浓缩液中加入0.3～0.7g的风味蛋白酶，调节pH为6.5～7.5，于45～55℃的酶解温度下，酶解2～4h。/n

【技术特征摘要】
1.贻贝蒸煮液酶解的方法，其特征在于：
将贻贝蒸煮液浓缩，得贻贝浓缩液；
在100ml贻贝浓缩液中加入0.3～0.7g的风味蛋白酶，调节pH为6.5～7.5，于45～55℃的酶解温度下，酶解2～4h。


2.根据权利要求1所述的贻贝蒸煮液酶解的方法，其特征在于：
在100ml贻贝浓缩液中加入0.63g的风味蛋白酶，调节p...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴志远，陶美洁，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33