一种脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，属于生物医药技术领域。本发明专利技术的脐带间充质干细胞来源的外泌体通过对传代培养获得的脐带间充质干细胞进行超速离心提取和纯化得到，相较于现有外泌体提取方法，能够在较短时间内获得高纯度、高密度的具有生物学活性的外泌体。该方法操作简单、易于实现，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法
本专利技术实施例涉及生物医药
，具体涉及一种脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法。
技术介绍
间充质干细胞(Mesenchymalstemcells)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，源于发育早期的中胚层，主要存在于结缔组织和器官间质中，可以从骨髓、外周血、脂肪及皮肤等多种组织中获得。间充质干细胞属于非终末分化细胞，它既有间质细胞的特征，又有内皮细胞及上皮细胞的特征；作为一类多能干细胞，它在体外特定的诱导条件下，可以向骨、软骨、肌肉、肌腱、肝、脂肪、神经、内皮及胰岛样细胞等方向增殖分化。近年来研究发现，干细胞在培养过程中能够向培养基中分泌包含有多种生物活性物质的外泌体。外泌体是一种直径在30-150nm的双层囊泡结构，作为机体内细胞间的信号传递物质，外泌体中包含有microRNA、信号蛋白、活性肽和细胞因子等多种生物活性物质。且有大量研究表明，干细胞外泌体拥有良好的免疫调节和组织修复等功能，在治疗烧伤、慢性阻塞性肺疾病、呼吸系统损伤以及抗衰老等多种疾病方面具有极高的临床价值。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n培养：将P1-P10代脐带间充质干细胞接种在干细胞培养基中培养、待融合度达到80-90％后收集上清液，离心去除细胞碎片，得到包含外泌体的溶液；/n提取：使用0.22μm无菌过滤膜对所述包含外泌体的溶液进行过滤，所得滤液在0-20℃，50000-200000g离心30-90min，弃上清；/n纯化：用无菌PBS重悬，得到外泌体悬液，加入纯化液，颠倒混匀，0-20℃静置2-24h后，在0-20℃，2000-10000g离心0.5-4h，所得沉淀即为外泌体。/n

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
培养：将P1-P10代脐带间充质干细胞接种在干细胞培养基中培养、待融合度达到80-90％后收集上清液，离心去除细胞碎片，得到包含外泌体的溶液；
提取：使用0.22μm无菌过滤膜对所述包含外泌体的溶液进行过滤，所得滤液在0-20℃，50000-200000g离心30-90min，弃上清；
纯化：用无菌PBS重悬，得到外泌体悬液，加入纯化液，颠倒混匀，0-20℃静置2-24h后，在0-20℃，2000-10000g离心0.5-4h，所得沉淀即为外泌体。


2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，其特征在于，所述干细胞培养基为无动物源成分培养基。


3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，其特征在于，所述离心去除细胞碎片的步骤包括：在0-20℃，800-1200g离心25min，取上清液，在相同条件下再次离心30min，保留上清液，即为包含外泌体的溶液。


4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，其特征在于，所述纯化液通过以下方法获得：将15-30g聚乙二醇和3-10g氯化钠添加到80ml超纯水中，溶解混匀，定容至100ml。


5.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，其特征在于，纯化步骤中，所述无菌PBS和纯化液在使用前，进行0-20℃预冷处理；所述外泌体悬液和纯化液的体积比为1：0.25-4。


6.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，其特征在于，所述P1-P10代脐带间充质干...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海心，
申请(专利权)人：沈阳三禾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21