一种CS毛细管电泳分析方法和应用技术

本发明专利技术属于毛细管电泳检测技术领域，本发明专利技术涉及一种CS毛细管电泳分析方法和应用，将CS利用离线富集方法进行富集，然后利用场放大结合大体积电动进样堆积的方法进行在线富集；CS水溶液与季铵盐类阳离子型表面活性剂溶液混合，然后加入硫酸溶液，弃上清，向沉淀中加入NaCl，醇沉，分离沉淀和上清液，CS经多次醇沉，将CS沉淀合并后用超纯水溶解得到富集液。将离线富集后的富集液配制得到CS碱溶液，进行大体积电动进样，BGE为20mmol/LNaH

【技术实现步骤摘要】
一种CS毛细管电泳分析方法和应用
本专利技术属于毛细管电泳检测
，具体涉及一种CS毛细管电泳分析方法和应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。硫酸软骨素(ChondroitinSulfate，CS)是一种普遍存在于动物软骨、结缔组织中的糖胺聚糖，糖结构与组成复杂多样。硫酸软骨素在食品添加剂领域和化妆品领域具有一定的应用。毛细管电泳(CapillaryElectrophoresis，简称CE)。毛细管电泳是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。CE的基本仪器装置由毛细管、缓冲液槽、进样系统、高压电源和检测器组成。专利技术人发现现有的利用毛细管电泳分析的方法检测CS的过程中，由于CS的分子量较大、缺少紫外生色团，导致使用毛细管电泳分析的方法进行紫外检测时检测灵敏度较低。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种CS毛细管电泳分析方法和应用。为了解决以上技术问题，本专利技术的技术方案为：第一方面，一种CS毛细管电泳分析方法，将CS利用离线富集方法进行富集，然后利用场放大结合大体积电动进样堆积的方法进行在线富集；离线富集方法为：CS水溶液与季铵盐类阳离子型表面活性剂溶液混合，然后加入硫酸溶液，弃上清，向沉淀中加入NaCl溶液，醇沉，分离沉淀和上清液，CS经醇沉，合并CS沉淀并用超纯水溶解得到富集液。将离线富集后的富集液配制得到CS碱溶液，在线富集采用场放大结合大体积电动进样的方法，BGE为20mmol/LNaH2PO4-90mmol/LEDA-NaCl-磷酸缓冲液，pH3.0。由于CS的分子量较大、酸性较弱，导致动态pH调制堆积和胶束扫集技术的富集效果不明显。在线富集方法中：向BGE(毛细管中的缓冲溶液)为20mmol/LNaH2PO4-90mmol/LEDA-磷酸(pH3.0)缓冲溶液加入一定浓度的NaCl溶液，可使BGE的导电性提高，CS样品在移动到样品区带与BGE交界处时电场强度下降，从而使迁移速度变慢达到富集效果。离线富集方法中：利用CS是聚阴离子的特性，CS与季铵盐类阳离子型表面活性剂反应形成稳定的缔合物微粒，通过大体积萃取可实现离线富集。离线富集和在线富集结合进行富集的方法，相比于常规进样方法，富集倍数为130倍，常规分析方法为：BGE中没有加入NaCl，进样压力为0.5psi，进样时间为10s。通过对大堆积进样法、场放大结合大体积压力进样堆积法或场放大结合大体积电动进样堆积法进行研究，选择场放大结合大体积电动进样堆积法，实现提高检测的灵敏度。在本专利技术的一些实施方式中，在线富集中，BGE中的NaCl的浓度为10-30mmol/L；优选为10-20mmol/L。大体积压力进样和电动进样具有区别，压力进样不具有选择性，会导致大量样品基质的进入，可能会干扰分离和富集效果。电动进样可以选择性地只进入分析样品，而将样品基质排出在外，可获得较好的峰形和灵敏度。选择上述的NaCl的浓度范围，有利于提高富集效果。在本专利技术的一些实施方式中，场放大结合大体积电动进样堆积中，进样时间为60-420s；优选的，进样时间为300-420s。随着进样时间的延长，峰面积逐渐增大，在300s后，峰面积逐渐减小。在本专利技术的一些实施方式中，场放大结合大体积电动进样堆积中，碱浓度为27-108mmol/L；优选的，碱浓度为27-54mmol/L。碱浓度为CS水溶液和碱溶液混合后的溶液中的碱的浓度。当碱浓度为0时，峰型较差，加入碱后在上述范围内，有助于改善峰型。在27-54mmol/L范围内，具有较好的峰型。场放大结合大体积电动进样堆积法中，相比于常规进样方法，富集效果提高46.4倍，常规分析方法为，BGE中没有加入NaCl，进样压力为0.5psi，进样时间为10s。在本专利技术的一些实施方式中，季铵盐类阳离子型表面活性剂为氯化十六烷基吡啶，溴化十六烷基吡啶，十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)等；优选为十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)。在本专利技术的一些实施方式中，离线富集方法中，CTAC溶液的浓度为4g/mL，CTAC溶液与CS水溶液的体积比为1-1.5:10。CTAC溶液与CS水溶液的体积比即CTAC的用量影响富集效果。优选的，CTAC溶液与CS水溶液的体积比为1:10在本专利技术的一些实施方式中，硫酸溶液为98％硫酸和水的溶液，98％硫酸和水的体积比为1:9，CS水溶液与硫酸溶液的体积比为4-6:1；优选5:1。在本专利技术的一些实施方式中，离线富集方法中，NaCl溶液的浓度为4-6mol/L，CS水溶液与NaCl溶液的体积比为9-11:1；优选的，体积比为10:1，NaCl溶液的浓度为5mol/L。在本专利技术的一些实施方式中，醇沉中使用的乙醇与样品的体积比为5-10:1；优选为8-10:1；进一步优选为8:1。醇沉中使用的乙醇的量影响富集的效果，当体积比为5:2时，没有富集效果。在本专利技术的一些实施方式中，醇沉的次数为1-5次；优选为2-5次。醇沉的次数增加时，富集效果更好。在本专利技术的一些实施方式中，在线富集的电动进样的进样电压为-8～-12Kv；优选为-10Kv。在本专利技术的一些实施方式中，电泳条件为：检测波长200nm，电泳温度20-30℃，分离电压-10～-20Kv；优选的，电泳条件为：电泳温度25℃，分离电压-15Kv。在本专利技术的一些实施方式中，毛细管使用前先用0.1mol/L的NaOH进行活化，于20psi压力下冲洗，然后依次用超纯水、BGE于20psi压力下依次冲洗，最后在毛细管两端加高压运行，高压的电压值为20kV，BGE为20mmol/LNaH2PO4-90mmol/LEDA-NaCl-磷酸缓冲液(pH3.0)。第二方面，上述CS毛细管电泳分析方法在硫酸软骨素检测中的应用。本专利技术一个或多个技术方案具有以下有益效果：CS毛细管电泳分析方法可以对大分子物质CS进行准确的检测，富集效果较好，解决了大分子物质使用毛细管电泳分析方法富集效果不明显，导致检测效果较差的问题；CS毛细管电泳分析方法中，BGE中加入一定浓度的NaCl溶液，可使BGE的导电性提高，CS样品在移动到样品区带与BGE交界处时电场强度下降，从而使迁移速度变慢达到富集效果；将样品溶于低浓度碱溶液中，CS的电离度变大，带电荷更多，使更多样品进入毛细管中，有助于提高检测灵敏度；在离线富集方法中，利用季铵盐类阳离子型表面活性剂，与CS反应形成稳定的缔合物微粒，通过大体积萃取可实现离线富集；CS毛细管电泳分析方法对CS在1μg/mL～100μg/mL的峰面积符合线性回归方程，对CS的检测限为50n本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：将CS利用离线富集方法进行富集，然后利用场放大结合大体积电动进样堆积的方法进行进样；/n离线富集方法为：CS水溶液与季铵盐类阳离子型表面活性剂溶液混合，然后加入硫酸溶液，弃上清，向沉淀中加入NaCl，醇沉，分离沉淀和上清液，CS经醇沉后，将CS沉淀合并并用超纯水溶解得到富集液。/n将离线富集后的富集液配制得到CS碱溶液，在线富集采用场放大结合大体积电动进样的方法，BGE为20mmol/LNaH

