在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α-淀粉酶的方法、重组启动子以及应用技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，具体涉及在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α‑淀粉酶的方法、重组启动子以及应用。本发明专利技术提供了一系列能高效表达耐高温α‑淀粉酶的组合启动子和信号肽，相对于对照启动子和信号肽组合，所有优化后的启动子与信号肽组合的耐高温α‑淀粉酶相对酶活均有一定的提高，杂合启动子与不同信号肽组合的高温α‑淀粉酶酶活力提高幅度更大，为工业化生产耐高温α‑淀粉酶奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α-淀粉酶的方法、重组启动子以及应用
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α-淀粉酶的方法、重组启动子以及应用。
技术介绍
α-淀粉酶是一种内切型淀粉酶，随机切割淀粉、糖原、寡糖或多聚糖分子内部的α-1,4葡萄糖苷键，产生麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等，是我国目前用途最广、产量最大的工业酶制剂种类之一，同时也是淀粉工业中最为重要的水解酶之一，广泛应用于淀粉加工、纸浆制造、纺织工业、酒精酿造及饲料加工等领域。α-淀粉酶根据作用的温度不同可分为耐高温α-淀粉酶、中温α-淀粉酶和低温α-淀粉酶三种类型。在淀粉糖工业制备中，由于一般是在105～118℃的高温环境下进行淀粉喷射液化，所以α-淀粉酶的热稳定性对下游产业的应用极为重要，目前，产耐高温α-淀粉酶的菌株主要是芽胞杆菌属的微生物，如地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌、嗜热脂肪芽胞杆菌等。工业上生产α-淀粉酶的主要菌种有解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、米曲霉和黑曲霉，其中，芽孢杆菌是耐高温α-淀粉酶的主要生产菌株本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α-淀粉酶的方法，其特征在于，所述包括以下步骤：/n构建蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌作为表达宿主；/n构建包含启动子和信号肽和高温α-淀粉酶基因的重组表达载体；/n将上述构建的重组表达在于转入所述蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌中，进行发酵培养，获得耐高温α-淀粉酶去，/n其中，所述启动子为核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的单启动子，或者，所述启动子为核苷酸序列如SEQID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO...

【技术特征摘要】
1.在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α-淀粉酶的方法，其特征在于，所述包括以下步骤：
构建蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌作为表达宿主；
构建包含启动子和信号肽和高温α-淀粉酶基因的重组表达载体；
将上述构建的重组表达在于转入所述蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌中，进行发酵培养，获得耐高温α-淀粉酶去，
其中，所述启动子为核苷酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5或SEQIDNO.6所示的单启动子，或者，所述启动子为核苷酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5或SEQIDNO.6所示的单启动子中的两个或多个组成的杂合启动子，
所述信号肽序列的核苷酸序列如SEQIDNO.7、SEQIDNO.8、SEQIDNO.9、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15或SEQIDNO.16所示。


2.根据权利要求1所述的在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α-淀粉酶的方法，其特征在于，所述杂合启动子为核苷酸序列如SEQIDNO.17，SEQIDNO.18，SEQIDNO.19或SEQIDNO.20所示的杂合启动子。


3.一种用于在枯草芽孢杆菌中高效表达耐高温α-淀粉酶的杂合启...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈稳，李阳源，刘金山，唐鸣雷，王勇，钟倩慧，邓敬阳，
申请(专利权)人：广东溢多利生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44