本申请公开了一种相关酶代谢活性检测试剂盒，包括所述相关酶对应的特异性探针，所述试剂盒用于检测相关酶代谢活性、检测至少两种相关酶代谢活性的比值中的至少一种。该试剂盒为肝癌高危人群的筛查及预测肝癌患者的预后提供了新的更准确、更灵敏的标准，对肝癌高危人群的筛查及肝癌防治具有重大的意义。本申请还提供了基于上述试剂盒的相关酶代谢活性及活性比值检测方法及该方法在筛查肝癌易感性和/或高危人群、肝癌患者预后评估中的应用，该应用准确性高、灵敏度优异，且易于操作，便于推广应用。
【技术实现步骤摘要】
一种相关酶代谢活性检测试剂盒及其应用
本申请涉及一种相关酶代谢活性检测试剂盒、基于其提供的相关酶代谢活性检测方法，及其在筛查肝癌易感性和/或高危人群、肝癌患者预后评估中的应用，属于检测、医疗健康领域。
技术介绍
肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是严重危害人类生命安全的疾病，它具有恶性度高、进展快、侵袭性强、预后差和死亡率高等特点。新近数据显示，世界范围内肝癌在恶性肿瘤导致的死亡中位居第三。我国每年新增肝癌患者13.5万人，死亡约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。目前治疗肝癌的方法主要包括手术切除、化疗、放疗等。由于临床上发现肝癌时大多在中晚期，上述治疗方法虽已取得很大进展，但因肝癌患者就诊时已错过最佳治疗时机，目前的治疗手段预后较差。因此，早期筛查、早期诊断及治疗是降低肝癌发病率、提高肝癌患者存活率的关键。另外，多数肝癌患者均经历了从慢性肝炎到肝硬化，最终发展为肝癌的病理演变过程。因此，在高危人群中筛查、发现早期肝癌，对于降低社会成本和医疗成本均具有重要意义。目前，临床上常见的与肝癌早期诊断及预后相关的指标主要包括：甲胎蛋白(AFP)、谷草转氨酶(AST)、凝血酶原时间(PT)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBIL)等。但以上指标在肝炎、肝硬化、肝癌患者中均可能有所改变，无法将慢性肝病和肝癌进行特异性地区分。如临床上广泛应用的AFP，其特异性约80％。但大量临床研究发现，3％～40％的肝癌患者直到发展为肝癌晚期，其血清中AFP水平并未显著升高；而部分肝硬化患者也会出现血清AFP水平高达1000U以上，但多次定期检查并未罹患肝癌。因此，目前诊断肝癌的方法缺乏较高的敏感度和特异性，已成为肝癌早期筛查、诊断及治疗的瓶颈。专利技术人在长期研究中发现，要想早期筛查肝癌高危人群、做到预防性诊治肝癌，需要突破常规的比较癌组织与癌旁组织的一贯性研究思路，转而筛查正常人肝组织及肝癌患者肝纤维化组织间的差异，用以寻找和开发癌症发生土壤(环境)中的特异性蛋白及其功能。目前尚未有通过测定人体内相关酶活性以筛查肝癌高危人群的应用；而肝癌早期筛查、早期诊断及治疗是降低肝癌发病率、提高肝癌患者存活率的关键，专利技术人拟通过测定人肝细胞色素P450酶CYP2E1和CYP2C8以筛查肝癌易感性和/或高危人群、肝癌患者预后评估中的应用，以期达到肝癌的早发现、早诊断和早治疗。
技术实现思路
根据本申请的一个方面，提供了一种相关酶代谢活性检测试剂盒，该试剂盒在相关酶代谢活性检测方面具有较高的灵敏度和特异性，易于操作，便于推广应用。所述相关酶代谢活性检测试剂盒，其特征在于，包括所述相关酶对应的特异性探针；所述试剂盒用于检测相关酶代谢活性、检测至少两种相关酶代谢活性的比值中的至少一种。可选地，所述试剂盒中包含用于检测相关酶代谢活性、检测至少两种相关酶代谢活性的比值中的至少一种的试剂。可选地，所述试剂盒中包含用于检测CYP2E1和CYP2C8代谢活性比值的试剂。可选地，所述相关酶为人肝脏细胞色素P450酶。可选地，所述相关酶包括CYP2E1、CYP2C8中的至少一种；所述CYP2E1为细胞色素P450酶2E1，所述CYP2C8为细胞色素P450酶2C8。可选地，所述CYP2E1包括肝微粒体CYP2E1、人体CYP2E1中的至少一种。可选地，所述CYP2C8包括肝微粒体CYP2C8、人体CYP2C8中的至少一种。可选地，所述至少两种相关酶代谢活性的比值包括：肝微粒体CYP2E1和CYP2C8代谢活性的比值、人体CYP2E1和CYP2C8代谢活性的比值中的至少一种。可选地，所述特异性探针包括CYP2E1参与代谢/转化的物质、CYP2C8参与代谢/转化的物质中的至少一种。可选地，所述特异性探针包括氯唑沙宗、4-硝基酚、苯胺、二乙基亚硝胺、紫杉醇、瑞格列奈、阿莫地喹、孟鲁司特、罗格列酮、吡格列酮中的至少一种。CYP2E1可以代谢或转化许多药物、化学试剂及内源性物质，如：氯唑沙宗、对乙酰氨基酚、氟西汀、茶碱、磺胺嘧啶、乙醇、4-硝基酚、1，3-丁二烯、苯、甲苯、氯仿、氯乙烯、二甲基亚硝胺、二乙基亚硝胺、丙酮、花生四烯酸。CYP2C8可参与许多药物及内源性物质的代谢转化，如：紫杉醇、阿莫地喹、瑞格列奈、孟鲁司特、吡格列酮、罗格列酮、西立伐他汀、布洛芬、环氧二十碳三烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸。作为一种具体的实施方式，所述CYP2E1的特异性探针包括氯唑沙宗、二乙基亚硝胺、4-硝基酚、苯胺中的至少一种，所述CYP2C8的特异性探针包括紫杉醇、瑞格列奈、阿莫地喹、孟鲁司特、罗格列酮、吡格列酮中的至少一种。