EB病毒有关疾病的体外鉴别诊断方法技术

本发明专利技术提供了一种ＥＢＶ相关病毒的体外鉴别诊断方法，其中使用了一组诊断上相关的抗原性ＥＢＶ多肽，这些抗原多肽通过ＤＮＡ重组技术产生，并具有ＥＢＶ相关蛋白的免疫学活性．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及到EB病毒有关疾病的体外鉴别诊断方法，其中使用了一组诊断上相关的EB病毒抗原多肽，这些多肽通过DNA重组技术产生，并具有EB病毒有关蛋白的免疫学活性。疱疹病毒是具套膜的十二面体衣壳，总直径为150毫微米。病毒基因组由一双链DNA组成，其分子量约为108。人类疱疹病毒有单式Ⅰ型疱疹病毒(“发热性疱疹”)、单式Ⅱ型疱疹病毒(生殖器疱疹)、水痘带状疱疹病毒(水痘，带形疱疹)、细胞巨化病毒(先天性异常，如头小畸形)、及EB病毒(EBV)。EBV导致的原发性疾病为传染性单核细胞增多症。它主要感染儿童和青年人。普通成人人口的90%以上受到EBV感染，并且EBV终身都留在外周B淋巴细胞中。该病毒在人的一生中都在腮腺中产生并通过口腔途径传播。在需要对白血病，或在器官移植情况下受体对移植物的排斥危象进行鉴别诊断时，明确而快速地鉴定传染性单核细胞增多症或急性EBV感染是特别重要的。在这些情况中，错误的诊断可能导致不正确的治疗，而这些不正确的治疗可能导致严重的甚至危及生命的后果。血清学研究提示EBV还极可能与人类继发性肿瘤，即与非洲伯克特氏(Burkitts)淋巴瘤(BL)和鼻咽癌(NPC)形成有关。明确而迅速地鉴定这种继发性疾病也是很重要的，因为NPC的早期检测可使之对其进行早期处理，这将会显著降低NPC的死亡率。在中国南方的某些地区及新加坡和马来西亚的华人中，NPC是最常见的人类肿瘤，发病率达每年每100，000人中有40人。在世界其它地区，如婆罗洲或突尼西亚发病率也很高。在大部分其它地区，发病率约为每年每100，000人中有0.2人，约占耳、鼻和喉(ENT)肿瘤的4%。在几乎所有的高发病率地区，病人的年龄分布显示在40至50岁左右有一清楚的单峰。对用于EBV有关疾病诊断的EBV有关基因产物的选择A.EBV感染初期产生抗病毒衣壳抗原(VCA)、早期抗原(EA)及EB核心抗原(EBNA)的抗体。在感染(单核细胞增多症)的急性期或初期，EBV感染B淋巴细胞。由于缺乏免疫反应，致使一些细胞进入溶解周期，并产生一系列病毒抗原，这些病毒抗原在细胞溶解时进入血流。为了抗这些抗原，宿主免疫系统将合成特异性抗体(表1)。表Ⅰ 2XLP代表缺乏免疫力宿主的实例1通过GP240/200的免疫沉淀确定(MA膜抗原)由于细胞因子阻碍EBV的表达，也许并非所有的B淋巴细胞都能受到完全的溶解性感染。在宿主的余生中，这些细胞潜在地携带着EBV基因组。B.恢复期抗EA抗体的消失及抗VCA和EBNA抗体的保留由于肌体的免疫防御机制而从循环中去掉溶解感染的细胞，恢复期的抗体水平将开始下降。一段时间后，抗EA抗体消失。然而，如上所述，EBV仍在腮腺中产生。病毒颗粒及包括EB在内的细胞内病毒相关抗原将进入唾液并到达口咽部。病毒颗粒在这儿与B淋巴细胞结合并作为抗原存在于体内，从而仍维持着抗VCA抗体的效价。由于EA不能与淋巴细胞结合，它将被蛋白酶降解，因此不能被免疫系统用作诱导抗体的抗原。被EBV潜在感染的循环淋巴细胞含有EBNA。在其生命周期之末，这些细胞将被分解，并将EBNA释放到血流中去。因此将保留有针对此抗原的抗体。这样，由于腮腺产生EBV及潜在感染的B细胞释放EBNA，恢复期的血清中将含有低水平的抗VCA及抗EBNA的IgG抗体(见前面表Ⅰ)。此外，极少数可能进入溶解周期的B淋巴细胞释放的EA，可能是抗原性很差的，故不能产生出本测试系统所能检测出的抗体水平。C.患有继发性NPC个体体内的EBV相关抗体抗原和抗体分类特异性检测方法的引入，尤其是对于抗EA及VCA两个抗原族的外周IgA抗体的确定，及至少对EA族进行再分类的第一次尝试(EA、D或R;G.Henle，W.Henle和G.Klein，”对EB病毒感染之细胞中早期抗原复合物两个不同组分的确定”，Int.J.Cancer，第8卷第272页(1971年))，显著地改善了检测方法的诊断及预防价值。在NPC的高发病区，1%的成人中具有EBV衣壳抗原(VCA)的IgA抗体。这些人中有百分之三经临床检查发现患有NPC，除那些极端的病例外，没有发现抗VCA IgA阴性病例。在抗VCA IgA阳性病例之外，三年随访中，患NPC的每年约1%。如果能使用高度特异性的自动读数的ELISA法来检测，则它将为寻找极端危险的群体，提供极好的“第一步”筛选的定量试验。EB病毒IgA/VCA抗体的检测有助于NPC的诊断，对早期阶段的检测尤其有价值。例如，在梧州市(中国，NPC高危险地区)，通过血清学方法作人群普查，检测NPC发病率的结果表明，Ⅰ期(42%)和Ⅱ期(48%)病人的百分数比在门诊病人中检测出的数值(1.7%为Ⅰ期，30%为Ⅱ期)高得多。存活机会显然与开始治疗的阶段有关，Ⅰ期病人的存活率(根据上海肿瘤医院)为93%，Ⅱ期为75%，更以后阶段的存活率是很低的。因此，通过早期检测和早期治疗可以降低NPC的死亡率。基于本方法，能从40%至70%的NPC病人中检测到EBV初期抗原复合物的IgA抗体。非带瘤群体中实质上不存在这些抗体。对带瘤个体的这种测试，对于决定开始治疗来说是极为重要的，如果能提高其灵敏度，使肿瘤病人的疾病检出率达到近100%，则其价值将会更大。联系到各类抗体出现的已知顺序，尤其是考虑到早期产生IgM抗体，然后产生IgG抗体，便可将EBV产生的各类抗原应用于EBV相关疾病的鉴别诊断中。然而，目前可用的检测系统主要基于细胞抗原或细胞衍生的抗原，因此其实用范围是极为有限的。这种限制的第一个原因，即由于含有大量非EBV蛋白，造成所述试验中非特异性本底反应过高。其次，由于必须按照复杂费时的多步过程从无菌细胞培养物中制备带有病毒抗原的细胞，则致使所述试验的费用很高。因此，本专利技术所涉及的技术问题即是要提供一个廉价、简洁、可靠而快速的体外鉴别诊断EBV有关疾病的方法，其中，检定了表明EBV感染不同阶段(表Ⅰ)的各类抗体。根据本专利技术，该技术问题的解决，是通过利用一组诊断上有关的抗原性EBV多肽完成的，这些多肽是借助DNA重组技术产生的，并具有EBV相关蛋白的免疫学活性。本文中的术语“免疫学活性”，是指所述EBV多肽至少含有一个抗原决定基，它能与识别相应的天然EBV相关蛋白抗原决定基的抗体产生交叉反应。在本专利技术一个较好的实施方案中，那组在诊断上相关的抗原EBV多肽至少包含一种早期抗原(EA)、一种病毒抗原(VCA)、一种膜抗原(MA)、一种EB核心抗原(EBNA)，含有或不含有一种被检测淋巴细胞的膜抗原(LYDMA)。上述EA的特殊实例是p90、p54、p110及p138。上述VCA的特殊实例是p143及p150。上述MA的一个特殊实例是gp250/350。上述EBNA-I的一个特殊实例是p72。上述LYDMA的一个特殊实例是P42。那组用于本专利技术目的在诊断上相关的抗原性EBV多肽，最好是包含有EBV相关蛋白p54和p138(EA)、p150(VCA)、gp250/350(MA)、及p72(EBNA-I)之免疫学活性的EBV多肽。在本专利技术一个较好的实施方案中，用于EBV有关疾病的体外鉴别诊断方法，是放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附法(ELISA)。用于本专利技术方法的具有EBV相关蛋白之本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＥＢＶ相关疾病的体外鉴别诊断方法，其特征在于，该方法使用了一组诊断上相关的抗原性ＥＢＶ多肽，这些抗原多肽通过ＤＮＡ重组技术产生，并具有ＥＢＶ相关蛋白的免疫学活性。

