一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏和孵化方法技术

本发明专利技术提供了一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏和孵化方法，属于水产养殖领域，所述的方法为将来源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶溶于海水中，制备成5g/L的脱黏溶液；收集绿鳍马面鲀的受精卵，将受精卵放入脱黏液中，不断翻动混匀，当受精卵不再相互粘黏、黏附于桶壁，并呈现一定光亮透明的状态时停止脱黏，脱黏后的受精卵通过增加海水盐度来分离受精卵和未受精卵，分离后的受精卵冲洗干净后按照正常程序孵化。本发明专利技术发方法能够减少孵化和育苗过程的病菌污染，提高孵化率和出苗率。

A method for debonding and hatching of fertilized eggs of Takifugu fasciatus

【技术实现步骤摘要】
一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏和孵化方法
本专利技术涉及水产养殖领域，具体为一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏和孵化方法。
技术介绍
绿鳍马面鲀(Thamnaconusseptentrionalis)俗称“扒皮鱼”、“耗儿鱼”和“面包鱼”，分布于渤海、黄海和东海，肉质鲜美，营养丰富，是我国沿海优良的经济性鱼类。绿鳍马面鲀养殖性状优良，生存温度9～30℃，杂食性易于驯化养殖，饲料利用率高，生长速度快，可开展工厂化车间养殖、池塘养殖和网箱养殖等多种模式。商品规格多样，100g即可销售，北方早苗当年即可养殖上市，福建以南海域可以全年养殖，市场前景十分广阔。绿鳍马面鲀的受精卵呈黏性、沉性，通过卵表面的粘膜和粘丝将其粘附、固定于其它物体上。绿鳍马面鲀人工繁殖多采用自然产卵的方式，现有技术通过在池底摆放附着基收集受精卵，随后将收集的受精卵转入孵化池孵化。由于受精卵呈黏性，表面黏附有大量亲鱼粪便等杂质，在孵化池内易滋生病菌。另外，此方法不能很好地将受精卵和未受精卵分离，未受精卵在孵化池中容易腐坏，加剧病菌繁殖，影响受精卵孵化和后续苗种培育。因此，研发有效去除受精卵黏性、分离受精卵和未受精卵的技术方法对于完善绿鳍马面鲀苗种繁育技术非常重要。
技术实现思路
本专利技术提供了一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏和孵化方法，可以有效去除受精卵表面黏液，同时分离受精卵和未受精卵，减少孵化和育苗过程的病菌污染，提高孵化率和出苗率。本专利技术是通过如下技术方案来实现的：一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏方法，所述的方法步骤如下：<br>(1)配制脱黏溶液将碱性蛋白酶(地衣芽孢杆菌)溶于海水中，制备成5g/L的脱黏溶液；(2)收集绿鳍马面鲀的受精卵，将受精卵放入脱黏液中，不断翻动混匀，当受精卵不再相互粘黏、黏附于桶壁，并呈现一定光亮透明的状态时停止脱黏。进一步，受精卵与脱黏溶液的比例为30～35g/L本专利技术还提供绿鳍马面鲀受精卵脱黏后的孵化方法，把脱黏后清洗干净的受精卵转入分离容器中，逐渐向分离容器中加入高盐海水母液，混合均匀，观察受精卵分离情况；当大量光亮透明的受精卵出现上浮时，停止加入高盐海水母液，静置；待全部受精卵浮于水体上层时，未受精的卵沉在分离容器的底部；用筛网收集上层受精卵，并不断用清洁海水清洗，去除受精卵表面的高盐海水，收集后的受精卵按照正常程序孵化。进一步，所述的高盐溶液的配制方法为将海盐加入海水中配制而成。进一步，所述的正常程序孵化为在孵化池放置孵化网箱，将受精卵放入网箱中，水温18～20℃，盐度27～30，溶解氧6.0～8.0mg/L，PH7.8～8.2；经40小时后，受精卵发育至肌肉效应期，用80目筛网收集受精卵，此时，受精卵中仍包含未发育的死卵、坏卵，需再次使用与分离受精卵和未受精卵相同的方法分离获得正常发育的受精卵。将清洗后的受精卵放入苗种培育池，初孵仔鱼陆续破膜。本专利技术与现有技术相比的有益效果：1.与现有技术相比，本专利技术首次研发出高效的绿鳍马面鲀受精卵脱黏方法。由于绿鳍马面鲀亲鱼的肝脏覆于生殖腺外侧，人工授精操作容易损失肝脏，致使亲鱼死亡，因此，目前绿鳍马面鲀人工繁殖多采用自然产卵的方式。受精卵呈黏性、沉性，常附着于亲鱼池底和池壁，表面黏附大量亲鱼粪便等杂质。现有技术首先对收集的受精卵清洗消毒，随后转入孵化池孵化。虽然可暂时杀灭病菌，但受精卵表面仍黏附大量杂质供病菌繁殖，随着时间推移，病菌会再次滋生，影响受精卵孵化和苗种生长。本专利技术通过碱性蛋白酶(地衣芽孢杆菌)，可以高效去除受精卵表面黏液，降低受精卵表面病菌的滋生。2.与现有技术相比，本专利技术在受精卵脱黏的基础上，首次研发出绿鳍马面鲀受精卵和未受精卵分离方法，以及正常发育受精卵和未发育死卵、坏卵分离方法。