【技术特征摘要】
1.一种CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：将CS利用离线富集方法进行富集，然后利用场放大结合大体积电动进样堆积的方法进行进样；
离线富集方法为：CS水溶液与季铵盐类阳离子型表面活性剂溶液混合，然后加入硫酸溶液，弃上清，向沉淀中加入NaCl，醇沉，分离沉淀和上清液，CS经醇沉后，将CS沉淀合并并用超纯水溶解得到富集液。
将离线富集后的富集液配制得到CS碱溶液，在线富集采用场放大结合大体积电动进样的方法，BGE为20mmol/LNaH2PO4-90mmol/LEDA-NaCl-磷酸缓冲液，pH3.0。


2.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：电动进样中，BGE中的NaCl的浓度为10-30mmol/L；优选为10-20mmol/L。


3.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：场放大结合大体积电动进样堆积中，进样时间为60-420s；优选的，进样时间为300-420s。


4.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：场放大结合大体积电动进样堆积中，碱浓度为27-108mmol/L；优选的，碱浓度为27-54mmol/L。


5.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：季铵盐类阳离子型表面活性剂为氯化十六烷基吡啶，溴化十六烷基吡啶，十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵；优选为十六烷基三甲基氯化铵。


6.如权利要求1述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：离线富集方法中...

【专利技术属性】
技术研发人员：周广连，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37