【技术特征摘要】
1.EBV相关疾病的体外鉴别诊断方法，其特征在于，该方法使用了一组诊断上相关的抗原性EBV多肽，这些抗原多肽通过DNA重组技术产生，并具有EBV相关蛋白的免疫学活性。2.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述一组诊断上相关的抗原性EBV多肽至少包含一种早期抗原(EA)、一种病毒衣壳抗原(VCA)、一种膜抗原(MA)、一种EB核心抗原(EBNA)，并任意地包含一种检测淋巴细胞的膜抗原(LYDMA)。3.根据权利要求1或2的方法，其特征在于，所述一组诊断上相关的抗原性EBV多肽，包含具有EBV相关蛋白p90、p54、p110和/或p138(EA)免疫学活性的EBV多肽。4.根据权利要求1或2的方法，其特征在于，所述一组诊断上相关的抗原性EBV多肽包含具有EBV相关蛋白p143和/或p150(VCA)之免疫学活性的EBV多肽。5.根据权利要求1或2的方法，其特征在于，所述一组诊断上相关的抗原性EBV多肽，包含具有EBV有关蛋白gp250/350(MA)之免疫学活性的EBV多肽。6.根据权利要求1或2的方法，其特征在于，所述一组诊断上相关的抗原性EBV多肽，包含具有EBV有关蛋白p72(EBNA-I)之免疫学活性的EBV多肽。7.根据权利要求1或2的方法，其特征在于，所述一组诊断上相关的EBV抗原多肽，包含具有EBV有关蛋白p42(LYDMA)之免疫学活性的EBV多肽。8.根据权利要求1或2的方法，其特征在于，所述一组诊断上相关的EBV抗原多肽，包含具有EBV有关蛋白p54和p138(EA)、p150(VCA)、gp250/350(MA)和p72(EBNA-I)之免疫学活性的EBV多肽。9.根据权利要求1至8中任何一项的方法，其特征在于，它是一种放射免疫测定法(RIA)或一种酶联免疫吸附法(ELISA)。10.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述具有EBV相关蛋白免疫学活性的诊断上相关的抗原性EBV多肽，是按...

【专利技术属性】
技术研发人员：翰斯J沃尔夫，
申请(专利权)人：翰斯J沃尔夫，
类型：发明
国别省市：DE[德国]