现有技术未对受精卵进行脱黏，卵表面黏附杂质，受精卵和未受精卵不易区分，并且难以通过调节海水密度进行受精卵分离，导致大量未受精卵、死卵和坏卵一直留存在孵化和苗种培育水体中，恶化水质。本专利技术中受精卵经脱黏后，受精卵与未受精卵的比重出现差异，可通过改变海水密度进行分离，减少了未受精卵、死卵和坏卵数量，改善了孵化和苗种生长水质，提高了孵化率和出苗率。具体实施方式：下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明，但本专利技术的保护范围不受实施例任何形式上的限制。实施例1：绿鳍马面鲀受精卵脱黏和孵化方法，包括以下步骤：(1)制备脱黏液和受精卵脱黏：2018年5月23日，水温19℃，从绿鳍马面鲀亲鱼池中收集受精卵，由于受精卵呈黏性、沉性，大量受精卵沉于池底。降低亲鱼池水位至20cm，通过抄网在池底收集受精卵。将25g碱性蛋白酶(地衣芽孢杆菌)(索莱宝(Solarbio))溶于约5L海水中，混合均匀，制备成5g/L脱黏液。将163g受精卵(约65.2万粒受精卵)放入脱黏溶液中，不断翻动混匀20min，当受精卵不再相互粘黏、黏附于桶壁，并呈现一定光亮透明的状态时停止脱黏。(2)受精卵清洗：用80目筛网收集脱黏后的受精卵，不断用清洁海水清洗受精卵，将卵表面脱离的黏液洗去，直至受精卵呈现光亮透明的状态。(3)受精卵和未受精卵分离：将2kg海盐放入10L海水中配置高盐海水母液，把清洗干净的受精卵转入分离桶中，逐渐向分离桶中加入高盐海水母液，混合均匀，观察受精卵分离情况。当大量光亮透明的受精卵出现上浮时，停止加入高盐海水母液，静置。待全部受精卵浮于水体上层时，未受精卵沉于水底，用80目筛网进行收集。不断用清洁海水清洗收集的受精卵，去除卵表面的高盐海水，共获得149g高质量受精卵。(4)受精卵孵化：在孵化池放置孵化网箱(58cm×48cm×45cm)，将受精卵放入网箱中，网箱中布设两个气石进行充氧，水温18～20℃，盐度27～30，溶解氧6.0～8.0mg/L，PH7.8～8.2。经40小时后，受精卵发育至肌肉效应期，用80目筛网收集受精卵。此时，受精卵中仍包含未发育的死卵、坏卵，需再次进行分离。由于正常发育受精卵的比重低于死卵、坏卵，可以使用与分离受精卵和未受精卵相同的方法分离获得正常发育的受精卵。将清洗后的受精卵放入苗种培育池，初孵仔鱼陆续破膜。(5)利用本方法对绿鳍马面鲀受精卵进行脱黏和孵化，受精卵孵化率达92.6％，初孵仔鱼成活率达90.8％，经过50天苗种培育，获得43～69mm的健康苗种25.6万尾，出苗率39.2％。实施例2利用常规方法进行绿鳍马面鲀受精卵孵化：2018年5月24日，水温19℃，降低绿鳍马面鲀亲鱼池水位至20cm，通过塑料板(附着基)在池底收集受精卵152g(约60.8万粒受精卵)。用清洁海水不断清洗受精卵3min，尽可能将受精卵表面杂质洗去。在200mg/L的聚维酮碘消毒液中浸泡受精卵5min，不断翻动混匀。随后用清洁海水清洗受精卵3min，洗去消毒液。将消毒后的受精卵均匀铺洒至孵化池中，水温18～20℃，盐度27～30，溶解氧6.0～8.0mg/L，PH7.8～8.2。利用常规方法进行绿鳍马面鲀受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏方法，其特征在于所述的方法步骤如下：/n(1)配制脱黏溶液将来源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶溶于海水中，制备成浓度为5g/L的脱黏溶液；/n(2)受精卵脱黏收集绿鳍马面鲀的受精卵，将受精卵放入脱黏溶液中，不断翻动混匀，当受精卵不再相互粘黏、黏附于桶壁，并呈现一定光亮透明的状态时停止脱黏。/n

【技术特征摘要】
1.一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏方法，其特征在于所述的方法步骤如下：
(1)配制脱黏溶液将来源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶溶于海水中，制备成浓度为5g/L的脱黏溶液；
(2)受精卵脱黏收集绿鳍马面鲀的受精卵，将受精卵放入脱黏溶液中，不断翻动混匀，当受精卵不再相互粘黏、黏附于桶壁，并呈现一定光亮透明的状态时停止脱黏。


2.根据权利要求1所述的一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏方法，其特征在于受精卵与脱黏溶液的比例为30-35g/L。


3.一种绿鳍马面鲀受精卵脱黏后的孵化方法，其特征在于把权利要求1或2脱黏后的受精卵清洗干净的转入分离容器中，逐渐向分离容器中加入高盐海水母液，混合均匀，观察受精卵分离情况；当大量光亮透明的受精卵出现上浮时，停止加入高盐海水母液，静置；待全部受精卵浮于水体上层时，未受精的卵...

【专利技术属性】
技术研发人员：边力，陈四清，李凤辉，刘长琳，葛建龙，常青，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37