作为一种具体的实施方式，所述CYP2E1的特异性探针为氯唑沙宗，所述CYP2C8的特异性探针为瑞格列奈。可选地，所述试剂盒包括：孵育体系；其中，所述孵育体系包括所述相关酶对应的特异性探针；或所述试剂盒包括125～1200mg氯唑沙宗、0.1～16mg瑞格列奈、2～10mg孟鲁司特钠、2～8mg罗格列酮、7.5～45mg吡格列酮中的至少一种。可选地，所述试剂盒包括氯唑沙宗片600mg和瑞格列奈4mg。可选地，所述孵育体系包括相关酶对应的特异性探针和缓冲液；所述缓冲液选自50～100mM磷酸盐缓冲液、50～100mMTris-HCL缓冲液中的一种；所述缓冲液的pH值为4.4～10.4。可选地，所述缓冲液的浓度为50～100mM。可选地，所述缓冲液的浓度为100mM。可选地，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、Tris-HCL缓冲液中的一种。可选地，所述缓冲液的pH值为7.4。可选地，所述孵育体系包括100mMpH7.4的磷酸盐缓冲液以及2.5～80μM的紫杉醇、0.78～100μM的二乙基亚硝胺、7.8～1000μM的氯唑沙宗、0.022～20μM的瑞格列奈、5～2000μM的4-硝基酚、5～6000μM的苯胺、0.1～200μM的阿莫地喹、0.025～50μM的孟鲁司特、0.25～1000μM的罗格列酮、2.06～5272μM的吡格列酮中的至少一种。可选地，所述孵育体系还包括还原型辅酶中的至少一种。可选地，所述孵育体系包括浓度为1mMNADPH或NADPH再生系统中的一种；其中NADPH再生系统包含1.3mMNADP+,3.3mM6-磷酸葡萄糖，0.4U/ml葡萄糖脱氢酶，3.3mM氯化镁可选地，所述试剂盒还包括：终止体系。所述终止体系包括乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈、甲醇、高氯酸中的至少一种。可选地，所述终止体系包括1mL乙酸乙酯、1mL二氯甲烷，100μL乙腈，100μL甲醇，10μL高氯酸中的至少一种。可选地，所述终止体系包括1mL乙酸乙酯、1mL二氯甲烷中、100μL乙腈中的至少一种。可选地，所述试剂盒包括：(a)2.5～80μM的紫杉醇、0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种相关酶代谢活性检测试剂盒，其特征在于，包括所述相关酶对应的特异性探针；/n所述试剂盒用于检测相关酶代谢活性、检测至少两种相关酶代谢活性的比值中的至少一种。/n
【技术特征摘要】
1.一种相关酶代谢活性检测试剂盒，其特征在于，包括所述相关酶对应的特异性探针；
所述试剂盒用于检测相关酶代谢活性、检测至少两种相关酶代谢活性的比值中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述相关酶包括CYP2E1、CYP2C8中的至少一种；
所述CYP2E1为细胞色素P450酶2E1，所述CYP2C8为细胞色素P450酶2C8；
优选地，所述至少两种相关酶代谢活性的比值包括：肝微粒体CYP2E1和CYP2C8代谢活性的比值、人体CYP2E1和CYP2C8代谢活性的比值中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性探针包括CYP2E1参与代谢/转化的物质、CYP2C8参与代谢/转化的物质中的至少一种；
优选地，所述特异性探针包括氯唑沙宗、二乙基亚硝胺、4-硝基酚、苯胺、紫杉醇、阿莫地喹、瑞格列奈、孟鲁司特钠、罗格列酮、吡格列酮中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包括：
孵育体系；
其中，所述孵育体系包括所述相关酶对应的特异性探针；或
所述试剂盒包括125～1200mg氯唑沙宗、0.1～16mg瑞格列奈、2～10mg孟鲁司特钠、2～8mg罗格列酮、7.5～45mg吡格列酮中的至少一种；
优选地，所述试剂盒包括氯唑沙宗片600mg和瑞格列奈4mg。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，步骤(1)中所述孵育体系包括相关酶对应的特异性探针和缓冲液；
所述缓冲液选自50～100mM磷酸盐缓冲液、50～100mMTris-HCL缓冲液中的一种；
优选地，所述缓冲液的浓度为100mM；
优选地，所述缓冲液的pH值为7.4；
优选地，所述孵育体系包括100mMpH7.4的磷酸盐缓冲液以及2.5～80μM的紫杉醇、0.78～100μM的二乙基亚硝胺、7.8～1000μM的氯唑沙宗、0.022～20μM的瑞格列奈、5～2000μM的4-硝基酚、5～6000μM的苯胺、0.1～200μM的阿莫地喹、0.025～50μM的孟鲁司特、0.25～1000μM的罗格列酮、2.06～5272μM的吡格列酮中的至少一种；
优选地，所述孵育体系还包括1mMNADPH或NADPH再生系统中的一种；
其中NADPH再生系统包含1.3mMNADP+,3.3mM6-磷酸葡萄糖，0.4U/ml葡萄糖脱氢酶，3.3mM氯化镁；
优选地，所述试剂盒还包括：
终止体系；
所述终...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔海灵，方艳，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。