一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种新塔花总黄酮有效部位一测多评方法，其特征在于，采用芦丁作为内参物进行一测多评，建立芦丁与新塔花中菜苷、木犀草苷、蒙花苷之间的相对校正因子，通过校正因子计算新塔花中菜苷、木犀草苷、蒙花苷的含量，采用液相色谱法进行测定。本发明专利技术检测方法高实用性、操作简单、节约成本，弥补仅测定单一组分芦丁含量的不足，可以有效检测出新塔花中芦丁、芹菜苷、木犀草苷、蒙花苷四种成分的含量的同时，进一步提高新塔花总黄酮有效部位的质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法及其应用
本专利技术涉及一种药物的分析检测方法，具体涉及一种采用一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法。
技术介绍
新塔花是维吾尔医常用药材，拉丁名(Ziziphorabungeana.Juz.)根据《新疆植物志》、《新疆药用植物志》记载，新塔花广泛生长于天山一带，新疆和中亚的哈萨克斯坦、吉尔吉斯坦等地都有生长。维吾尔族民间用其垒草煎汤内服，可缓解胸闷、头晕等症状，现临床用于治疗冠心病、高血压及调节心血管系统功能等疾病。其中的黄酮类化合物具有广泛的药理活性及营养保健作用，已有研究表明其黄酮类成分有治疗心肌缺血的作用，能提高超氧化物歧化酶、谷光甘肽酶的活性，降低丙二醛含量，消除引起细胞损伤衰老的氧自由基，使缺血缺氧、受损心肌细胞恢复，是一种有着良好开发潜力的民族药材。由于植物化学成分的复杂性，多指标含量测定已经成为植物来源药物质量控制的共识。目前，越来越多的国内外植物药标准将多指标含量测定收录其中。然而，在多指标含量测定方法实施的过程中，对照品消耗量大，检测操作难度高，严重制约了该方法的推广应用，同时对药用植物的质控及其产业发展代理瓶颈。现有的新塔花总黄酮测定方法中，CN101513448-一种新塔花总黄酮的制备方法及其应用、CN101623325-芳香新塔花总黄酮提取物及其生产方法和心血管药物的应用、及李国柱等在《维药新塔花中总黄酮纯化工艺研究》中提供的新塔花黄酮已提取方均为粗放式的总黄酮提取方法，并不能够用于对于新塔花总黄酮有效部位的质量控制，并且检测操作复杂、成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种采用一测多评法测定新塔花黄酮类成分的方法及其应用，针对现有单一成分和多指标含量测定方法的不足，本专利技术提供一种高实用性、操作简单、节约成本的针对新塔花中芦丁、芹菜苷、木犀草苷和蒙花苷四种成分的检测方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：采用一测多评法测定新塔花成分的方法，采用廉价易得的芦丁作为内参物进行一测多评，建立芦丁与新塔花中芦丁、芹菜苷、木犀草苷和蒙花苷之间的相对校正因子，通过校正因子计算新塔花中芦丁、芹菜苷、木犀草苷和蒙花苷的含量，采用液相色谱法进行测定，具体方法如下：(1)材料准备：将供试品新塔花磨成粉末，过2号筛备用；(2)对照品溶液的制备：芦丁、木犀草苷、芹菜苷、蒙花苷均对照品精密称取，用甲醇溶解，制成浓度为1.0mg/ml的对照溶液；分别取上述标准对照品溶液10，30，70，500μL，用甲醇定容至1mL，混合摇匀，作为混合对照品溶液；(3)供试品溶液的制备：精密称取芳香新塔花总黄酮样品每0.04g，置于10mL量瓶中，加甲醇约9mL超声处理使溶解，功率200W，频率40kHz，放冷后加甲醇定容至刻度，浓度4.0mg/mL，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，备用；(4)色谱条件及系统适用性试验：流动相：水相为：0.1％磷酸-水，有机相为：35-45％甲醇；梯度洗脱程序：0.01→40min，有机相：25％→30％，40.01→75min，39％。75.1min停止；检测波长：359-361nm；流速：0.8-1.2mL/min；柱温：26℃；分离度大于1.5，理论塔板数按芦丁计算不低于5000；(5)测定：将供试品溶液放于离心机中13000r/min离心10分钟，精密吸取上清液10μL，注入液相色谱仪，采用内标法计算，供试品溶液的特征图谱中呈现木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的峰值，通过与芦丁的相对校正因子计算木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的含量。优选的，所述的检测波长为360nm。优选的，所述检测流速为1mL/min。优选的，所述有机相为35％的甲醇。优选的，所述液相色谱仪可选用Agilent1220，岛津LC-20AT型，Waterse2695-2489型高效液相色谱系统。优选的，所述液相色谱柱可选用HypersilODS-2(C18)(4.6mm×150mm，5μm，批号：12190)色谱柱，HypersilODS-2(C18)(4.6mm×250mm，5μm，批号：12190)色谱柱，HypersilODS-2(C18)(4.6mm×150mm，5μm批号：10765)。取步骤(2)混合对照品溶液，分别进样1、2、4、6、8、10μL测定，以芦丁为内标，分别计算木犀草苷、蒙花苷、芹菜苷的相对校正因子fR，采用Agilent1220，岛津LC-20AT型，Waterse2695-2489型3种高效液相色谱系统，HypersilODS-2(C18)(4.6mm×150mm，5μm，批号：12190)色谱柱，HypersilODS-2(C18)(4.6mm×250mm，5μm，批号：12190)色谱柱，HypersilODS-2(C18)(4.6mm×150mm，5μm批号：10765)考察色谱柱对fR的影响，木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷四个成分的相对标准偏差RSD＜2％，从中确定芦丁、蒙花苷、芹菜苷的相对校正因子fR为各实验所得数据的平均值，分别是0.932、1.337、4.011。本专利技术还提供一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法在检测新塔花中木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷中的应用。通过实施本专利技术具体的
技术实现思路
，可以达到以下有益效果：1、本专利技术选用芦丁作为内参物进行一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量，芦丁价廉容易得到，从而可以节省时间成本、劳动成本，而且方法快速、准确，能更全面的知晓新塔花质量。2、针对现有单一成分和多指标含量测定方法的不足，本专利技术检测方法高实用性、操作简单、节约成本，可以有效检测出新塔花中芦丁、芹菜苷、木犀草苷和蒙花苷四种成分的含量。3、通过比较一测多评法和标准曲线法的结果差异，两种方法所得含量结果相近，明一测多评所得的含量计算结果与标准曲线法所得结果相似，在不同的实验条件下，各成分之间的校正因子重现性好(RSD＜2％)，能够有效进行新塔花中芦丁、芹菜苷、木犀草苷和蒙花苷四种成分的含量测定。4、在对照缺乏的情况下，本专利技术的方法可以应用于新塔花的质量评价，同时测定新塔花中4个化合物的方法简便、快捷，为建立新塔花药材的质量评价提供依据。5、构建了新塔花黄酮类成分的一测多评检测方法，由此可以更好更全面的控制新塔花的质量，同时规避由多成含量测定带来的成本和操作问题，方法简单便于操作，且测定结果准确，方法重复性，耐用性好。附图说明图1所示为流速0.9mL/min时的总黄酮样品HPLC色谱图。图2所示为流速1mL/min时的总黄酮样品HPLC色谱图。图3所示为45％有机相等度洗脱的总黄酮样品HPLC色谱图。图4所示为40％有机相等度洗脱的总黄酮样品HPLC色谱图。图5所示为35％有机相等度洗脱的总黄酮样品HPLC色谱图。图6所示为梯度洗脱的总黄酮样品HPLC色谱图。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法，其特征在于，采用芦丁作为内参物进行一测多评，建立芦丁与新塔花中黄酮类中木犀草苷、蒙花苷和芹菜苷之间的相对校正因子，通过校正因子计算新塔花中黄酮类成分中木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的含量，采用液相色谱法进行测定，具体方法如下：/n(1)材料准备：将供试品

【技术特征摘要】
1.一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法，其特征在于，采用芦丁作为内参物进行一测多评，建立芦丁与新塔花中黄酮类中木犀草苷、蒙花苷和芹菜苷之间的相对校正因子，通过校正因子计算新塔花中黄酮类成分中木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的含量，采用液相色谱法进行测定，具体方法如下：
(1)材料准备：将供试品新塔花磨成粉末，过2号筛备用；
(2)对照品溶液的制备：芦丁、木犀草苷、芹菜苷、蒙花苷均对照品精密称取，用甲醇溶解，制成浓度为1.0mg/ml的对照溶液；分别取上述标准对照品溶液10，30，70，500μL，用甲醇定容至1mL，混合摇匀，作为混合对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：
精密称取芳香新塔花总黄酮样品每0.04g，置于10mL量瓶中，加甲醇约9mL超声处理使溶解，功率200W，频率40kHz，放冷后加甲醇定容至刻度，浓度4.0mg/mL，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，备用；
(4)色谱条件及系统适用性试验：
流动相：水相：0.1％磷酸-水，有机相：35％-45％甲醇；
梯度洗脱程序：0.01→40min，有机相：25％→30％，40.01→75min，39％。75.1min停止；
检测波长：359-361nm；流速：0.8-1.2mL/min；柱温：26℃；分离度大于1.5，理论塔板数按芦丁计算不低于5000；
(5)测定：将供试品溶液放于离心机中13000r/min离心10分钟，精密吸取上清液10μL，注入液相色谱仪，采用内标法计算，供试品溶液的特征图谱中呈现木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的峰值，通过与芦丁的相对校正因子计算木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的含量。


2.根据权利要求1所述采用一测多评法测定新塔花中黄酮类成分的方法，其特征在于，所述检测波长为360nm。


3.根据权利要求1所述采用一测多评法测定新塔花中黄酮类成分的方法，其特征在于，所述检测流速为1mL/min。...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宏炳，燕雪花，马昕，张建新，孟军，董文杰，安冬青，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65